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PCR DIG Probe Synthesis Kit

sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)

• Synonym(e): DIG-System, Sonde
• UNSPSC Code: 41105500
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• usage: sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)
• manufacturer/tradename: Roche
• technique(s): PCR: suitable
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

General description

Das PCR DIG Probe Synthesis Kit enthält eine Formulierung von alkalilabilem Digoxigenin-11Desoxyuridin-Triphosphat (dUTP) (Digoxigenin = DIG). Dieses Kit dient zur praktischen und effizienten Herstellung von DIG-markierten DNA-Sonden, die bei der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) hochempfindlich sind. Die Sonden sind gemäß PCR-Methode mit DIG-11dUTP (alkalilabil) markiert. Das Verhältnis DIG-dUTP:dTTP ist 1:2.
Das PCR DIG Probe Synthesis Kit enthält den DNA-Polymerase-Mix Expand High Fidelity. Dieser robuste Enzym-Mix mit Korrekturlese-Aktivität polymerisiert Sonden mit einer Länge von 40 bp bis 5 kb unter Verwendung von 10 pg Plasmid-DNA und 10 ng genomischer DNA als Template. Diese DIG-markierten Sonden bleiben über ein Jahr lang stabil.

Application

Mit dem PCR DIG Probe Synthesis Kit erzeugte digoxigenin-markierte (DIG-markierte) DNA-Sonden sind zum Nachweis von Genen in niedriger (oder einfacher) Kopienzahl in seltener mRNA in Southern und Northern Blots geeignet. DIG-markierte DNA-Sonden werden auch zur Markierung von DNA bei der In-situ-Hybridisierung verwendet.
Die Konzentration des gelieferten dUTP-Nukleotid-Mixes kann entsprechend der Sondenlänge angepasst werden. Die Wirksamkeit der Markierung kann schnell auf einem Agarosegel bestimmt werden.
Membran-Stripping und Membran-Resondierung ist mehrmals möglich, wenn das Protokoll in der Packungsbeilage befolgt wird.
Eine PCR-Markierungsreaktion (50 μl) ergibt normalerweise genügend Sonde für 20 ml Hybridisierungslösung. Das Kit kann für ungefähr 25 Reaktionen (50 μl) verwendet werden.

Packaging

1 Kit mit 6 Komponenten.

Analysis Note

Jede Charge des PCR DIG Probe Synthesis Kit wird einem Funktionstest mit PCR unterzogen. Amplifikationsprodukte werden in genomischen Southern Blots getestet.
Mit der Kontrollreaktion wird unter den in dieser Packungsbeilage beschriebenen PCR-Bedingungen ein Amplifikationsprodukt mit 442 bp hergestellt. Aufgrund mehrfachen Einbaus von DIG-dUTP während des PCR-Prozesses haben die PCR-Produkte im Vergleich zu dem nicht markierten PCR-Produkt ein wesentlich höheres Molekulargewicht. Nach der Hybridisierung des PCR-Produkts auf 10 μg menschlicher genomischer DNA und dem anschließenden Chemilumineszenz-Nachweis wird ein spezifisches Fragmentmuster nachgewiesen.

Other Notes

Gewinner des CiteAb Award 2024 in der Kategorie „Supplier Succeeding in Parkinson′s Research“ (Erfolgreiche Anbieter in der Parkinson-Forschung)

Nur Kit-Komponenten

• Enzyme Mix, Expand High Fidelity 3.5 U/μl
• PCR DIG Probe Synthesis Mix, containing dATP, dCTP, dGTP (2 mM each) 10x concentrated
• PCR Buffer with MgCl₂ 10x concentrated
• dNTP Stock Solution, containing dATP, dCTP, dGTP, dTTP (2 mM each), pH 7.0 10x concentrated
• Control Template, plasmid DNA in Tris/EDTA buffer, pH 8.0. The 5-kb plasmid contains the cDNA for the human tissue-type plasminogen activator (tPA) 20 pg/μl
• Control PCR Primer Mix, containing 50 pmol of each primer, control PCR primer 1 and 2 2 mM each

Sicherheitshinweise

• Gefahrencodes: H412
• Sicherheitshinweise: P273 - P501
• Hazard Classifications: Aquatic Chronic 3
• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• Was ist los?: WGK 2
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash