Pular para o conteúdo
Página inicialAplicativosGenômicaSequenciamento

Sequenciamento

Slide 1 of 3
1 of 3
Método de sequenciamento de DNA de Sanger
Método de sequenciamento de DNA de Sanger
Método de sequenciamento de DNA de Sanger

A capacidade de determinar a composição e a ordem dos ácidos nucleicos em uma fita de DNA ou RNA tem implicações profundas para a compreensão da genética moderna e de inúmeros campos essenciais para a pesquisa de doenças e para uma melhor compreensão de todos os organismos. A capacidade de sequenciar ácidos nucleicos não é útil apenas para decifrar o código genético de um organismo, mas também fornece aos pesquisadores uma ferramenta poderosa, em combinação com outras tecnologias moleculares, para manipular facilmente sequências de DNA e verificar essas alterações por meio do sequenciamento. Como o DNA codificador funciona como a informação codificada para as proteínas, os pesquisadores podem agora projetar proteínas recombinantes sob medida que contêm uma grande variedade de elementos funcionais e são amplamente utilizadas para responder a um número igualmente grande de importantes questões de pesquisa. Para obter mais reagentes e guias de sequenciamento do genoma completo, acesse o recurso de Sequenciamento de Próxima Geração.

Sequenciamento de Sanger

Desde o início, os métodos de química analítica já eram capazes de determinar a composição do ácido nucleico. No entanto, Fred Sanger e seus colegas desenvolveram métodos — inicialmente utilizando fragmentos digeridos marcados radioativamente e fracionamento bidimensional — para fornecer algumas das primeiras sequências nucleicas completas. Os avanços na área continuaram por várias décadas, com cada aprimoramento contribuindo para uma biblioteca cada vez maior de proteínas e genomas sequenciados. Esses aprimoramentos incluem a separação de nucleotídeos por comprimento por meio de eletroforese em gel, seguida de eletroforese capilar. Além disso, a incorporação de nucleotídeos marcados com fluorescência e a análise computadorizada automatizada de cada fragmento de ácido nucleico definem hoje o método moderno de sequenciamento de Sanger.

Metodologia de sequenciamento de DNA

Embora os métodos de sequenciamento de DNA tenham continuado a melhorar desde o surgimento dessa tecnologia, vários componentes fundamentais ainda são necessários e utilizados pelas plataformas modernas de sequenciamento de DNA. A preparação do DNA normalmente inclui o isolamento e a purificação do DNA do organismo hospedeiro. Componentes críticos adicionais, incluindo bases de DNA livres, primers de DNA, bases de DNA modificadas contendo marcadores fluorescentes (bases terminadoras) e DNA polimerase, são adicionados juntos em um único recipiente. O recipiente contendo todos esses componentes, por meio de uma série de etapas de aquecimento e resfriamento, produzirá uma biblioteca de pequenas sequências de DNA em relação à sequência completa de DNA de interesse, cada uma terminando com uma base terminadora marcada com fluorescência na extremidade. As novas fitas de DNA contendo os nucleotídeos marcados com fluorescência nas extremidades são separadas por comprimento, passam por um tubo capilar e são organizadas por tamanho. Em seguida, um laser é usado para excitar a base fluorescente em cada fita, enquanto uma câmera captura o sinal. Por fim, um computador é normalmente utilizado para montar as informações coletadas na sequência completa de DNA.

Pesquisa de documentos
Procurando informações mais específicas?

Acesse nossa ferramenta de busca de documentos para consultar fichas técnicas, certificados e documentação técnica.

Encontrar documentos
Artigos em destaque
Validating CRISPR/Cas9-mediated Gene Editing
Validate CRISPR gene editing experiments easily with Sigma-Aldrich® T7E1 mismatch detection kit, ensuring successful editing.
MULTI-seq Sample Multiplexing for Single Cell Analysis and Sequencing
Use of MULTI-seq lipid-modified oligos, protocol, and troubleshooting guide for PCR Assays and Sequencing applications.
Ultrapure vs. DEPC Treated Water for Molecular Biology Applications
Understand the benefits of ultrapure water versus DEPC treatment in DNA and RNA experiments to ensure high purity and integrity without risks.
Sequencing Primers
Versatile sequencing primers enable sequencing of inserts in plasmids at specific positions, aiding in molecular biology research.