KAPA2G Fast Multiplex Mix

Name: KAPA2G Fast Multiplex Mix
Brand: ROCHE

suitable for PCR, 2 ×

Synonym(e):

Multiplex, Multiplex-PCR, PCR

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Über diesen Artikel

NACRES:

NA.55

UNSPSC Code:

41106300

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Eigenschaften

shelf life

≤12 mo.

packaging

kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5801), kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5802)

manufacturer/tradename

Roche

concentration

2 ×

technique(s)

PCR: suitable, whole genome amplification: suitable

storage temp.

−20°C

Beschreibung

General description

KAPA2G Fast Multiplex PCR-Kits enthalten ein Enzym der zweiten Generation (2G), das durch gerichtete Evolution gewonnen wird. Die KAPA2G FAST HotStart^® DNA-Polymerase ist eine antikörpervermittelte HotStart-Formulierung, die speziell für eine erhöhte Prozessivität und Geschwindigkeit entwickelt wurde und im Vergleich zur Wildtyp-Taq-DNA-Polymerase wesentlich kürzere Extensionszeiten bietet. Neben der Schnelligkeit liefert KAPA2G Fast höhere Ausbeuten und bessere Sensitivität als Enzyme anderer Hersteller, wodurch eine einheitlichere Multiplex-PCR möglich ist.
Die KAPA2G Fast HotStart PCR-Kits wurden speziell für die Durchführung von Fast-PCR-Assays entwickelt, die 20–70 % kürzere Reaktionszeiten aufweisen als herkömmliche, mit Wildtyp-Taq-DNA-Polymerase durchgeführte PCR-Assays. Die Reaktionsleistung wird dabei in keiner Weise beeinträchtigt und es werden keine speziellen PCR-Verbrauchsmaterialien oder Thermocycler benötigt.

Application

KAPA2G Fast Multiplex Mix wird wie folgt verwendet:

Typisierung von transgenen Organismen
Amplifikation von Mikrosatelliten
Typisierung und Nachweis von Pathogenen
Amplifikation mehrerer DNA-Fragmente für die Einzelnukleotidpolymorphismus(SNP)-Genotypisierung
Semiquantitative PCR
Triplex-PCR

Biochem/physiol Actions

Mit KAPA2G Fast DNA-Polymerase erzeugte DNA-Fragmente haben die gleichen Eigenschaften wie DNA-Fragmente, die mit Wildtyp-Taq-DNA-Polymerase erzeugt werden. Sie können für die Sequenzierung und Klonierung sowie zum Restriktionsenzymverdau verwendet werden. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Fast eine 5‘→3‘-Polymerase- und 5‘→3‘-Exonuklease-Aktivität, jedoch keine 3‘→5‘-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität auf. Die Genauigkeit von KAPA2G Fast ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 10⁵ einbezogenen Nukleotiden. Mit KAPA2G Fast erzeugte PCR-Produkte haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren kloniert werden.

Features and Benefits

Verbesserte Sensitivität, Spezifität und Ausbeute

Einheitliche Repräsentation aller Amplikons
Erfolgreiche Multiplex-PCR mit schwierigen, GC-reichen Targets

Höhere Geschwindigkeit ohne Leistungseinbußen

60 % geringere Zykluszeit
Extensionszeiten von nur 15 Sekunden

Einige Anmerkungen:

KAPA2G Fast Multiplex Mix enthält die speziell für eine schnelle und effiziente Multiplex-PCR entwickelte KAPA2G Fast HotStart DNA-Polymerase.
KAPA2G Fast Multiplex Mix enthält einen für Multiplex-PCR optimierten Puffer mit jeweils 0,2 mM dNTP und 3 mM MgCl₂ (bei 1X).
0,2 μM von jedem Primer und 10-100 ng Template-DNA pro Reaktion verwenden.
Eine Annealingdauer von 30 Sekunden bei 60 °C verwenden.
Die Extensionsdauer beträgt 15 Sekunden und muss für längere Amplikons und/oder stark multiplexe Reaktionen verlängert werden.

Preparation Note

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die Langzeitaufbewahrung sollte bei -20 °C erfolgen. Vorausgesetzt, dass der ReadyMix sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert wurde, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur belassen wird. Eine langzeitige Lagerung bei Raumtemperatur und 4 °C wird nicht empfohlen. Hinweis: Reagenzien, die bei Temperaturen über -20 °C gelagert werden, sind bei einer Kontaminierung während der Verwendung wesentlich anfälliger für eine Zersetzung. Die Lagerung bei nicht empfohlenen Temperaturen erfolgt daher auf Risiko des Anwenders.

Analysis Note

Jede Charge der KAPA2G Fast HotStart DNA-Polymerase enthält nachweislich <2 % kontaminierendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). KAPA2G Fast Multiplex PCR-Kits werden strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.