Přejít k obsahu
DomůAplikaceMikrobiologické testováníTestování sterility

Testování sterility

Testování sterility je klíčovým požadavkem GMP, jehož cílem je potvrdit, že farmaceutické výrobky, zdravotnické prostředky, biologické přípravky a buněčné a genové terapie neobsahují životaschopné mikroorganismy před podáním pacientovi. Neúspěšný test sterility – ať už se jedná o skutečný pozitivní výsledek, nebo o falešný výsledek – má závažné důsledky: stažení výrobků z trhu, rizika pro bezpečnost pacientů a nákladná šetření ze strany regulačních orgánů.

Vzhledem k tomu, že se standardy lékopisů vyvíjejí a regulační kontrola se zpřísňuje, musí moderní programy testování sterility řešit tři vzájemně propojené výzvy: metodickou přesnost, integritu dat a rychlost uvolnění na trh. Porozumění dostupným metodám testování sterility, jejich regulačním rámcům a nejnovějším pokrokům v oblasti digitálních pracovních postupů a rychlých mikrobiologických metod je zásadní pro každou laboratoř kontroly kvality fungující v souladu s GMP.

Od výběru správné zkušební metody pro váš výrobek a formát balení až po splnění měnících se regulačních požadavků týkajících se integrity dat a rychlosti uvolnění na trh vás tato příručka provede všemi klíčovými aspekty testování sterility. 

Porozumějte se s odborníkem

Vybrané kategorie

Spotřební materiál, živná média a přístroje pro testování sterility
Spotřební materiál, živná média a přístroje pro testování sterility

Laboratorní přístroje a spotřební materiál pro testování sterility v rámci mikrobiologické kontroly kvality: Média pro testování sterility, čerpadla, zařízení a příslušenství.

Nakupovat produkty
Testování na pyrogeny
Testování na pyrogeny

Zajištění bezpečnosti: Testování na pyrogeny je pro léčiva a zdravotnické prostředky zásadní. Test aktivace monocytů (MAT) detekuje endotoxiny i neendotoxinové pyrogeny.

Nakupovat produkty
Mikrobiální filtrace
Mikrobiální filtrace

Zkraťte dobu potřebnou k získání výsledků díky rychlým mikrobiologickým testům s využitím našich kompletních systémů membránové filtrace, které se používají při testování mikrobiální zátěže, analýze potravin a nápojů a mikrobiologickém testování konopí.

Nakupovat produkty

Metody testování sterility farmaceutických přípravků

Testování sterility farmaceutických přípravků podle lékopisů se řídí normami USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 a JP <4.06>, které vyžadují kultivaci vzorků ve dvou samostatných živných médiích po dobu 14denní inkubace. K zajištění komplexního pokrytí mikroorganismů se používají dvě kultivační média: tekuté thioglykolátové médium (FTM) pro anaerobní a aerobní bakterie (inkubované při teplotě 32,5 °C) a sójovo-kaseinové médium (SCDM), nazývané také trypticase-sójový bujón (TSB), pro aerobní bakterie a houby (inkubované při teplotě 22,5 °C). Jakákoli zákalnost pozorovaná po inkubaci naznačuje potenciální mikrobiální kontaminaci a musí být prošetřena.

Jsou uznávány dvě metody uvedené v lékopisech: membránová filtrace a přímé naočkování. Volba metody závisí na povaze přípravku, formátu jeho balení a jeho fyzikálně-chemických vlastnostech. Pokud to povaha přípravku dovoluje, je metodou volby membránová filtrace, jak uvádějí USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 a JP <4.06>, a to díky její vyšší citlivosti a schopnosti odstranit inhibiční látky. Přímé naočkování zůstává použitelné v případech, kdy není filtrace proveditelná.

Zatímco 14denní inkubační doba zůstává lékopisným standardem, rychlé mikrobiologické metody (RMM) založené na technologii bioluminiscence ATP jsou regulačními orgány stále častěji akceptovány u produktů s krátkou dobou trvanlivosti, včetně buněčných a genových terapií. Nová kapitola USP <73> – „Mikrobiologické metody založené na ATP bioluminiscenci pro detekci kontaminace v přípravcích s krátkou dobou trvanlivosti“ – poskytuje jasný regulační rámec pro zavedení RMM a pro validaci a implementaci této technologie s účinností od srpna 2025.

Bez ohledu na zvolenou metodu platí požadavky na integritu dat stejně pro všechny pracovní postupy při testování sterility: všechna testovací data musí být plně sledovatelná, připravená k auditu a v souladu s ALCOA++, 21 CFR část 11 a přílohou 11 EU – od přijetí vzorku až po zaznamenání konečného výsledku.

