Testes de esterilidade

Os procedimentos de teste de esterilidade são aplicados a produtos em diversos setores, incluindo os fabricantes de alimentos e bebidas, mas os principais setores são o farmacêutico e o médico, onde o teste de esterilidade dos produtos continua sendo uma tarefa essencial e rotineira para os microbiologistas.

• Métodos de teste de esterilidade farmacêutica
• Métodos de teste de esterilidade para dispositivos médicos
• Fluxo de trabalho dos testes de esterilidade

Métodos de teste de esterilidade farmacêutica

Os métodos farmacopéicos para o teste de esterilidade de produtos farmacêuticos exigem que as amostras sejam cultivadas em dois meios separados. Dois tipos diferentes de meios de cultura são utilizados nos testes de esterilidade para promover o crescimento de anaeróbios residuais, bem como de aeróbios e fungos. O meio de tioglicolato líquido (FTM) é normalmente utilizado para cultivar bactérias anaeróbicas e algumas aeróbicas, enquanto o meio de digestão de caseína de soja (SCDM) é normalmente utilizado para cultivar fungos e bactérias aeróbicas. As amostras são incubadas por 14 dias a 32,5 °C e 22,5 °C, respectivamente, antes do exame. Qualquer turbidez nos meios de cultura pode indicar crescimento e deve ser investigada. Existem dois métodos recomendados de teste de esterilidade para produtos farmacêuticos: filtração por membrana e inoculação direta.

Teste de esterilidade por filtração por membrana

O teste de esterilidade por filtração por membrana é o método regulatório de escolha para produtos farmacêuticos filtráveis, conforme citado na USP <71>, na Farmacopeia da UE <2.6.1> e na Farmacopeia JP <4.06>. As amostras são passadas por um filtro de membrana de 0,45 µm em um cartucho de filtração e o meio de cultura é adicionado para incubação. Este método de teste de esterilidade pode proporcionar maior sensibilidade em comparação com outros métodos, uma vez que toda a amostra, ou uma amostra composta, é passada por um único filtro. A filtração também oferece a oportunidade de eliminar componentes da amostra que possam causar turbidez ou inibir o crescimento, tais como antibióticos ou conservantes.

Teste de esterilidade por inoculação direta

Na inoculação direta, um pequeno volume da amostra é retirado assepticamente da unidade de amostragem e inoculado diretamente em um volume adequado de meio de crescimento antes da incubação. Embora simples, esse método de teste pode apresentar algumas limitações significativas. Apenas pequenos volumes do produto podem ser inoculados no meio de cultura, limitando a sensibilidade do teste. Se a amostra parecer turva ou opaca após a inoculação, pode ser difícil distinguir a turvação causada pelo crescimento microbiano do resultado do teste no final do período de incubação. Além disso, se o produto tiver propriedades antimicrobianas, a amostra deve ser neutralizada para que o crescimento microbiano não seja inibido.

Métodos de teste de esterilidade para dispositivos médicos

O teste de esterilidade por transferência direta é recomendado para o teste de esterilidade de dispositivos médicos. O dispositivo a ser testado fica em contato direto com o meio de teste durante todo o período de incubação, durante o qual qualquer microrganismo dentro ou sobre o dispositivo crescerá e se proliferará. Além disso, o teste de esterilidade por lavagem do produto é preferível para produtos com tubos ocos, como conjuntos de transfusão e infusão, nos quais o trajeto do fluido é rotulado como estéril. O lúmen do produto é lavado com um fluido de enxágue, o eluato é filtrado por membrana e colocado em um meio adequado para incubação.

Fluxo de trabalho do teste de esterilidade

1. Preparação do teste — Coloque a tubulação do dispositivo de filtração por membrana na bomba

2. Pré-umedecimento do filtro — Pré-umeça o dispositivo de filtração por membrana para otimizar a filtração e minimizar a aderência do produto ao filtro.

3. Filtragem da amostra — Filtre uma quantidade igual de produto em ambos os recipientes. Os microrganismos são retidos por um filtro com poros de 0,45 µm.

4. Enxágue — Todos os compostos inibidores são enxaguados usando uma ou mais soluções de enxágue adequadas.

5. Enchimento dos meios de cultura — Os dispositivos de filtração por membrana são enchidos com meios de cultura estéreis TSB e FTM.

6. Tempo de incubação — 14 dias.

7. Resultados finais do teste — Verificação visual de turbidez/ausência de turbidez.