Các phương pháp thử nghiệm chất gây sốt

Ba loại chất gây sốt được vẽ bằng các màu xanh dương, xanh lục nhạt và đỏ tươi trên nền màu vàng.

Thử nghiệm pyrogen nhằm xác định hàm lượng pyrogen trong các sản phẩm dược phẩm tiêm truyền hoặc sinh dược phẩm, và được quy định bởi một số tiêu chuẩn của các tổ chức như Cục Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ (FDA), Dược điển Hoa Kỳ (USP) hoặc Dược điển Châu Âu (EP). Sự vô trùng của một sản phẩm không có nghĩa là sản phẩm đó không chứa pyrogen. Do đó, các loại thuốc được cho là vô trùng cũng phải được kiểm tra pyrogen để ngăn ngừa phản ứng sốt ở bệnh nhân.

Ô nhiễm pyrogen có thể xảy ra trong quá trình sản xuất hoặc sử dụng dược phẩm, sinh phẩm trị liệu và thiết bị y tế, nhưng sự hiện diện của pyrogen cũng có thể là một đặc tính cố hữu của sản phẩm, chẳng hạn như chất bổ trợ trong vắc-xin hoặc lipopeptide tổng hợp.

Yêu cầu thông tin

Các danh mục nổi bật

Các chất gây sốt là những chất gây sốt, chủ yếu có nguồn gốc từ vi khuẩn hoặc các vi sinh vật khác như vi-rút, nấm men và nấm mốc.

Thử nghiệm chất gây sốt

Đảm bảo an toàn: Thực hiện thử nghiệm pyrogen đối với dược phẩm bằng phương pháp Thử nghiệm Kích hoạt Bạch cầu đơn nhân (MAT) để phát hiện endotoxin và các chất gây sốt không phải endotoxin.

Xem sản phẩm

Một khung cảnh phòng thí nghiệm kiểm tra vô trùng hiện đại, với tâm điểm là một thiết bị kỹ thuật số có hệ thống ống dẫn. Xung quanh là các lọ chứa chất lỏng với màu sắc trong suốt và màu hổ phách, cùng với các đĩa Petri chứa môi trường nuôi cấy màu xanh, đỏ và trong suốt. Một giá đựng các ống nghiệm nắp đỏ gợi ý đây là các mẫu đã được chuẩn bị sẵn hoặc môi trường nuôi cấy.

Vật tư tiêu hao, môi trường nuôi cấy và dụng cụ dùng trong thử nghiệm vô trùng

Thiết bị phòng thí nghiệm và vật tư tiêu hao dùng để kiểm tra độ vô trùng trong kiểm soát chất lượng vi sinh: Môi trường thử nghiệm độ vô trùng, máy bơm, thiết bị và phụ kiện.

Xem sản phẩm

Lọc vi sinh

Giảm thời gian chờ kết quả nhờ phương pháp xét nghiệm vi sinh nhanh chóng với hệ thống lọc màng hoàn chỉnh của chúng tôi; được ứng dụng trong xét nghiệm tải lượng vi sinh, phân tích thực phẩm và đồ uống, cũng như xét nghiệm vi sinh học cần sa.

Xem sản phẩm

A scientist wearing full PPE observes a sample on a microscope.

Pyrogen là gì?

Pyrogen là chất gây tăng nhiệt độ (phản ứng sốt) ở người hoặc động vật thông qua việc kích hoạt hệ miễn dịch bẩm sinh. Chúng là một nhóm tạp chất không đồng nhất bao gồm các chất vi sinh vật và phi vi sinh vật. Pyrogen có thể được phân loại thành hai nhóm: endotoxin và pyrogen phi endotoxin (NEP).

Endotoxin là các chất có trong vi khuẩn Gram âm. Các chất gây sốt không phải endotoxin là các chất vi sinh vật khác, bao gồm các chất có nguồn gốc từ vi khuẩn Gram dương hoặc virus, cũng như các chất gây sốt có nguồn gốc từ nấm men và nấm. Các chất gây sốt không phải vi sinh vật cũng có thể xuất phát từ các hạt cao su, các hạt nhựa siêu nhỏ hoặc các hợp chất kim loại trong chất đàn hồi.