Testování sterility pomocí membránové filtrace

Vyhledávání dokumentů
Hledáte konkrétnější informace?

Využijte naše vyhledávání dokumentů, kde najdete technické listy, certifikáty a technickou dokumentaci.

Vyhledat dokumenty

Díky více než 50 letům zkušeností jako průkopník v oboru nabízí řešení Steritest® spolehlivé a bezpečné testování sterility, které poskytuje důvěryhodné výsledky. Membránová filtrace je předepsanou metodou volby pro filtrovatelné farmaceutické přípravky podle norem USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 a JP <4.06>. Vzorek prochází membránovým filtrem o velikosti pórů 0,45 µm, kde jsou mikroorganismy zadrženy a následně kultivovány na vhodných živných médiích.

Tato metoda nabízí oproti přímému naočkování klíčové výhody:

  • Vyšší citlivost — celý vzorek nebo směs vzorků se filtruje přes jedinou membránu
  • Odstranění inhibitorů — antimikrobiální sloučeniny, jako jsou antibiotika nebo konzervační látky, lze před inkubací vypláchnout, čímž se zabrání falešně negativním výsledkům
  • Ochrana uzavřeného systému — moderní filtrační zařízení s uzavřeným systémem zajišťují, že produkt není během testování nikdy vystaven vnějšímu prostředí, což výrazně snižuje riziko vnější kontaminace a neplatných výsledků testů

Použití uzavřených jednorázových membránových filtračních zařízení je považováno za osvědčený postup v prostředích pro testování sterility podle GMP, a to jak v laminárních komorách, tak v izolátorech.

Zkouška sterility metodou přímého naočkování

Při testování sterility přímým naočkováním se malý objem vzorku asepticky přenese do vhodného růstového média a inkubuje se. Ačkoli je tato metoda jednoduchá na provedení, má několik omezení, která by laboratoře měly zohlednit:

  • Snížená citlivost — lze naočkovat pouze malé objemy vzorku, což zvyšuje riziko, že nebude odhalena nízká úroveň kontaminace
  • Interference způsobená zákalem — přirozeně zakalené nebo zbarvené produkty mohou při vizuální prohlídce zakrýt růst mikroorganismů
  • Inhibice antimikrobiálními látkami — produkty s antimikrobiálními vlastnostmi je nutné před inokulací neutralizovat, aby se zabránilo falešně negativním výsledkům

Rychlé mikrobiologické metody (RMM) pro testování sterility

Vzhledem k tomu, že se regulační rámce vyvíjejí tak, aby zohledňovaly inovace, získávají si rychlé mikrobiologické metody (RMM) stále větší uznání jako vědecky ověřené alternativy k tradičním testům sterility podle lékopisů. RMM jsou zvláště relevantní pro produkty s krátkou dobou použitelnosti – jako jsou buněčné a genové terapie, radiofarmaka a biologické přípravky s krátkou dobou použitelnosti –, u nichž je 14denní inkubační doba neslučitelná s termíny uvolnění produktu na trh nebo s harmonogramy léčby pacientů.

Mezi nejzavedenější technologie RMM patří ATP bioluminiscence, která detekuje světlo vyzařované životaschopnými mikroorganismy po reakci s bioluminiscenčním činidlem, což umožňuje rychlou, citlivou a kvantitativní detekci kontaminace. Na rozdíl od tradičních metod založených na inkubaci nahrazuje ATP bioluminiscence subjektivní vizuální hodnocení zákalu kvantitativním měřením pomocí přístrojů, což umožňuje dřívější a reprodukovatelnější interpretaci výsledků.

Zavedení normy USP <73> – „Mikrobiologické metody založené na ATP bioluminiscenci pro detekci kontaminace v produktech s krátkou trvanlivostí“, platné od srpna 2025 – představuje významný regulační milník, který laboratořím poskytuje jasný lékopisný rámec pro zavádění a validaci testování sterility založeného na RMM. To doplňuje norma USP <1071>, která poskytuje širší pokyny k zavádění a validaci rychlých mikrobiálních metod.

Metody RMM jsou vhodné nejen pro testování sterility konečného produktu, ale také pro monitorování mikrobiální zátěže v průběhu celého výrobního procesu, čímž laboratořím nabízejí univerzální a normám vyhovující řešení pro celou řadu aplikací v oblasti kontroly kvality.

