Klónozás és expresszió
Rekombináns fehérje expressziója emlőssejtekben
A klónozási és génexpressziós technológiákat a kutatók különböző területeken használják a biológiai kérdések széles körének vizsgálatára, beleértve a génműködés megértését, a molekuláris útvonalak elemzését, az embrionális fejlődést, a betegségek kutatását, valamint a biológiai és terápiás készítmények biológiai feldolgozását, hogy csak néhányat említsünk. A gén vagy genetikai szekvencia azonosítása után a kutatóknak a konkrét alkalmazási igény alapján kell kiválasztaniuk a legjobb molekuláris klónozási stratégiát és sejtalapú fehérje-expressziós rendszert. A CRISPR technológiával történő génexpresszióval vagy az RNAi reagensekkel történő géncsendesítéssel kapcsolatos további információkért kérjük, látogasson el gén-expresszió és géncsendesítés oldal.
Kiemelt kategóriák
A nagy tisztaságú biológiai pufferek széleskörű portfóliója különböző formulákban és kiszerelésekben kiváló oldatstabilitást és pH-szabályozást biztosít a bioprocessz munkafolyamatok alkalmazásai során.
Az agaróz termékek széles választékát kínáljuk különböző gélerősségekkel, olvadási hőmérsékletekkel, gélesedési hőmérsékletekkel és elektroendozmózis (EEO) szintekkel az Ön kutatási alkalmazásainak támogatására.
Az agaróz termékek széles választékát kínáljuk.
Fehérjeexpressziós vektorok
A plazmidok vagy fehérjeexpressziós vektorok olyan kör alakú DNS-darabok, amelyek számos funkcionális elemet tartalmaznak a kívánt fehérje klónozásához és expressziójához. A megfelelő expressziós vektor kiválasztását részben a fehérje típusa, a fehérjét expresszálni szándékozó szervezet, valamint a konkrét alkalmazás és a kutató által megválaszolni kívánt tudományos kérdések határozzák meg. A rendelkezésre álló expressziós vektorok széles választéka lehetővé teszi a kutatók számára, hogy kiválasszák, melyik klónozás, klónszelekció és fehérjeexpressziós elem a legalkalmasabb a vizsgálatukhoz. Miután kiválasztották a kívánt génszekvenciát és az expressziós vektort, a kutatók általában nukleázokat használnak a vektor specifikus helyeken történő precíz vágásához, hogy lehetővé tegyék a kívánt genetikai szekvencia in-frame klónozását és végső soron a gazdaszervezetben történő kifejeződését. Fontos, hogy a kutatók általában kémiailag kompetens sejteket és bakteriális transzformációt használnak a rekombináns DNS-plazmidok befogadására, mivel ezek -70 °C-on fagyasztva tárolva stabilak.
Hogyan transzfektáljuk a sejteket
A sejtek transzfekciója a DNS vagy RNS, illetve fehérjék eukarióta sejtekbe történő bevitelének folyamatát jelenti. A kutatók számára számos fizikai, kémiai és biológiai technológia áll rendelkezésre a fehérjeexpressziós munkafolyamat ezen részének elvégzéséhez. A kutatók általánosan használják a fizikai módszereket, például az elektroporációt, vagy a kémiai módszereket, beleértve a kalcium-foszfátot (CaPi), a polietilénimint (PEI) és a lipofekciós reagenseket. A tudósok rendelkezésére állnak a vírusos transzdukciós rendszerek is, beleértve a lentivirális, onkoretrovirális és adenovirális rendszereket. A vírusos átviteli módszerek használata azonban gyakran további elkülönítést és megfigyelést igényel biológiai biztonsági okokból.
Protein expressziós rendszerek
A kutatók különböző organizmusokat használnak az őket érdeklő fehérjék expressziójára. A kutatók általában baktériumokat használnak, mivel hatékonyan veszik fel az expressziós vektorokat, gyors megduplázódási idővel rendelkeznek, és optimális körülmények között nagy mennyiségű rekombináns fehérjét képesek előállítani. Mivel azonban a baktériumok prokarióta szervezetek, nem képesek a fehérjék poszttranszlációs módosítására, amelyre egyes fehérjéknek szükségük van. Az eukarióta sejtek, beleértve az élesztő és emlős sejtvonalakat, megkönnyítik a fehérjék poszt-transzlációs módosítását (módosításait), és a kutatók általánosan használják őket. A rekombináns fehérjék expressziójához legmegfelelőbb sejtvonal és a fehérjeexpressziós stratégia kiválasztása nagymértékben függ a konkrét alkalmazási igényektől és a tudós által megválaszolni kívánt kérdésektől.
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- A "restrikciós enzim" kifejezés az Enterobacteria λ-fág (lambda-fág) vizsgálataiból származik Werner Arber és Matthew Meselson laboratóriumaiban.
- Ez a klónozási protokoll tartalmazza a klónozási rendszer és a plazmidvektor kiválasztását, a plazmid restrikciós emésztését, a fragmentum restrikciós emésztését, a gélkiválasztást, a DNS defoszforilálását és még sok mást.
- A transzfekció genetikai anyagot juttat a sejtekbe, segítve a génexpresszió és a sejtbiológia kutatását.
- The 3xFLAG system enhances fusion protein detection, offering improved sensitivity over traditional methods.
- For best results, ligation reactions must be heat inactivated at 70º C for 15 minutes before transformation. Alternately, the reactions may be purified.
- Mindent látni (34)
Kapcsolódó protokollok
- Restriction enzyme collection has been optimized for digestion using five unique buffers.
- Ez az oldal a Cytiva termékekkel használt pGEX expressziós vektorok jellemzőit ismerteti.
- Cloning process, joining linear DNA into a vector, is crucial for biotechnological experiments, enabling DNA fragment recombinant technology.
- Technikai cikk a kompetens sejtekről. A transzformáció olyan folyamat, amelynek során egyes baktériumok idegen genetikai anyagot (csupasz DNS-t) vesznek fel a környezetből.
- Dephosphorylation of DNA using Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, Shrimp Alkaline Phospha, Bovine Intestinal Alkaline Phosphatase
- Mindent látni (36)
További cikkek és protokollok keresése
Miben segíthetünk
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox – tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémiához, az élettudományokhoz, a kémiai szintézishez és az anyagtudományhoz.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.