Polimeráz láncreakció (PCR) alkalmazások
A polimeráz láncreakció (PCR) egy hatékony molekuláris biológiai alaptechnika, amely hatékony és gyors in vitro módszer a különböző forrásokból származó specifikus DNS- vagy RNS-szekvenciák enzimatikus amplifikációjára. A standard PCR a cél-DNS-ből, a cél-DNS-szekvenciát szegélyező szintetikus oligonukleotid-primerekből, egy termosztatibilis DNS-polimerázból (általában Taq-polimeráz) és nukleotidokból áll. Termikus ciklert használva minden egyes amplifikációs ciklus során három szakasz zajlik, beleértve a kettős szálú DNS (dsDNS) denaturálását különálló egyszálú DNS-é, a primerek lágyítását a cél-DNS-szekvenciához, és a hosszabbítást, amikor a DNS-polimeráz meghosszabbítja a DNS-t a primerekről, új dsDNS-t hozva létre egy régi és egy új szálból álló új dsDNS-t. Az egyik ciklusban szintetizált szálak a következő ciklusban templátként szolgálnak, így a DNS mennyisége mindössze 20 ciklus alatt milliószorosára nő.
Kiemelt kategóriák
Molekuláris klónozási és fehérjeexpressziós módszerek és protokollok a megbízható klónozáshoz és a robusztus fehérjeexpresszióhoz rovar, baktérium és emlős fehérjeexpressziós vektorokból.
Epigenetikai reagensek és erőforrások az RNS-fajok, a DNS-metiláció, a kromatinmódosulások és a hisztonmódosulások vizsgálatához.
Körű bélmikrobiom-elemzés: Fedezzen fel egy holisztikus megoldást, amely magában foglalja a minta előkészítését, a szekvenálást, a bioinformatikát és a statisztikát. A 16S-től a WGS-ig.
Reverse transzkriptáz PCR (RT-PCR)
Az RT-PCR vagy reverz transzkriptáz PCR a standard PCR technika egy változata, amely nagyon kis mintákból nyert specifikus mRNS felerősítését foglalja magában. Ez kiküszöböli a hagyományos klónozási technikákhoz szükséges fáradságos mRNS-tisztítási folyamatot. Az RT-PCR esetében a standard PCR-reagensek mellett reverz transzkriptázt és RNS-mintát is használnak. A reakcióelegyet 37 ˚C-ra melegítjük, ami lehetővé teszi a komplementer cDNS-kópia előállítását az RNS-mintából a reverz transzkriptáz segítségével. Ez a cDNS ezután az egyik primerhez kapcsolódik, ami az első szál szintéziséhez vezet. Innen következik a standard PCR, amelyben végül dsDNS keletkezik. Az RT-PCR-t gyakran kombinálják valós idejű PCR-rel (qPCR), amelyet széles körben használnak a sejtekben és szövetekben lévő transzkriptumok szintjének számszerűsítésére.
Hot Start PCR
A Hot Start PCR olyan technológia, amely a reakció beállítása során gátolja a forró indítású Taq-polimerázt vagy a módosított dNTP-k beépítését, amíg egy hőaktiválási lépés meg nem történik. A hot start polimeráz aktivitásának megállítására különböző módszerek állnak rendelkezésre, többek között a kémiai módosítás, az antitest-közvetített és az aptamer-közvetített módszerek.
Endpont PCR a hosszú és pontos célpont-amplifikációhoz
A végpont PCR-t gyakran használják a célpontok jelenlétének és relatív mennyiségének kimutatására a reakció befejezésekor. A standard PCR során előállított szekvenciák korlátozott, körülbelül 5 kb-os hosszát részben a "korrektúrázó" aktivitást biztosító további faktorok beépítésével hidalják át. A hosszú és pontos (LA) PCR egy második, 3′→5′ exonukleázzal rendelkező termosztatibilis polimeráz használatát foglalja magában a terminális nukleotid-hibák javítására, ami jelentősen megnövelt hűséget és akár 40 kb hosszúságú DNS-célpontok amplifikálásának képességét eredményezi.
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- A PCR és az RT-PCR problémái a gélelektroforézis elemzése során azonosíthatók, mint például a sávok hiánya, a nem specifikus tiltások jelenléte, a túlzott elkenődés és a sávok elkenődése.
- Digital PCR enables absolute quantification and detection of minority sequences against similar majority sequences, such as somatic mutations.
- Ethidium bromide is a well-known and widely used fluorescent dye in biotechnology research.
- A polimeráz láncreakció a molekuláris biológia egyik legszélesebb körben használt technikája. A PCR folyamat három fő lépésből áll: denaturálás, lágyítás és hosszabbítás.
- The purpose of Hot Start PCR is to inhibit the PCR reaction in order to reduce nonspecific amplification, prevent the formation of primer dimers, and increase product yields.
- Mindent látni (71)
Kapcsolódó protokollok
- Ismerje meg a szokásos PCR-eljárás lépéseit, és tekintse át a reagensek listáját vagy a ciklusparamétereket. Ez a DNS rutin PCR-amplifikációjára szolgáló módszer szabványos Taq DNS-polimerázt használ.
- Az izzítás két egyszálú, komplementer szekvenciájú oligonukleotid melegítésének és hűtésének folyamata.
- Learn about methods for calculating oligonucleotide melting temperature (Tm).
- A PCR munkafolyamatok változékonyságát befolyásolja a mintaforrás, a reverz transzkripció és a vizsgálat tervezése, ami hatással van a reprodukálhatóságra.
- Extract-N-Amp kit protocol provides rapid DNA extraction yielding PCR-ready samples in 15 minutes with optimized PCR ReadyMix.
- Mindent látni (64)
További cikkek és protokollok keresése
Hogyan tudunk segíteni
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.