Systém Milliflex® Rapid System 2.0 je plně v souladu s požadavky normy USP <73> a umožňuje vaší laboratoři zavést validovaný a normám vyhovující pracovní postup testování sterility založený na metodách RMM — s dodáním výsledků do 5 dnů.

Integrita dat a správa dat při testování sterility

Výsledek testu sterility je spolehlivý pouze do té míry, do jaké jsou spolehlivá data, na nichž je založen — a regulační orgány po celém světě kladou integritu dat do centra dodržování mikrobiologických požadavků GMP. Kromě metodiky se stejná důležitost přikládá také způsobu, jakým jsou údaje o testování sterility generovány, zaznamenávány a uchovávány po celou dobu životního cyklu testu. Regulační orgány, včetně FDA, EMA a PMDA, vyžadují, aby všechna laboratorní data splňovala zásady ALCOA++: údaje musí být přiřaditelné (Attributable), čitelné (Legible), souběžné (Contemporaneous), originální (Original) a přesné (Accurate), přičemž se kladou další požadavky na úplnost, konzistenci a dostupnost.

V USA definuje předpis 21 CFR část 11 požadavky na elektronické záznamy a elektronické podpisy, čímž se digitální dokumentace stává z právního hlediska rovnocennou papírovým záznamům. V Evropě stanovuje příloha 11 směrnice EU odpovídající požadavky na počítačové systémy v prostředích GMP. Tyto předpisy společně stanovují jasný rámec pro integritu dat v laboratořích kontroly kvality, včetně testování sterility: sběr dat v reálném čase, automatické generování auditní stopy a kompletní digitální sledovatelnost od začátku do konce – od identifikace obsluhy a údajů o přístrojích až po informace o vzorcích a konečné výsledky – jsou regulačními orgány při inspekcích GMP stále častěji očekávány a považovány za osvědčené postupy v oboru. Software a mobilní aplikace M-Trace® pomáhají vaší laboratoři splnit tyto regulační požadavky. 

Porozumějte se s odborníkem

Aplikace testování sterility: Od farmaceutických přípravků po buněčné a genové terapie

Testování sterility je rutinním požadavkem kontroly kvality v široké škále odvětví regulovaných podle zásad správné výrobní praxe (GMP). Zatímco základní principy zůstávají stejné, volba metody, regulační rámec a požadavky na rychlost získání výsledků se v jednotlivých segmentech výrazně liší:

  • Farmaceutické přípravky — včetně injekčních přípravků, očních přípravků a infuzních roztoků — představují největší objem testování sterility a řídí se normami USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 a JP <4.06>
  • Biologické přípravky, biosimilars a vakcíny — sterilní parenterální přípravky vyžadující přísné testování uvolnění šarží podle GMP
  • Zdravotnické prostředky — testování sterility přizpůsobené formátu prostředku s využitím metod přímého přenosu nebo proplachování produktu
  • Buněčné a genové terapie (CGT) a ATMP — produkty s krátkou nebo ultrakrátkou dobou použitelnosti, u nichž jsou rychlé mikrobiologické metody často jedinou schůdnou možností pro rozhodnutí o uvolnění ještě týž den nebo následující den
  • Radiofarmaka — produkty s poločasem rozpadu měřeným v hodinách, u nichž není proveditelná tradiční 14denní inkubace a u nichž se stále častěji vyžadují rychlé mikrobiologické metody (RMM)
  • Tkáňová a regenerativní medicína — potvrzení sterility před transplantací nebo podáním“

Pracovní postupy při testování sterility  

Tradiční postup podle lékopisu — membránová filtrace

Následující postup krok za krokem popisuje test sterility pomocí membránové filtrace prováděný podle USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 a JP <4.06>. 

Příprava testu — Sestavte zařízení pro membránovou filtraci a připojte hadičky k čerpadlu pro testování sterility v kontrolovaném prostředí (laminární digestoř nebo izolátor) 