Có một số phương pháp thử nghiệm để phát hiện chất gây sốt. Chúng có thể được phân loại dựa trên loại chất gây ô nhiễm mà chúng phát hiện và nhu cầu sử dụng vật liệu động vật để thực hiện thử nghiệm như được mô tả trong bảng dưới đây:

Thử nghiệm pyrogen
trên thỏ

Thử nghiệm pyrogen trên thỏ (RPT) bao gồm việc đo sự tăng nhiệt độ của thỏ sau khi tiêm tĩnh mạch sản phẩm được thử nghiệm. RPT cho kết quả định tính và độ nhạy khá thấp. Độ tin cậy của thử nghiệm cũng bị hạn chế do thỏ phát triển khả năng chịu đựng pyrogen sau nhiều lần tiêm lặp lại, hoặc do thỏ bị căng thẳng khi thực hiện thử nghiệm.

Lưu ý: Thử nghiệm pyrogen trên thỏ (RPT) hiện đã bị cấm ở châu Âu, và Thử nghiệm kích hoạt bạch cầu đơn nhân (MAT) là phương pháp được lựa chọn để phát hiện cả pyrogen nội độc tố và phi nội độc tố.

Thử nghiệm kích hoạt bạch cầu đơn nhân

Thử nghiệm kích hoạt bạch cầu đơn nhân (MAT) là một phương pháp thay thế cho các phương pháp dựa trên động vật để phát hiện cả pyrogen endotoxin và non-endotoxin. Thử nghiệm kích hoạt bạch cầu đơn nhân mô phỏng phản ứng miễn dịch của con người bằng cách ủ bạch cầu đơn nhân với mẫu thử. Nếu có pyrogen, bạch cầu đơn nhân sẽ được kích hoạt và sản xuất các phân tử gây viêm, cytokine, chịu trách nhiệm cho phản ứng sốt. Các cytokine sau đó được phát hiện bằng phương pháp xét nghiệm miễn dịch (ELISA) sử dụng kháng thể đặc hiệu và phản ứng màu enzym.

Lưu ý: Kể từ tháng 7 năm 2025, Ủy ban Dược điển Châu Âu (Ph. Eur.) khuyến nghị sử dụng Thử nghiệm Kích hoạt Bạch cầu đơn nhân (MAT) làm phương pháp ưu tiên để kiểm tra chất gây sốt. Thử nghiệm Chất gây sốt trên Thỏ (RPT) hiện đã bị cấm ở Châu Âu.

Đọc bài viết và thảo luận thêm với các Chuyên gia của chúng tôi để chuyển sang sử dụng MAT phát hiện endotoxin và các chất gây sốt không phải endotoxin, đồng thời tuân thủ xu hướng quy định.

Kiểm tra endotoxin vi khuẩn (thử nghiệm LAL)

Phương pháp phổ biến nhất để kiểm tra endotoxin là thử nghiệm Limulus amoebocyte lysate (thử nghiệm LAL); một phương pháp thử nghiệm dựa trên chất lysate từ tế bào amoebocyte trong máu cua ngựa. Chất lysate từ tế bào máu cua ngựa phản ứng tự nhiên với endotoxin vi khuẩn trong phản ứng đông máu. Phương pháp này có độ nhạy cao trong việc định lượng endotoxin, nhưng không phát hiện được các chất gây sốt không phải endotoxin.

Xét nghiệm Yếu tố C tái tổ hợp (rFC)

Yếu tố C tái tổ hợp là một protein được biến đổi gen, thường có trong chuỗi phản ứng lysate tế bào amebocyte Limulus. Trong thử nghiệm này, Yếu tố C phản ứng với endotoxin và kết hợp với một chất đánh dấu để tạo ra một sản phẩm cuối có thể định lượng được và phát huỳnh quang. Thử nghiệm Yếu tố C tái tổ hợp sử dụng nguyên lý tương tự như thử nghiệm LAL, nhưng không cần sử dụng vật liệu có nguồn gốc từ động vật.

Xem tất cả sản phẩm