Metody testování pyrogenů

Na žlutém pozadí jsou znázorněny tři druhy pyrogenů v modré, azurové a purpurové barvě.

Testování na pyrogeny slouží ke stanovení množství pyrogenů v parenterálních farmaceutických nebo biofarmaceutických přípravcích a je upraveno několika normami organizací, jako jsou Úřad pro kontrolu potravin a léčiv (FDA), Americký lékopis (USP) nebo Evropský lékopis (EP). Sterilita přípravku neznamená, že neobsahuje pyrogeny. Proto musí být i léčiva, která jsou považována za sterilní, testována na přítomnost pyrogenů, aby se předešlo febrilním reakcím u pacientů.

Ke kontaminaci pyrogeny může dojít během výroby nebo podávání léčiv, bioterapeutik a zdravotnických prostředků, ale přítomnost pyrogenů může být také inherentní vlastností přípravku, jako jsou například adjuvans ve vakcínách nebo syntetické lipopeptidy.

Žádost o informace

Vybrané kategorie

Pyrogeny jsou látky vyvolávající horečku, které pocházejí především z bakterií nebo jiných mikroorganismů, jako jsou viry, kvasinky a plísně.

Testování na pyrogeny

Zajištění bezpečnosti: Testování léčivých přípravků na přítomnost pyrogenů pomocí testu aktivace monocytů (MAT) za účelem detekce endotoxinových i neendotoxinových pyrogenů.

Nakupovat produkty

Scéna z sofistikované laboratoře pro testování sterility, jejíž ústředním prvkem je digitální přístroj s hadičkami. Kolem něj jsou rozmístěny různé lahvičky naplněné kapalinou v průhledných a jantarových odstínech, doplněné Petriho miskami s modrým, červeným a průhledným médiem. Stojan s lahvičkami s červenými uzávěry naznačuje, že se jedná o připravené vzorky nebo kultivační média.

Spotřební materiál, živná média a přístroje pro testování sterility

Laboratorní přístroje a spotřební materiál pro testování sterility v rámci mikrobiologické kontroly kvality: Testovací média pro sterility, čerpadla, zařízení a příslušenství.

Nakupovat produkty

Vědec v kompletním ochranném oděvu pozoruje vzorek pod mikroskopem.

Co je to pyrogen?

Pyrogen je látka, která způsobuje zvýšení teploty (horečnatou reakci) u člověka nebo zvířete prostřednictvím aktivace vrozeného imunitního systému. Pyrogeny tvoří heterogenní skupinu kontaminantů, která zahrnuje mikrobiální i nemikrobiální látky. Pyrogeny lze rozdělit do dvou skupin: endotoxiny a neendotoxinové pyrogeny (NEP).

Endotoxiny jsou látky vyskytující se v gramnegativních bakteriích. Pyrogeny jiné než endotoxiny představují další mikrobiální látky, včetně těch, které pocházejí z grampozitivních bakterií, virů, kvasinek a plísní. Nemikrobiální pyrogenní látky mohou také pocházet z částic kaučuku, mikroskopických plastových částic nebo kovových sloučenin v elastomerech.

K detekci pyrogenů je k dispozici několik zkušebních metod. Lze je klasifikovat podle typu kontaminantu, který detekují, a podle toho, zda je k provedení zkoušky zapotřebí použití živočišných materiálů, jak je popsáno v následující tabulce:

Testování
pyrogenů na králících

Test na pyrogeny u králíků (RPT) spočívá v měření nárůstu teploty u králíků po intravenózní injekci testovaného přípravku. Test RPT poskytuje kvalitativní výsledky a jeho citlivost je poměrně nízká. Robustnost testu je rovněž omezená, a to kvůli rozvoji tolerance na pyrogeny u králíků po opakovaných injekcích nebo kvůli stresu, kterému jsou králíci při provádění testu vystaveni.

Poznámka: Testování pyrogenů na králících (RPT) je nyní v Evropě zakázáno a metodou volby pro detekci jak endotoxinových, tak neendotoxinových pyrogenů je test aktivace monocytů (MAT).

Test aktivace monocytů

Test aktivace monocytů (MAT) je alternativou k metodám využívajícím zvířata pro detekci jak endotoxinových, tak neendotoxinových pyrogenů. Test aktivace monocytů napodobuje imunitní reakci člověka inkubací monocytů s testovaným vzorkem. Jsou-li přítomny pyrogeny, monocyty se aktivují a produkují zánětlivé molekuly, cytokiny, které jsou zodpovědné za febrilní reakci. Cytokiny se poté detekují pomocí imunologického testu (ELISA) za použití specifických protilátek a enzymatické barevné reakce.

Poznámka: Od července 2025 doporučuje Komise Evropského lékopisu (Ph. Eur.) používat test aktivace monocytů (MAT) jako preferovanou metodu pro testování endotoxinů a neendotoxinových pyrogenů. Test na pyrogeny na králících (RPT) je nyní v Evropě zakázán.

Přečtěte si článek a projednejte s našimi odborníky přechod na test MAT pro detekci endotoxinových a neendotoxinových pyrogenů a přizpůsobte se tak regulačním trendům.

Testování bakteriálních endotoxinů (test LAL)

Nejběžnější metodou pro testování endotoxinů je test s lyzátem amebocytů krabů rodu Limulus (test LAL); jedná se o test založený na lyzátu amebocytů z krve krabů rodu Limulus. Lyzát z krevních buněk krabů rodu Limulus přirozeně reaguje s bakteriálními endotoxiny v koagulační reakci. Tato metoda má vysokou citlivost pro kvantifikaci endotoxinů, ale nedokáže detekovat pyrogeny jiné než endotoxiny.

Testování pomocí rekombinantního BET (r-FC, r-CR)

Rekombinantní faktor C je geneticky modifikovaný protein, který se běžně vyskytuje v kaskádě lyzátu amebocytů krabů rodu Limulus. V tomto testu faktor C reaguje s endotoxinem a spojuje se s markerem, čímž vzniká kvantifikovatelný fluorescenční konečný produkt. Test s rekombinantním faktorem C využívá stejný princip jako test LAL, avšak bez nutnosti použití materiálu živočišného původu.

Rekombinantní kaskádové činidlo (r-CR) je geneticky modifikované vícesložkové činidlo, které rekonstituuje kompletní koagulační kaskádu obsaženou v lyzátu amebocytů Limulus. V tomto testu proteiny kaskády – faktor C, faktor B a prokoagulační enzym – postupně reagují s endotoxinem a vytvářejí kvantifikovatelný konečný produkt. Test r-CR napodobuje celou LAL dráhu, avšak bez nutnosti použití materiálu živočišného původu.

Prohlédnout si všechny produkty