Pruebas de esterilidad

Métodos de ensayo de esterilidad de productos farmacéuticos

Los ensayos de esterilidad de los productos farmacéuticos según las farmacopeas se rigen por las normas USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 y JP <4.06>, que exigen que las muestras se cultiven en dos medios distintos durante un periodo de incubación de 14 días. Se utilizan dos medios de cultivo para garantizar una cobertura exhaustiva de los microorganismos: el medio fluido de tioglicolato (FTM) para bacterias anaeróbicas y aeróbicas (incubado a 32,5 °C), y el medio de digestión de caseína de soja (SCDM), también denominado caldo de tripticasa y soja (TSB), para bacterias aeróbicas y hongos (incubado a 22,5 °C). Cualquier turbidez observada tras la incubación indica una posible contaminación microbiana y debe investigarse.

Se reconocen dos métodos de la farmacopea: la filtración por membrana y la inoculación directa. La elección del método depende de la naturaleza del producto, su formato de envase y sus propiedades fisicoquímicas. Cuando la naturaleza del producto lo permita, la filtración por membrana es el método de elección, tal y como establecen la USP <71>, la Ph. Eur. 2.6.1 y la JP <4.06>, debido a su mayor sensibilidad y a su capacidad para eliminar sustancias inhibidoras. La inoculación directa sigue siendo aplicable cuando la filtración no es viable.

Aunque el periodo de incubación de 14 días sigue siendo la norma de la farmacopea, los métodos microbiológicos rápidos (RMM) basados en la tecnología de bioluminiscencia del ATP gozan de una aceptación cada vez mayor por parte de las autoridades reguladoras para productos de vida útil corta, incluidas las terapias celulares y génicas. El nuevo capítulo de la USP <73> —«Métodos microbiológicos basados en la bioluminiscencia del ATP para la detección de contaminación en productos de vida útil corta»— proporciona un marco normativo claro para la adopción de los RMM y para la validación e implementación de esta tecnología, con entrada en vigor en agosto de 2025.

Independientemente del método seleccionado, los requisitos de integridad de los datos se aplican por igual a todos los flujos de trabajo de las pruebas de esterilidad: todos los datos de las pruebas deben ser totalmente trazables, estar preparados para una auditoría y cumplir con ALCOA++, el título 21 del CFR, parte 11, y el anexo 11 de la UE, desde la recepción de la muestra hasta el registro del resultado final.

Pruebas de esterilidad mediante filtración por membrana

La filtración por membrana es el método reglamentario de referencia para los productos farmacéuticos filtrables según la USP <71>, la Ph. Eur. 2.6.1 y la JP <4.06>. La muestra se hace pasar a través de un filtro de membrana de 0,45 µm, donde se retienen los microorganismos, que posteriormente se cultivan en medios adecuados.

Este método ofrece ventajas clave frente a la inoculación directa:

• Mayor sensibilidad: toda la muestra, o una muestra compuesta, se filtra a través de una única membrana
• Eliminación de inhibidores: los compuestos antimicrobianos, como los antibióticos o los conservantes, pueden eliminarse mediante enjuague antes de la incubación, lo que evita resultados falsos negativos
• Protección mediante sistema cerrado: los modernos dispositivos de filtración de sistema cerrado garantizan que el producto nunca quede expuesto al entorno durante el ensayo, lo que reduce significativamente el riesgo de contaminación externa y de resultados de ensayo no válidos

El uso de dispositivos de filtración por membrana de un solo uso y de sistema cerrado se considera una buena práctica en entornos de pruebas de esterilidad conformes a las BPF, tanto en campanas de flujo laminar como en aisladores.

Métodos microbiológicos rápidos (RMM) para ensayos de esterilidad

A medida que los marcos normativos evolucionan para adaptarse a la innovación, los métodos microbiológicos rápidos (RMM) están ganando aceptación como alternativas científicamente validadas a los ensayos de esterilidad tradicionales recogidos en los compendios. Los RMM son especialmente relevantes para productos con una vida útil corta —como las terapias celulares y génicas, los radiofármacos y los productos biológicos de vida útil corta—, en los que un periodo de incubación de 14 días es incompatible con los plazos de comercialización del producto o con los calendarios de tratamiento de los pacientes.

Entre las tecnologías de RMM más consolidadas, la bioluminiscencia de ATP detecta la luz emitida por microorganismos viables tras la reacción con un reactivo bioluminiscente, lo que permite una detección de la contaminación rápida, sensible y cuantitativa. A diferencia de los métodos tradicionales basados en la incubación, la bioluminiscencia de ATP sustituye la evaluación visual subjetiva de la turbidez por una medición cuantitativa basada en instrumentos, lo que permite una interpretación de los resultados más temprana y más reproducible.

La introducción de la norma USP <73> —«Métodos microbiológicos basados en la bioluminiscencia del ATP para la detección de contaminación en productos de vida útil corta»—, que entrará en vigor en agosto de 2025, supone un hito normativo significativo, ya que proporciona a los laboratorios un marco farmacopeico claro para implementar y validar las pruebas de esterilidad basadas en RMM. Esto se complementa con la norma USP <1071>, que ofrece una orientación más amplia sobre la implementación y validación de los métodos microbianos rápidos.

Los RMM son adecuados no solo para las pruebas de esterilidad del producto final, sino también para el control de la carga microbiana durante el proceso a lo largo de todo el flujo de trabajo de fabricación, lo que ofrece a los laboratorios una solución versátil y conforme a la normativa para múltiples aplicaciones de control de calidad.

El sistema Milliflex® Rapid System 2.0 cumple plenamente con los requisitos de la norma USP <73> y permite a su laboratorio implementar un flujo de trabajo de pruebas de esterilidad basado en RMM, validado y conforme a la normativa, que ofrece resultados en 5 días o menos.

Integridad y gobernanza de los datos en los ensayos de esterilidad

La fiabilidad de un resultado de una prueba de esterilidad depende de la calidad de los datos en los que se basa, y las agencias reguladoras de todo el mundo están situando la integridad de los datos en el centro del cumplimiento de las buenas prácticas de fabricación (GMP) en microbiología. Más allá de la metodología, se concede la misma importancia a la forma en que se generan, registran y mantienen los datos de las pruebas de esterilidad a lo largo de todo el ciclo de vida de la prueba. Los organismos reguladores, entre ellos la FDA, la EMA y la PMDA, exigen que todos los datos de laboratorio cumplan los principios ALCOA++: los datos deben ser atribuibles, legibles, contemporáneos, originales y precisos, con requisitos adicionales en cuanto a exhaustividad, coherencia y disponibilidad.

En EE. UU., el título 21 del CFR, parte 11, define los requisitos para los registros electrónicos y las firmas electrónicas, lo que hace que la documentación digital sea legalmente equivalente a los registros en papel. En Europa, el anexo 11 de la UE establece requisitos equivalentes para los sistemas informatizados en entornos de BPF. En conjunto, estas normativas establecen un marco claro para la integridad de los datos de los laboratorios de control de calidad, incluidas las pruebas de esterilidad: la captura de datos en tiempo real, la generación automática de registros de auditoría y la trazabilidad digital completa de principio a fin —desde la identificación del operador y los datos de los instrumentos hasta la información de las muestras y los resultados finales— son aspectos que las autoridades reguladoras exigen cada vez más durante las inspecciones de BPF y que se consideran buenas prácticas del sector. El software y la aplicación móvil M-Trace® ayudan a su laboratorio a cumplir estas expectativas normativas.