qPCR
A kvantitatív valós idejű PCR (qPCR) fluoreszkáló jelzőmolekulákat használ az amplifikált termékek mennyiségi meghatározásához. Akárcsak a hagyományos PCR-nél, itt is egy DNS-, cDNS- vagy RNS-sablont amplifikálnak, de minden ciklusban a fluoreszkáló jeleket figyelik a relatív vagy abszolút mennyiségi meghatározáshoz.
Ez a technika számos kutatási területen hasznos, ideértve a génexpresszió-elemzést, a genotipizálást, a mikroRNS-elemzést, a genetikai variációk elemzését és a fehérjeelemzést.
Kiemelt kategóriák
A polimeráz láncreakció (PCR) a molekuláris biológiai laboratóriumok alapvető eleme. A PCR-t a DNS több nagyságrenddel történő amplifikálására használják, és reagenseink, valamint erőforrásaink számos kutatási munkafolyamathoz alkalmasak, ideértve a génexpresszió-elemzést, a genotipizálást, a szekvenálást és a mutagenezishez kapcsolódó alkalmazási igényeket.
Molekuláris klónozási és fehérjeexpressziós módszerek és protokollok a rovar-, baktérium- és emlős fehérjeexpressziós vektorokból történő megbízható klónozáshoz és stabil fehérjeexpresszióhoz.
Epigenetikai reagensek és források az RNS-típusok, a DNS-metiláció, a kromatin-módosulások és a hiszton-módosulások vizsgálatához.
Átfogó bélmikrobióma-elemzés: Fedezze fel a mintakészítést, a szekvenálást, a bioinformatikát és a statisztikát magában foglaló holisztikus megoldást. A 16S-től a WGS-ig.
A qPCR-adatok elemzése
A jelzőmolekulák fluoreszcenciáját mérik és számszerűsítik; ezek általában vagy festékek (pl. SYBR® Green, etidium-bromid), amelyek beékelődnek a kettős szálú DNS bázisai közé, vagy olyan szondák, amelyeket úgy terveztek, hogy a DNS-en egy specifikus szekvenciához kötődjenek (pl. Molecular Beacons, TaqMan® szondák).
A qPCR-adatok relatív kvantifikálása
A qPCR-adatok kvantifikálására két fő módszer létezik. A relatív kvantifikáció, amely a gyakoribb módszer, a ΔΔCt-adatokat használja, amelyek segítségével meghatározzák a célgén expresszióját vagy gyakoriságát a mintában egy kontrollgénhez viszonyítva, és normalizálják egy referenciagén expressziós arányával. Mivel a cél- és referenciagének hatékonysági (E) értékei eltérnek, ez a módszer figyelembe veszi az E-értékek közötti különbségeket is. Ezt a módszert gyakrabban alkalmazzák a génexpresszió-elemzésben.
A qPCR-adatok abszolút kvantifikálása
A második módszer, az abszolút kvantifikáció, inkább a környezeti mikrobiológiában elterjedt, és a standardgörbét (SC) használja. Az SC-módszer ismert sablonkoncentrációjú (N0) hígítási sorozatot használ a log(N0) és a CT (küszöbciklus) közötti lineáris regresszióval történő standardgörbe létrehozásához. Ezt követően a módszer segítségével kiszámítják a minta sablonkoncentrációját. A módszer alapja, hogy a minta hatékonysági értéke megegyezik a standardéval.
Konkrétabb információkat keres?
Látogasson el a dokumentumkeresőnkbe, ahol megtalálja az adatlapokat, tanúsítványokat és a műszaki dokumentációt.
Kapcsolódó cikkek
- A hagyományos PCR elvégzése után a PCR/qPCR-adatok elemzése agarózgélen vagy újabban kapillárison keresztül történő felbontással történik.
- A valós idejű polimeráz láncreakció lehetővé teszi a kutatók számára, hogy megbecsüljék a mintában lévő kiindulási anyag mennyiségét. Az elemzés dinamikai tartománya sokkal szélesebb, mint a hagyományos PCR-é.
- PCR assay guide navigates you through primer validation and other assay optimization factors to ensure high sensitivity and specificity for optimum DNA/ RNA quantification.
- A PCR munkafolyamatok változékonyságát befolyásolja a mintaforrás, a reverz transzkripció és a vizsgálat tervezése, ami hatással van a reprodukálhatóságra.
- The purpose of Hot Start PCR is to inhibit the PCR reaction in order to reduce nonspecific amplification, prevent the formation of primer dimers, and increase product yields.
- Összes megtekintése (43)
Kapcsolódó protokollok
- SYBR Green qPCR protokollunk a génexpresszió és az RT-PCR reakciók pontos mennyiségi meghatározására tervezett módszer.
- Chromatin Immunoprecipitation qPCR for studying gene regulation across conditions.
- Primer Concentration Optimization Protocol creates reaction matrix for testing primer concentrations against various partners.
- Optimization of qPCR conditions is important for the development of a robust assay. The two main approaches are optimization of primer concentration and/or annealing temperatures.
- Multiplex qPCR employing probe-based chemistries is a demanding application that often requires extensive optimization and validation.
- Összes megtekintése (29)
További cikkek és protokollok
Hogyan segíthetünk?
Ha bármilyen kérdése van, kérjük, nyújtson be ügyfélszolgálati kérelmet
, vagy vegye fel a kapcsolatot ügyfélszolgálati csapatunkkal:
E-mail: custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173 számot
További támogatás
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox – tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémiához, az élettudományokhoz, a kémiai szintézishez és az anyagtudományhoz.
- Ügyfélszolgálati kérelem
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- GYIK
Olvassa el a „Gyakran feltett kérdések” részt, ahol megtalálja a termékeinkkel és szolgáltatásainkkal kapcsolatos leggyakrabban feltett kérdésekre adott válaszokat.