qPCR
Kvantitativní PCR v reálném čase (qPCR) využívá fluorescenční reportérové molekuly, které umožňují kvantifikaci amplifikovaných produktů. Stejně jako u konvenční PCR dochází k amplifikaci templátu DNA, cDNA nebo RNA, avšak v každém cyklu jsou sledovány fluorescenční signály za účelem relativní nebo absolutní kvantifikace.
Tato technika je užitečná v mnoha oblastech výzkumu, včetně analýzy genové exprese, genotypizace, analýzy mikroRNA, analýzy genetických variací a analýzy proteinů.
Vybrané kategorie
Polymerázová řetězová reakce (PCR) je základním pilířem laboratoří molekulární biologie. PCR se používá k amplifikaci DNA o několik řádů a naše reagencie a zdroje jsou vhodné pro celou řadu výzkumných postupů, včetně analýzy genové exprese, genotypizace, sekvenování a aplikací v oblasti mutageneze.
Metody a protokoly molekulárního klonování a exprese proteinů pro spolehlivé klonování a stabilní expresi proteinů z vektorů určených k expresi proteinů hmyzu, bakterií a savců.
Epigenetická činidla a zdroje pro výzkum typů RNA, metylace DNA, modifikací chromatinu a modifikací histonů.
Komplexní analýza střevního mikrobiomu: Objevte komplexní řešení zahrnující přípravu vzorků, sekvenování, bioinformatiku a statistiku. Od 16S až po WGS.
Jak analyzovat data z qPCR
Měří se a kvantifikuje se fluorescence reportérových molekul; typicky se jedná buď o barviva (např. SYBR® Green, bromid etidiový), která se vkládají mezi báze v dvouvláknové DNA, nebo o sondy navržené tak, aby se vázaly na specifickou sekvenci (např. Molecular Beacons, sondy TaqMan®) na DNA.
Relativní kvantifikace dat z qPCR
Existují dvě hlavní metody kvantifikace dat z qPCR. Relativní kvantifikace, která je běžnější metodou, využívá informace ΔΔCt, pomocí nichž se určuje poměr exprese nebo abundance cílového genu ve vzorku ve srovnání s kontrolním genem a normalizuje se pomocí poměru exprese referenčního genu. Jelikož se hodnoty účinnosti E pro cílový a referenční gen liší, zohledňuje tato metoda také rozdíly v hodnotách E. Tato metoda se častěji používá při analýze genové exprese.
Absolutní kvantifikace dat z qPCR
Druhá metoda, absolutní kvantifikace, je běžnější v environmentální mikrobiologii a využívá standardní křivku (SC). Metoda SC využívá řadu ředění se známou koncentrací templátu N0 k vytvoření standardní křivky pomocí lineární regrese log(N0) vůči CT (prahový cyklus). Ta se poté použije k výpočtu koncentrací templátu ve vzorku. Základem této metody je předpoklad, že hodnota účinnosti vzorku je stejná jako hodnota účinnosti standardu.
Hledáte podrobnější informace?
Využijte naše vyhledávání dokumentů, kde najdete technické listy, certifikáty a technickou dokumentaci.
Související články
- Po dokončení tradiční PCR se analýza dat PCR/qPCR provádí rozlišením přes agarózový gel nebo nověji přes kapiláru.
- Polymerázová řetězová reakce v reálném čase umožňuje výzkumníkům odhadnout množství výchozího materiálu ve vzorku. Má mnohem širší dynamický rozsah analýzy než konvenční PCR.
- Průvodce testem PCR vás provede validací primerů a dalšími faktory optimalizace testu, aby byla zajištěna vysoká citlivost a specifičnost pro optimální kvantifikaci DNA/ RNA.
- Variabilita pracovního postupu PCR je ovlivněna zdrojem vzorku, reverzní transkripcí a návrhem testu, což má dopad na reprodukovatelnost.
- The purpose of Hot Start PCR is to inhibit the PCR reaction in order to reduce nonspecific amplification, prevent the formation of primer dimers, and increase product yields.
- Zobrazit vše (50)
Související protokoly
- Náš protokol SYBR Green qPCR je metoda určená k přesné kvantifikaci genové exprese a reakcí RT-PCR.
- Chromatin Immunoprecipitation qPCR for studying gene regulation across conditions.
- Primer Concentration Optimization Protocol creates reaction matrix for testing primer concentrations against various partners.
- Optimalizace podmínek qPCR je důležitá pro vývoj robustního testu. Dva hlavní přístupy jsou optimalizace koncentrace primerů a/nebo teploty žíhání.
- Multiplex qPCR employing probe-based chemistries is a demanding application that often requires extensive optimization and validation.
- Zobrazit vše (34)
Další články a postupy
Jak vám můžeme pomoci
V případě jakýchkoli dotazů prosím zašlete žádost
o podporu zákazníků nebo se obraťte na náš tým zákaznické podpory:
E-mailem na adresu custserv@sial.com
nebo telefonicky na čísle +1 (800) 244-1173
Další podpora
- Kalkulačky a aplikace
Web Toolbox - vědecké výzkumné nástroje a zdroje pro analytickou chemii, vědu o živé přírodě, chemickou syntézu a materiálovou vědu.
- Žádost o zákaznickou podporu
Zákaznická podpora včetně pomoci s objednávkami, produkty, účty a technickými problémy s webovými stránkami.
- Často kladené otázky
Projděte si naši sekci „Často kladené otázky“, kde najdete odpovědi na nejčastější dotazy týkající se našich produktů a služeb.