Přejít k obsahu
Merck
DomůAplikaceGenomikaZnačení a detekce nukleových kyselin

Značení a detekce nukleových kyselin

Metody a protokoly značení a detekce DNA a RNA

Škála metod značení a detekce nukleových kyselin, produktů PCR a oligonukleotidů se značně liší. Činidla a metody, které se často používají ke značení a detekci nukleových kyselin, jsou určeny několika faktory, včetně typu molekuly, která bude značena, a následné aplikace. Následně se ke značení nukleových kyselin používají enzymatické i chemické metody, které zahrnují různé molekuly, například fluorofory, enzymy a radioaktivní prvky.

Značení nukleových kyselin a sondy

Nukleové kyseliny lze značit v celé molekule nebo na 5' a 3' konci. Sondy nukleových kyselin jsou zvláště užitečné pro hybridizační testy, jako je detekce RNA v northern blotu nebo DNA v Southern blotu. K distribuci značky v celé sondě se používají různé metody značení, včetně PCR se značenými deoxynukleotidy (dNTP) nebo nukleotidtrifosfáty (NTP), náhodného primingu a překladu niklu. Značení na konci je zvláště užitečné pro testy zkoumající interakce nukleových kyselin s proteiny, aby se zabránilo sterickým překážkám.

Testy značení a detekce nukleových kyselin

V závislosti na metodě značení se u enzymově značených sond často používá kolorimetrická detekce, zatímco u radioaktivních sond je vhodná autoradiografická detekce. Mezi běžné sondy patří digoxigenin (DIG) a fluoresceinem značené sondy a lze je použít v kombinaci, která usnadňuje vícebarevnou detekci sond ve spojení s kolorimetrickými reakcemi (např. alkalická fosfatáza). Podobně je možné inkorporovat Biotin-16-dUTP pomocí PCR s většinou DNA polymeráz jako dodatečnou metodu značení a detekce. Fluorescenční in situ hybridizace (FISH) používá k detekci sekvencí DNA fluorescenční sondy a úspěšná detekce a následná analýza je částečně závislá na citlivosti a rozlišení fluorescenčního mikroskopu, který má výzkumník k dispozici.

Použití značené DNA a RNA

Přenos makromolekul na membrány na pevné fázi je znám jako blotování. Díky specifičnosti značených sond poskytuje hybridizace nukleové kyseliny a sondy výzkumníkům možnost detekovat sekvence DNA i RNA ve složitých směsích nukleových kyselin. Kromě toho tyto metody umožňují získat další cenné informace včetně analýzy genové exprese, velikosti mRNA a počtu kopií v závislosti na testu. Hybridizaci in situ výzkumníci také běžně používají k detekci jedné nebo více různě značených sond (např. sondy značené DIG a fluoresceinem).

Vyhledávání dokumentů
Hledáte konkrétnější informace?

Vyhledejte v našem vyhledávači dokumentů datové listy, certifikáty a technickou dokumentaci.

Vyhledat dokumenty
    Doporučené články
    Metody značení digoxigeninem (DIG)
    Metody a soupravy pro značení digoxigeninem (DIG) pro DNA a RNA DIG sondy, značení DNA s náhodným primedem, značení nick translací, značení 5' a 3' oligonukleotidů na konci.
    Bromid ethylnatý
    Ethidium bromid je dobře známé a široce používané fluorescenční barvivo v biotechnologickém výzkumu.
    Fluorescenční in situ hybridizace (FISH)
    Dostupné postupy, činidla a vybavení pro fluorescenční in situ hybridizaci (FISH).
    Methods Used to Detect Proteins and Nucleic Acids Bound to Membranes
    Background and protocols describing the various methods used by molecular biologists to detect samples of protein or nucleic acids bound to membranes.