Các phương pháp thử nghiệm chất gây sốt

Ba loại chất gây sốt được vẽ bằng các màu xanh dương, xanh lục nhạt và đỏ tía trên nền màu vàng.

Thử nghiệm pyrogen nhằm xác định hàm lượng pyrogen trong các sản phẩm dược phẩm tiêm truyền hoặc sinh dược phẩm, và được quy định bởi một số tiêu chuẩn của các tổ chức như Cục Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm (FDA), Dược điển Hoa Kỳ (USP) hoặc Dược điển Châu Âu (EP). Sự vô trùng của một sản phẩm không có nghĩa là sản phẩm đó hoàn toàn không chứa pyrogen. Do đó, các loại thuốc được cho là vô trùng cũng phải được kiểm tra pyrogen để ngăn ngừa phản ứng sốt ở bệnh nhân.

Sự nhiễm pyrogen có thể xảy ra trong quá trình sản xuất hoặc sử dụng dược phẩm, sinh phẩm trị liệu và thiết bị y tế, nhưng sự hiện diện của pyrogen cũng có thể là một đặc tính cố hữu của sản phẩm, chẳng hạn như chất bổ trợ trong vắc-xin hoặc lipopeptide tổng hợp.

Yêu cầu thông tin

Các danh mục nổi bật

Các chất gây sốt là những chất gây ra sốt, chủ yếu có nguồn gốc từ vi khuẩn hoặc các vi sinh vật khác như vi-rút, nấm men và nấm mốc.

Thử nghiệm chất gây sốt

Đảm bảo an toàn: Thử nghiệm pyrogen đối với dược phẩm bằng phương pháp Thử nghiệm Kích hoạt Bạch cầu đơn nhân (MAT) để phát hiện các chất gây sốt thuộc nhóm endotoxin và không thuộc nhóm endotoxin.

Xem các sản phẩm

Một khung cảnh phòng thí nghiệm kiểm tra vô trùng hiện đại, lấy trung tâm là một thiết bị kỹ thuật số có hệ thống ống dẫn. Xung quanh là các lọ chứa chất lỏng với màu sắc trong suốt và màu hổ phách, kết hợp cùng các đĩa Petri chứa môi trường nuôi cấy màu xanh, đỏ và trong suốt. Một giá đựng các lọ có nắp màu đỏ gợi ý đây là các mẫu đã được chuẩn bị sẵn hoặc môi trường nuôi cấy.

Vật tư tiêu hao, môi trường nuôi cấy và dụng cụ dùng trong thử nghiệm vô trùng

Các thiết bị phòng thí nghiệm và vật tư tiêu hao dùng để kiểm tra độ vô trùng trong kiểm soát chất lượng vi sinh: Môi trường thử nghiệm độ vô trùng, máy bơm, thiết bị và phụ kiện.

Xem các sản phẩm

Một nhà khoa học mặc đầy đủ trang phục bảo hộ cá nhân đang quan sát một mẫu vật dưới kính hiển vi.

Pyrogen là gì?

Pyrogen là chất gây tăng nhiệt độ (phản ứng sốt) ở người hoặc động vật thông qua việc kích hoạt hệ miễn dịch bẩm sinh. Chúng là một nhóm tạp chất không đồng nhất, bao gồm các chất có nguồn gốc vi sinh vật và không có nguồn gốc vi sinh vật. Pyrogen có thể được phân loại thành hai nhóm: endotoxin và pyrogen không phải endotoxin (NEP).

Endotoxin là các chất có trong vi khuẩn Gram âm. Các chất gây sốt không phải endotoxin là các chất vi sinh vật khác, bao gồm những chất có nguồn gốc từ vi khuẩn Gram dương, vi-rút, nấm men và nấm. Các chất gây sốt phi vi sinh vật cũng có thể xuất phát từ các hạt cao su, các hạt nhựa siêu nhỏ hoặc các hợp chất kim loại trong chất đàn hồi.

