Testování mykoplazmat ve farmaceutickém průmyslu
Kontaminace mykoplazmami je rozšířeným a opakujícím se problémem u mnoha systémů buněčných kultur ve výzkumu v oblasti přírodních věd i ve farmaceutickém průmyslu. Mykoplazmy se mohou v kultivačních médiích rozmnožovat až do vysokých titrů, aniž by vykazovaly typické příznaky bakteriální kontaminace, jako je například zakalení. Mezi jejich účinky na kultivované buňky patří změněný metabolismus, zpomalená proliferace a chromozomální aberace. Stručně řečeno, kontaminace mykoplazmami ohrožuje platnost dat z postižených buněčných linií i výsledků výzkumu v oblasti přírodních věd. Z tohoto důvodu je testování na mykoplazmy, a tím i udržování buněčných kultur bez kontaminace, zásadní pro výzkum založený na buněčných kulturách i pro výrobu produktů, u nichž je zdraví spotřebitelů hlavním zájmem.
Vybrané kategorie
Mikrobiální živná půda je směs látek, která podporuje a usnadňuje růst a diferenciaci mikroorganismů.
Testování sterility je nezbytnou součástí validace výrobků vyráběných v souladu s GMP, u nichž se předpokládá, že jsou sterilní.
Zajistěte bezpečnost: Testování na pyrogeny je pro léčiva a zdravotnické prostředky zásadní. Test aktivace monocytů (MAT) detekuje endotoxiny i neendotoxinové pyrogeny.
Seznamte se s pokročilými řešeními pro monitorování životního prostředí a simulaci aseptických procesů ve farmaceutické výrobě. Zajistěte dodržování zásad GMP pomocí našich specializovaných nástrojů a médií pro čisté prostory, izolátory a systémy RABS.
SLUŽBY V OBLASTI TESTOVÁNÍ BIOLOGICKÉ BEZPEČNOSTI
Služby v oblasti testování biologické bezpečnosti zaměřené na vyšetřování monoklonálních protilátek (mAb), materiálů pro buněčnou a genovou terapii a vakcín s cílem zajistit, že neobsahují cizorodé látky ani nevyvolávají neočekávané výsledky, které by mohly způsobit katastrofální selhání v následném zpracování, včetně: testování na mykoplazmy.
O bakteriích rodu Mycoplasma
Mykoplazmy patří mezi nejmenší známé bakterie a jsou schopny projít filtry s velikostí pórů 0,2 µm. Tyto mikroorganismy rostou aerobně nebo za fakultativně anaerobních podmínek.
Mykoplazmy jsou buď parazitické, nebo saprofytické. Několik druhů, například M. pneumoniae, je patogenních a u lidí způsobuje pneumonii a další respirační onemocnění. M. genitalium se pravděpodobně podílí na zánětlivých onemocněních pánevní oblasti. Jelikož se jedná o bakterie bez buněčné stěny, nejsou mykoplazmy citlivé na peniciliny ani na jiná antibiotika, která působí na tuto strukturu. Ke stabilizaci svých cytoplazmatických membrán potřebuje většina mykoplazmat steroly, které přijímají ze svého okolí, obvykle ve formě cholesterolu od svých zvířecích hostitelů. Mnoho kmenů mykoplazmat je také tolerantních vůči řadě dalších antibiotik.
Využijte naše vyhledávání dokumentů, kde najdete technické listy, certifikáty a technickou dokumentaci.
Zdroje kontaminace mykoplazmami
Zdroje kontaminace mykoplazmami v laboratoři a ve výrobě je velmi obtížné kontrolovat. Některé druhy se vyskytují na lidské kůži a mohou se do kultur dostat v důsledku nedodržování aseptických postupů. Kromě toho se mykoplazmy mohou dostat do kultur prostřednictvím kontaminovaných doplňků, jako je fetální bovinní sérum, nebo, což je nejčastější, přenosem z jiných kontaminovaných buněčných kultur. Jakmile se v buněčné kultuře objeví mykoplazmy, mohou se tyto mikroorganismy rychle šířit a kontaminovat další části laboratoře prostřednictvím aerosolů a částic vznikajících při manipulaci s kulturami. Klíčové je přísné dodržování správných aseptických laboratorních postupů a pro úspěšnou kontrolu kontaminace mykoplazmami ve výrobních prostorách se důrazně doporučuje provádět rutinní testování kultur.
Proč se ve farmaceutickém průmyslu provádějí testy na mykoplazmy?