  1. Opláchnutí membrány/předvlhčení filtru — Membránu předem navlhčete, abyste optimalizovali účinnost filtrace a minimalizovali adsorpci produktu na filtru
  2. Filtrace vzorku — Filtrujte stejné objemy produktu do obou nádob; mikroorganismy jsou zadrženy na membráně
    o velikosti pórů 0,45 µm
  3. Proplachování — Odstraňte inhibiční sloučeniny pomocí validovaného proplachovacího roztoku, abyste zabránili falešně negativním výsledkům
  4. Naplnění kultivačních médií — Naplňte membránová filtrační zařízení sterilními kultivačními médii
    SCDM (TSB) a FTM
  5. Inkubace — 14 dní při 32,5 °C (FTM) a 22,5 °C (SCDM). Tyto teploty představují střední hodnoty lékopisných rozmezí 30–35 °C a 20–25 °C, jak je stanoveno v USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 a JP <4.06>
  6. Vyhodnocení výsledků — Vizuální kontrola zákalu; jakýkoli zákal musí být vyšetřen jako potenciální mikrobiální kontaminace
  7. Digitální záznam zkoušky — Souběžné, automatické zaznamenávání všech kroků zkoušky, činností obsluhy a údajů z přístrojů do jediného auditovatelného elektronického záznamu podporuje soulad s 21 CFR část 11, zásadami integrity dat ALCOA++ a připravenost na regulační inspekce

Popisy jednotlivých kroků jsou v souladu s požadavky lékopisů USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 a JP <4.06>. Krok 8 odráží aktuální regulační očekávání ohledně integrity dat podle 21 CFR část 11 a přílohy 11 EU, která jdou nad rámec požadavků lékopisů.

Pracovní postup pro rychlé testování sterility – bioluminiscence ATP

U produktů s krátkou dobou trvanlivosti – včetně buněčných a genových terapií, radiofarmak a biologických přípravků s krátkou dobou trvanlivosti – je tradiční 14denní inkubační doba často neslučitelná s termíny uvolnění produktu na trh. Rychlé mikrobiologické metody (RMM) nabízejí vědecky ověřenou a regulačními orgány akceptovanou alternativu.

Bioluminiscence ATP je jednou z nejvíce zavedených technologií RMM pro testování sterility. Detekuje světlo vyzařované životaschopnými mikroorganismy po reakci s bioluminiscenčním činidlem, což umožňuje rychlou, citlivou a kvantitativní detekci kontaminace. Nová kapitola USP <73> – „Mikrobiologické metody založené na ATP bioluminiscenci pro detekci kontaminace v přípravcích s krátkou životností“ – poskytuje jasný regulační rámec pro zavedení RMM s účinností od srpna 2025.

Typický postup rychlého testování sterility pomocí ATP bioluminiscence probíhá následovně:

  1. Filtrace vzorku – vzorek se filtruje přes speciální membránu, která zadržuje životaschopné mikroorganismy
  2. Aplikace ATP činidla — Na membránu se nanese bioluminiscenční činidlo, které se váže na životaschopné buňky
  3. Automatická detekce a kvantifikace — Vysoce citlivá detekční kamera zachycuje a kvantifikuje světelné signály pocházející od životaschopných mikroorganismů
  4. Výsledky do 5 dnů — Výsledky jsou k dispozici až o 75 % rychleji než u tradiční 14denní metody podle lékopisu. Skutečná doba do získání výsledků závisí na validované metodě a typu produktu.
  5. Elektronický záznam o testu — Všechny výsledky jsou zaznamenány v plně auditovatelném digitálním záznamu, který je v souladu s 21 CFR část 11

Tento pracovní postup je založen na technologii ATP bioluminiscence, jak je popsána v USP <73>. Krok 5 odráží současné regulační požadavky na integritu dat a elektronické vedení záznamů podle 21 CFR část 11 a přílohy 11 EU.

Systémy RMM využívající bioluminiscenci ATP jsou vhodné jak pro testování sterility, tak pro monitorování biologické zátěže během výroby, čímž laboratořím poskytují univerzální, rychlé a předpisům vyhovující řešení v rámci celého výrobního pracovního postupu.

Vybrané články
Steritest® Symbio Sterility Testing Pump Guide
The user-friendly Steritest® Symbio pumps and accessories are designed for easy and reliable sterility testing. The system improves your workflow and maximizes safety, confidence, and convenience.
Steritest® NEO Membránová filtrační zkouška sterility
Testování sterility je jedním z nejdůležitějších kroků při uvolňování farmaceutických výrobků na trh. Přístroje pro testování sterility membránovou filtrací, které vyhovují předpisům, zajišťují bezpečnost farmaceutických výrobků.
Sterility Testing Culture Media & Rinsing Fluids
Our sterility testing media and fluids are formulated and tested to meet EU, US, and JP pharmacopeia regulations, and are supplied with full certification containing pH, sterility, and growth promotion information.
Sterility Testing by Direct Inoculation
Direct inoculation of culture media is the method of choice for sterility testing of non-filterable samples. Select from our range of sterility testing media including soybean casein digest medium (TSB), and Fluid Thioglycollate medium (FTM standard and clear).