Szekvenálás
A DNS- vagy RNS-szálban lévő nukleinsavak összetételének és sorrendjének meghatározásának képessége mélyreható hatással van a modern genetika megértésére és számos olyan területre, amely elengedhetetlen a betegségek kutatásához és az összes szervezet jobb megértéséhez. A nukleinsavak szekvenálásának képessége nemcsak egy szervezet genetikai kódjának megfejtéséhez hasznos, hanem további molekuláris technológiákkal kombinálva a kutatók számára egy hatékony eszközt biztosít a DNS-szekvenciák egyszerű manipulálásához és e változások szekvenálással történő ellenőrzéséhez. Mivel a kódoló DNS a fehérjék kódolt információjaként funkcionál, a kutatók ma már olyan rekombináns fehérjéket tervezhetnek testre szabottan, amelyek számos funkcionális elemet tartalmaznak, és amelyeket széles körben használnak ugyanilyen nagyszámú fontos kutatási kérdés megválaszolására. A teljes genom szekvenáláshoz szükséges további reagensek és útmutatók a Next-Generation Sequencing forráson találhatók.
Sanger-szekvenálás
Az analitikai kémiai módszerekkel már korán meg lehetett határozni a nukleinsavak összetételét. Fred Sanger és munkatársai azonban olyan módszereket dolgoztak ki - kezdetben sugárzással jelölt emésztett fragmentumok és kétdimenziós frakcionálás segítségével -, amelyekkel az első teljes nukleinsekvenciák némelyikét meg tudták adni. A terület fejlődése több évtizeden át folytatódott, és minden egyes fejlesztés a szekvenált fehérjék és genomok egyre növekvő könyvtárát gyarapította. E fejlesztések közé tartozik a nukleotidok hossz szerinti elválasztása gélelektroforézissel, majd kapilláris elektroforézissel. Emellett a fluoreszcensen jelölt nukleotidok beépítése és az egyes nukleinsavtöredékek automatizált számítógépes elemzése ma már mind meghatározzák a modern Sanger-szekvenálási módszert.
DNS-szekvenálási módszertan
Míg a DNS-szekvenálás módszerei folyamatosan fejlődtek a technológia kezdete óta, számos alapvető összetevőre még mindig szükség van, és azokat a modern DNS-szekvenálási platformok is használják. A DNS-előkészítés jellemzően magában foglalja a DNS izolálását és tisztítását a gazdaszervezetből. További kritikus komponenseket, köztük a szabad DNS-bázisokat, a DNS-primereket, a fluoreszcens címkéket tartalmazó módosított DNS-bázisokat (terminátor bázisok) és a DNS-polimerázt egyetlen edénybe adják össze. Az ezeket a komponenseket tartalmazó edényben egy sor melegítési és hűtési lépésen keresztül a teljes hosszúságú DNS-szekvenciához képest kis DNS-szekvenciákból álló könyvtárat állítanak elő, amelyek mindegyike fluoreszcens végcímkézett terminátor bázissal végződik. A fluoreszcensen végcímkézett nukleotidokat tartalmazó új DNS-szálakat hosszuk szerint szétválasztjuk, egy kapilláris csövön keresztül vezetjük, és méret szerint rendezzük. Ezután lézerrel gerjesztik a fluoreszcens bázist az egyes szálakon, miközben egy kamera rögzíti a jelet. Végül pedig egy számítógépet használnak általában arra, hogy az összegyűjtött információt a teljes hosszúságú DNS-szekvenciává állítsák össze.
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- Validate CRISPR gene editing experiments easily with Sigma-Aldrich® T7E1 mismatch detection kit, ensuring successful editing.
- Understand the benefits of ultrapure water versus DEPC treatment in DNA and RNA experiments to ensure high purity and integrity without risks.
- Improve NGS performance and reliability by optimizing water quality at every step of the workflow, from fragmentation to cleaning to sequencing.
- Amino Acid Codon Wheel for fast RNA translation. Find which amino acid is translated from your RNA sequence quickly and easily.
- Use of MULTI-seq lipid-modified oligos, protocol, and troubleshooting guide for PCR Assays and Sequencing applications.
- Mindent látni (7)
Kapcsolódó protokollok
- Ismerje meg a Sanger-szekvenálás lépéseit vagy a láncvégződési módszert, valamint a DNS-szekvenálás működését és a Sanger-szekvenálás eredményeinek pontos leolvasását a kutatásaihoz.
- Mindent látni (2)
További cikkek és protokollok keresése
Hogyan tudunk segíteni
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.