Biofarmaceutická zařízení, která k výrobě vakcín používají eukaryotické buňky, musí testovat své buněčné banky a šarže virových zárodků, stejně jako hromadné vakcíny, na kontaminaci mykoplazmami. Druhy z tohoto bakteriálního rodu infikují eukaryotické buňky a narušují jejich růst a metabolismus. Pokud mykoplazmy narušují výrobu vakcín, může to ovlivnit kvalitu a výtěžnost bílkovin a, co je ještě důležitější, způsobit nežádoucí účinky u pacientů, kterým je podán finální vakcínový přípravek.
Kontaminace bioreaktorů mykoplazmami může vést k významným ztrátám času, materiálu a příjmů, pokud není odhalena v rané fázi výrobního procesu. Bez přísných testovacích postupů je kontaminace šarží biofarmaceutické výroby mykoplazmami extrémně obtížně zjistitelná, protože přítomnost mykoplazmat obecně nevede ke změnám pH ani k viditelné zákalnosti v kultivačních médiích. Standardní testovací metoda na mykoplazmy zahrnuje pro detekci jak kultivační testy, tak testy s indikátorovými buňkami. Pokud se pro analýzu používají pouze dvě kultivační média, doporučuje se kombinace médií FREY a FRIIS.
Metody testování na mykoplazmy
V rámci kontroly kvality je důležité testovat biofarmaceutika, vakcíny, buněčné kultury a virové kultury na přítomnost mykoplazmat v různých fázích. Tři nejběžnější testovací metody jsou:
- Kultivace mykoplazmat, při které se testované vzorky naočkují do bakteriálních kultivačních médií optimalizovaných pro mykoplazmy
- Metody barvení DNA, při nichž jsou jádra mykoplazmat kontrastně obarvena Hoechstem nebo DAPI a zobrazena pomocí fluorescenční mikroskopie
- PCR (polymerázová řetězová reakce) k amplifikaci bakteriální DNA v případě, že jsou ve vzorku přítomny mykoplazmy
Postup detekce mykoplazmat podle EP 2.6.7 a USP 63
* V následujících dnech po naočkování proveďte subkultivaci každého tekutého média tak, že naočkujete 0,2 ml na alespoň 1 destičku každého pevného média. Tento postup opakujte mezi 6. a 8. dnem, poté znovu mezi 13. a 15. dnem a ještě jednou mezi 19. a 21. dnem testu. Tekutá média sledujte každé 2 až 3 dny a v případě změny barvy proveďte subkultivaci.
Poznámka: Kromě toho je nutné provést jednu pozitivní a jednu negativní kontrolu pro každé pevné a tekuté médium s inkubační dobou 14 dnů.
Hotová kultivační média pro detekci mykoplazmat podle lékopisných požadavků
Nabízíme kompletní sortiment hotových tekutých a pevných kultivačních médií potřebných pro detekci mykoplazmat podle Evropského lékopisu 6.1 (2.6.7.) a USP 35 (63). Naše hotová kultivační média pro mykoplazmy zajišťují bez jakýchkoli dalších přípravných kroků stálou kvalitu produktu a úplnou sledovatelnost díky certifikátům analýzy pro jednotlivé šarže.
Vzhledem ke svému složení mají kultivační média pro mykoplazmy obecně mnohem kratší dobu použitelnosti než většina ostatních kultivačních médií pro mikrobiologickou kontrolu kvality. Doba použitelnosti našich hotových tekutých a pevných médií Friis, Frey a Hayflick byla prodloužena na 4 měsíce u agarových destiček a na 6 měsíců u bujónů. Vyzkoušejte náš kompletní sortiment hotových kultivačních médií s delší dobou použitelnosti, která usnadní testování mykoplazmat.
Související články
- Protokol buněčných kultur pro testování buněčných linií na kontaminaci mykoplasmou pomocí nepřímého barvení DNA s použitím Hoechstu 33342.
- Zobrazit vše (2)
Další články
Jak vám můžeme pomoci
V případě jakýchkoli dotazů prosím zašlete žádost
o podporu zákazníků nebo se obraťte na náš tým zákaznické podpory:
E-mailem na adresu custserv@sial.com
nebo telefonicky na čísle +1 (800) 244-1173
Další podpora
- Vyhledávání chromatogramů
K identifikaci neznámých sloučenin ve vašem vzorku použijte funkci „Vyhledávání chromatogramů“.
- Kalkulačky a aplikace
Web Toolbox - vědecké výzkumné nástroje a zdroje pro analytickou chemii, vědu o živé přírodě, chemickou syntézu a materiálovou vědu.
- Žádost o zákaznickou podporu
Zákaznická podpora včetně pomoci s objednávkami, produkty, účty a technickými problémy s webovými stránkami.
- Často kladené otázky
Projděte si naši sekci „Často kladené otázky“, kde najdete odpovědi na nejčastější dotazy týkající se našich produktů a služeb.