Có một số phương pháp thử nghiệm để phát hiện các chất gây sốt. Các phương pháp này có thể được phân loại dựa trên loại chất gây ô nhiễm mà chúng phát hiện, cũng như yêu cầu sử dụng vật liệu động vật để thực hiện thử nghiệm, như được mô tả trong bảng dưới đây:

Thử
nghiệm pyrogen trên thỏ

Thử nghiệm pyrogen trên thỏ (RPT) bao gồm việc đo sự tăng nhiệt độ của thỏ sau khi tiêm tĩnh mạch sản phẩm được thử nghiệm. RPT cho kết quả định tính và độ nhạy khá thấp. Độ tin cậy của thử nghiệm cũng bị hạn chế do thỏ phát triển khả năng chịu đựng pyrogen sau nhiều lần tiêm lặp lại, hoặc do thỏ bị căng thẳng khi thực hiện thử nghiệm.

Lưu ý: Thử nghiệm pyrogen trên thỏ (RPT) hiện đã bị cấm ở châu Âu, và Thử nghiệm kích hoạt bạch cầu đơn nhân (MAT) là phương pháp được lựa chọn để phát hiện cả pyrogen nội độc tố và phi nội độc tố.

Thử nghiệm Kích hoạt Bạch cầu đơn nhân

Thử nghiệm Kích hoạt Bạch cầu đơn nhân (MAT) là một phương pháp thay thế cho các phương pháp sử dụng động vật để phát hiện cả pyrogen endotoxin và non-endotoxin. Thử nghiệm kích hoạt bạch cầu đơn nhân mô phỏng phản ứng miễn dịch của con người bằng cách ủ bạch cầu đơn nhân với mẫu thử. Nếu có pyrogen, bạch cầu đơn nhân sẽ được kích hoạt và sản sinh các phân tử gây viêm, tức là các cytokine, chịu trách nhiệm gây ra phản ứng sốt. Các cytokine sau đó được phát hiện bằng phương pháp xét nghiệm miễn dịch (ELISA) sử dụng kháng thể đặc hiệu và phản ứng màu enzym.

Lưu ý: Kể từ tháng 7 năm 2025, Ủy ban Dược điển Châu Âu (Ph. Eur.) khuyến nghị sử dụng Thử nghiệm Kích hoạt Bạch cầu đơn nhân (MAT) làm phương pháp ưu tiên để kiểm tra endotoxin và các chất gây sốt không phải endotoxin. Thử nghiệm Chất gây sốt trên Thỏ (RPT) hiện đã bị cấm tại Châu Âu.

Hãy đọc bài viết và thảo luận thêm với các Chuyên gia của chúng tôi để chuyển sang sử dụng phương pháp MAT phát hiện chất gây sốt nội độc tố và phi nội độc tố, đồng thời tuân thủ xu hướng quy định hiện hành.

Xét nghiệm endotoxin vi khuẩn (xét nghiệm LAL)

Phương pháp phổ biến nhất để kiểm tra endotoxin là thử nghiệm dịch chiết tế bào amip Limulus (thử nghiệm LAL); một phương pháp thử nghiệm dựa trên dịch chiết tế bào amip từ máu cua ngựa. Dịch chiết từ tế bào máu cua ngựa phản ứng tự nhiên với endotoxin vi khuẩn trong phản ứng đông máu. Phương pháp này có độ nhạy cao trong việc định lượng endotoxin, nhưng không phát hiện được các chất gây sốt không phải endotoxin.

Xét nghiệm BET tái tổ hợp (r-FC, r-CR)

Yếu tố C tái tổ hợp là một protein được thiết kế gen, vốn có trong chuỗi phản ứng của dịch chiết tế bào amip Limulus. Trong thử nghiệm này, Yếu tố C phản ứng với endotoxin và kết hợp với một chất đánh dấu để tạo ra sản phẩm cuối cùng có thể định lượng được và phát huỳnh quang. Thử nghiệm Yếu tố C tái tổ hợp sử dụng nguyên lý tương tự như thử nghiệm LAL, nhưng không cần sử dụng vật liệu có nguồn gốc từ động vật.

Chất phản ứng chuỗi phản ứng tái tổ hợp (r-CR) là một chất phản ứng đa thành phần được thiết kế gen, tái tạo toàn bộ chuỗi phản ứng đông máu có trong dịch chiết tế bào amip Limulus. Trong thử nghiệm này, các protein của chuỗi phản ứng, bao gồm Yếu tố C, Yếu tố B và enzym tiền đông máu, phản ứng tuần tự với endotoxin để tạo ra sản phẩm cuối cùng có thể định lượng được. Xét nghiệm r-CR tái tạo toàn bộ con đường LAL, nhưng không cần sử dụng vật liệu có nguồn gốc từ động vật.

Xem tất cả sản phẩm