Testování na pyrogeny
Testování na pyrogeny je klíčovým krokem při zajišťování bezpečnosti zdravotnických přípravků podávaných parenterálně, jako jsou léčiva nebo biofarmaceutika. Je součástí povinných kontrolních testů před uvolněním na trh, jejichž cílem je zabránit život ohrožujícím horečnatým reakcím vyvolaným pyrogenními látkami. Test aktivace monocytů (MAT) dokáže v rámci jednoho in vitro testu detekovat jak endotoxiny, tak neendotoxické pyrogeny.
Od července 2025 je MAT podle Evropského lékopisu metodou volby pro detekci endotoxinů i neendotoxických pyrogenů, čímž nahrazuje králičí pyrogenní test (RPT).
Products
Test aktivace monocytů (MAT)
Test MAT se používá k detekci endotoxinů i neendotoxinových pyrogenů v parenterálních přípravcích, jako jsou léčiva a biofarmaceutika, a představuje in vitro alternativu k konvenčním testům na zvířatech v souladu s regulačními pokyny.
K detekci pyrogenů se široce používá králičí pyrogenový test a test s lyzátem amebocytů limula (LAL). Obě metody využívají zvířata a vykazují určitá omezení. Králíčí pyrogenový test není dostatečně spolehlivý, protože reakce zvířat se může výrazně lišit od reakce člověka. V testu LAL se detekují pouze endotoxiny, což představuje bezpečnostní riziko, protože se ignorují neendotoxinové pyrogeny, které by mohly být v testovaném vzorku přítomny.
K překonání těchto omezení byl v roce 2010 do Evropského lékopisu zaveden test aktivace monocytů (MAT) jako lékopisná metoda nahrazující test na pyrogeny u králíků (kapitola 2.6.30 EP) a je zmíněn také v pokynech FDA pro průmysl.
Upozornění: Komise Evropského lékopisu se rozhodla ukončit testování pyrogenů na králících v souladu se zásadou 3R, přičemž považuje test MAT za nejlepší alternativu. Od července 2025 je testování pyrogenů na králících (RPT) v Evropě zakázáno a obecná kapitola 2.6.8 o testování pyrogenů na králících byla zrušena.
Test PyroMAT® in vitro pro detekci endotoxinových a neendotoxinových pyrogenů
Systém PyroMAT® je založen na buněčné linii Mono-Mac-6 a měření hladiny IL-6. Nabízí všechny výhody testu aktivace monocytů v kombinaci s výhodami použití buněčné linie.
- Detekce širokého spektra pyrogenů: bezpečnost pacienta je zajištěna, pokud je testováno celé spektrum pyrogenů. Stejně jako test na pyrogeny u králíků (RPT) je i test MAT účinný jak pro detekci endotoxinových, tak i neendotoxinových pyrogenů.
- Rozšíření spektra produktů, které lze testovat: nejčastěji používané metody, jako jsou RPT, test na bakteriální endotoxiny (BET) nebo LAL, jsou omezeny co do typů produktů, které jsou schopny testovat. Test MAT nabízí větší flexibilitu, pokud jde o jeho použití.
- In vitro test napodobující imunitní reakci člověka: pro robustní prediktivní model, který snižuje spotřebu zvířat.
- Soulad s mezinárodními předpisy a směrnicemi: v souladu s etickými trendy v oboru a požadavky regulačních orgánů na omezení využívání testů na zvířatech.
- Standardizovaná reaktivita a vysoká citlivost (0,05 EU/ml). Pohodlí připravené k použití buněčné linie snižuje náročnou laboratorní práci a eliminuje potřebu laboratoře pro kultivaci buněk.
- Kvalifikované buňky: kromě toho, že jsou buňky Mono-Mac-6 citovány v mezinárodní validaci testu MAT, jsou také kvalifikovány pro expresi všech povrchových Toll-like receptorů (TLR), což zajišťuje detekci širokého spektra pyrogenů.
Pozitivní kontroly bez endotoxinů
Evropský lékopis, kapitola 2.6.30 (Test aktivace monocytů): „přípravné testování musí zahrnovat validaci testovacího systému s použitím alespoň 2 ligandů pro toll-like receptory, které nejsou endotoxiny, např. peptidoglykanů, lipoteichových kyselin, syntetických bakteriálních lipoproteinů, flagelinu a surového extraktu z celých bakteriálních buněk, z nichž alespoň 1 musí být přidán do zkoumaného přípravku. Výběr použitých pyrogenů bez endotoxinů by měl odrážet nejpravděpodobnější kontaminanty zkoumaného přípravku.
Abychom vyhověli tomuto požadavku, poskytujeme rozšířenou škálu pozitivních kontrol:
- zahrnující několik typů kontaminantů, které se obvykle vyskytují ve farmaceutických výrobních procesech (gramnegativní a grampozitivní bakterie, viry a mykoplazmy).
- Zaměřené na několik monocytárních toll-like receptorů (TLR)
Pomůžeme vám přejít od testování na zvířatech k testování in vitro
Studie proveditelnosti, vývoj metod, validace a školení na podporu zavedení testování na pyrogeny – obraťte se na naše odborníky na testování na pyrogeny.
Související zdroje
- Brožura: Systém PyroMAT®
Systém MAT, který se používá k detekci širokého spektra pyrogenů v parenterálních přípravcích, jako jsou léčiva, biofarmaceutika nebo zdravotnické prostředky, představuje v souladu s regulačními pokyny alternativu k tradičním testům na zvířatech in vitro.
- Technický list: Pozitivní kontroly bez endotoxinů a pyrogenů
Splňte regulační požadavky na test aktivace monocytů (MAT) pomocí našich kontrolních roztoků bez endotoxinů a pyrogenů, které jsou určeny pro systém PyroMAT®.
