Metode pengujian pirogen

Tiga jenis pirogen digambarkan dengan warna biru, cyan, dan magenta dengan latar belakang kuning.

Pengujian pirogen bertujuan untuk menentukan jumlah pirogen dalam produk farmasi atau biofarmasi yang diberikan secara parenteral, dan diatur oleh sejumlah standar dari organisasi seperti Food and Drug Administration (FDA), United States Pharmacopeia (USP), atau European Pharmacopeia (EP). Kesterilan suatu produk tidak berarti bahwa produk tersebut bebas dari pirogen. Oleh karena itu, obat-obatan yang diklaim steril juga harus diuji pirogennya untuk mencegah reaksi demam pada pasien.

Kontaminasi pirogen dapat terjadi selama produksi atau pemberian obat-obatan, bioterapi, dan alat kesehatan, tetapi keberadaan pirogen juga dapat menjadi karakteristik bawaan produk, seperti adjuvan dalam vaksin atau lipopeptida sintetis.

Minta informasi

Kategori unggulan

Kotak putih bertuliskan “PyroMAT Kit Pyrogen Detection Assay” yang terbuka, dengan botol-botol kecil, vial, dan satu set reagen pada pelat 96 sumur yang tersusun di sekelilingnya.

Pengujian pirogen

Menjamin keamanan: Pengujian pirogen pada produk farmasi menggunakan Uji Aktivasi Monosit (MAT) untuk mendeteksi pirogen endotoksin dan non-endotoksin.

Lihat produk

Adegan laboratorium pengujian sterilitas yang canggih, dengan fokus pada alat digital yang dilengkapi selang. Di sekelilingnya terdapat berbagai botol berisi cairan dalam nuansa bening dan kuning kecokelatan, dilengkapi dengan cawan Petri yang berisi media berwarna biru, merah, dan transparan. Sebuah rak berisi tabung berpenutup merah mengisyaratkan adanya sampel yang telah disiapkan atau media kultur.

Bahan habis pakai, media, dan alat untuk pengujian sterilitas

Alat laboratorium dan bahan habis pakai untuk pengujian sterilitas dalam pengendalian mutu mikrobiologi: Media uji sterilitas, pompa, perangkat keras, dan aksesori.

Lihat produk

Seorang ilmuwan yang mengenakan APD lengkap sedang mengamati sebuah sampel di bawah mikroskop.

Apa itu pirogen?

Pirogen adalah zat yang menyebabkan kenaikan suhu tubuh (reaksi demam) pada manusia atau hewan melalui aktivasi sistem kekebalan bawaan. Pirogen merupakan kelompok kontaminan yang heterogen yang terdiri dari zat mikroba dan non-mikroba. Pirogen dapat diklasifikasikan menjadi dua kelompok: endotoksin dan pirogen non-endotoksin (NEP).

Endotoksin adalah zat yang terdapat pada bakteri Gram-negatif. Pirogen non-endotoksin adalah zat mikroba lainnya, termasuk yang berasal dari bakteri Gram-positif, virus, ragi, dan jamur. Zat pirogenik non-mikroba juga dapat berasal dari partikel karet, partikel plastik mikroskopis, atau senyawa logam dalam elastomer.

Tersedia beberapa metode uji untuk mendeteksi pirogen. Metode-metode tersebut dapat diklasifikasikan berdasarkan jenis kontaminan yang dideteksi, serta kebutuhan akan bahan hewani untuk melakukan uji tersebut sebagaimana dijelaskan dalam tabel di bawah ini:

Uji
pirogen pada kelinci

Uji pirogen pada kelinci (RPT) melibatkan pengukuran kenaikan suhu tubuh kelinci setelah pemberian produk yang diuji melalui injeksi intravena. RPT memberikan hasil kualitatif dan sensitivitasnya cukup rendah. Ketahanan uji ini juga terbatas, karena timbulnya toleransi pirogen pada kelinci setelah injeksi berulang, atau stres yang dialami kelinci saat uji dilakukan.

Catatan: Uji pirogen pada kelinci (RPT) kini dilarang di Eropa, dan Uji Aktivasi Monosit (MAT) merupakan metode pilihan untuk mendeteksi pirogen endotoksin maupun non-endotoksin.

Uji Aktivasi Monosit

Uji Aktivasi Monosit (MAT) merupakan alternatif bagi metode berbasis hewan untuk mendeteksi pirogen endotoksin maupun non-endotoksin. Uji aktivasi monosit meniru reaksi imun manusia dengan menginkubasi monosit bersama sampel yang diuji. Jika pirogen hadir, monosit akan teraktivasi dan menghasilkan molekul inflamasi, yaitu sitokin, yang bertanggung jawab atas reaksi demam. Sitokin tersebut kemudian dideteksi menggunakan uji imunologi (ELISA) yang melibatkan antibodi spesifik dan reaksi warna enzimatik.

Catatan: Mulai Juli 2025, Komisi Farmakope Eropa (Ph. Eur.) merekomendasikan penggunaan Uji Aktivasi Monosit (MAT) sebagai metode yang diutamakan untuk pengujian endotoksin dan pirogen non-endotoksin. Uji Pirogen Kelinci (RPT) kini dilarang di Eropa.

Baca artikel ini dan diskusikan lebih lanjut dengan para Ahli kami untuk beralih ke MAT dalam mendeteksi endotoksin dan pirogen non-endotoksin serta mengikuti tren regulasi.

Pengujian endotoksin bakteri (uji LAL)

Metode yang paling umum untuk pengujian endotoksin adalah uji lisat ameboosit Limulus (uji LAL); sebuah uji yang didasarkan pada lisat ameboosit dari darah kepiting tapal kuda. Lisat dari sel darah kepiting tapal kuda secara alami bereaksi dengan endotoksin bakteri dalam reaksi koagulasi. Metode ini memiliki sensitivitas tinggi untuk kuantifikasi endotoksin, tetapi tidak mendeteksi pirogen non-endotoksin.

Pengujian BET rekombinan (r-FC, r-CR)

Faktor C rekombinan adalah protein hasil rekayasa genetika yang biasanya ditemukan dalam kaskade lisat amebosit Limulus. Dalam uji ini, Faktor C bereaksi dengan endotoksin dan berikatan dengan penanda untuk menghasilkan produk akhir berfluoresensi yang dapat diukur. Uji Faktor C rekombinan menggunakan prinsip yang sama dengan uji LAL, namun tanpa memerlukan bahan yang berasal dari hewan.

Reagen Kaskade Rekombinan (r-CR) adalah reagen multi-komponen hasil rekayasa genetika yang merekonstruksi seluruh kaskade koagulasi yang terdapat dalam lisat amebosit Limulus. Dalam uji ini, protein-protein kaskade, yaitu Faktor C, Faktor B, dan enzim prokoagulan, bereaksi secara berurutan dengan endotoksin untuk menghasilkan produk akhir yang dapat diukur. Uji r-CR mereplikasi jalur LAL secara lengkap, namun tanpa memerlukan bahan yang berasal dari hewan.

Lihat semua produk