Pruebas de esterilidad

Los procedimientos de control de esterilidad se aplican a productos de muchos sectores, entre ellos el de la alimentación y las bebidas, pero los principales son los sectores farmacéutico y médico, donde el control de esterilidad de los productos sigue siendo una tarea fundamental y rutinaria para los microbiólogos.

• Métodos de ensayo de esterilidad farmacéutica
• Métodos de ensayo de esterilidad para productos sanitarios
• Flujo de trabajo de las pruebas de esterilidad

Métodos de ensayo de esterilidad farmacéutica

Los métodos de la farmacopea para las pruebas de esterilidad de productos farmacéuticos requieren que las muestras se cultiven en dos medios distintos. En las pruebas de esterilidad se utilizan dos tipos diferentes de medios de cultivo para favorecer el crecimiento de anaerobios residuales, así como de aerobios y hongos. El medio de tioglicolato líquido (FTM) se utiliza habitualmente para cultivar bacterias anaeróbicas y algunas aeróbicas, mientras que el medio de digestión de caseína de soja (SCDM) se utiliza habitualmente para cultivar hongos y bacterias aeróbicas. Las muestras se incuban durante 14 días a 32,5 °C y 22,5 °C, respectivamente, antes de su examen. Cualquier turbidez en los medios de cultivo puede indicar crecimiento y debe investigarse. Existen dos métodos recomendados para las pruebas de esterilidad de productos farmacéuticos: la filtración por membrana y la inoculación directa.

Prueba de esterilidad por filtración de membrana

La prueba de esterilidad por filtración de membrana es el método reglamentario de elección para los productos farmacéuticos filtrables, tal y como se cita en la USP <71>, la Farmacopea de la UE <2.6.1> y la Farmacopea de Japón <4.06>. Las muestras se pasan a través de un filtro de membrana de 0,45 µm en un cartucho de filtración y se añade medio de cultivo para su incubación. Este método de ensayo de esterilidad puede proporcionar una mayor sensibilidad en comparación con otros métodos, ya que toda la muestra, o una muestra compuesta, se pasa a través de un único filtro. La filtración también ofrece la oportunidad de eliminar componentes de la muestra que puedan causar turbidez o inhibir el crecimiento, como antibióticos o conservantes.

Prueba de esterilidad por inoculación directa

En la inoculación directa, se extrae asépticamente un pequeño volumen de muestra de la unidad de muestra y se inocula directamente en un volumen adecuado de medio de crecimiento antes de la incubación. Aunque es sencillo, este método de ensayo puede presentar algunas limitaciones significativas. Solo se pueden inocular pequeños volúmenes de producto en el medio de cultivo, lo que limita la sensibilidad de la prueba. Si la muestra parece turbia o opaca tras la inoculación, puede resultar difícil distinguir la turbidez del crecimiento microbiano al final del periodo de incubación. Además, si el producto tiene propiedades antimicrobianas, la muestra debe neutralizarse para que no se inhiba el crecimiento microbiano.

Métodos de ensayo de esterilidad para productos sanitarios

Se recomienda el ensayo de esterilidad por transferencia directa para el ensayo de esterilidad de los productos sanitarios. El producto que se va a ensayar está en contacto directo con el medio de ensayo durante todo el periodo de incubación, durante el cual cualquier microorganismo presente en el interior o en la superficie del producto crecerá y proliferará. Además, se prefiere el ensayo de esterilidad por lavado del producto para productos con tubos huecos, como los conjuntos de transfusión e infusión, en los que la vía de flujo del fluido está etiquetada como estéril. La luz del producto se lava con un líquido de enjuague, el eluido se filtra por membrana y se coloca en un medio adecuado para la incubación.

Flujo de trabajo de las pruebas de esterilidad

1. Preparación de la prueba: coloque el tubo del dispositivo de filtración por membrana en la bomba

2. Prehumectación del filtro: prehumedezca el dispositivo de filtración por membrana para optimizar la filtración y minimizar la adhesión del producto al filtro.

3. Filtración de la muestra: filtre una cantidad igual de producto en ambos recipientes. Los microorganismos quedan retenidos por un filtro con un tamaño de poro de 0,45 µm.

4. Enjuague: todos los compuestos inhibidores se eliminan mediante una solución de enjuague adecuada.

5. Llenado de los medios de cultivo: los dispositivos de filtración por membrana se llenan con medios de cultivo estériles TSB y FTM.

6. Tiempo de incubación: 14 días.

7. Resultados finales de la prueba: comprobación visual de turbidez/ausencia de turbidez.