Mikoplazma-vizsgálat a gyógyszeriparban
A mikoplazma-szennyeződés széles körben elterjedt és visszatérő probléma az élettudományi kutatás és a gyógyszeripar számos sejtkultúra-rendszerében. A mikoplazmák a tenyésztőközegben magas titerre szaporodhatnak anélkül, hogy a tipikus bakteriális szennyeződés jeleit – például a zavarosságot – mutatnák. A tenyésztett sejtekre gyakorolt hatásuk között szerepel az anyagcsere megváltozása, a szaporodás lelassulása és a kromoszóma-aberrációk. Röviden: a mikoplazma-szennyeződés veszélyezteti az érintett sejtvonalak adatainak érvényességét, valamint az élettudományi kutatások eredményeinek megbízhatóságát. Ezért a mikoplazma-vizsgálat, és így a szennyeződésmentes sejtkultúrák fenntartása alapvető fontosságú a sejtalapú kutatások, valamint az olyan termékek gyártása szempontjából, ahol a fogyasztók egészsége kiemelt fontosságú.
Kiemelt kategóriák
A mikrobiális tenyésztőközeg olyan anyagok keveréke, amely elősegíti és támogatja a mikroorganizmusok szaporodását és differenciálódását.
A sterilitási vizsgálat elengedhetetlen része a GMP szerint gyártott, sterilnek minősülő termékek validációs folyamatának.
A biztonság garantálása: A pirogénvizsgálat elengedhetetlen a gyógyszerek és az orvostechnikai eszközök esetében. A monocita-aktivációs teszt (MAT) kimutatja az endotoxint és a nem endotoxikus pirogéneket.
Fedezze fel a gyógyszergyártáshoz kifejlesztett, fejlett környezeti monitoring és aszeptikus folyamat-szimulációs megoldásainkat. Biztosítsa a GMP-előírások betartását a tisztaterekhez, izolátorokhoz és RABS-rendszerekhez kifejlesztett speciális eszközeinkkel és táptalajainkkal.
BIOLÓGIAI BIZTONSÁGI VIZSGÁLATI SZOLGÁLTATÁSOK
Biológiai biztonsági vizsgálati szolgáltatások monoklonális antitestek, sejt- és génterápiás anyagok, valamint vakcinák vizsgálatára, annak biztosítása érdekében, hogy azok mentesek legyenek olyan véletlenszerű kórokozóktól vagy váratlan eredményektől, amelyek katasztrofális kudarcot okozhatnak a további feldolgozási folyamatokban, beleértve a mikoplazma-vizsgálatot is.
A mikoplazma baktériumokról
A mikoplazmák a legkisebb ismert baktériumok közé tartoznak, képesek átjutni a 0,2 µm pórusméretű szűrőkön. Ezek a mikroorganizmusok aerob vagy fakultatív anaerob körülmények között szaporodnak.
A mikoplazmák vagy parazita, vagy szaprofita jellegűek. Számos faj, például az M. pneumoniae, patogén, és tüdőgyulladást, valamint egyéb légúti rendellenességeket okoz az emberben. Az M. genitalium feltehetően szerepet játszik a kismedencei gyulladásos betegségek kialakulásában. Mivel sejtfaluk nincs, a mikoplazmák nem érzékenyek a penicillinre vagy más, ezen a szerkezeten ható antibiotikumokra. Citoplazmatikus membránjaik stabilizálásához a legtöbb mikoplazma szterolokra szorul, amelyeket környezetükből vesznek fel, általában állati gazdáiktól származó koleszterin formájában. Számos Mycoplasma-törzs számos más antibiotikummal szemben is toleráns.
Látogasson el a dokumentumkeresőnkbe, ahol megtalálja az adatlapokat, tanúsítványokat és a műszaki dokumentációt.
A mikoplazma-szennyeződés forrásai
A mikoplazma-szennyeződés forrásait a laboratóriumokban és a gyártás során rendkívül nehéz ellenőrizni. Egyes fajok az emberi bőrön is előfordulnak, és nem megfelelő aszeptikus gyakorlatok következtében bekerülhetnek a tenyészetekbe. Ezenkívül a mikoplazmák szennyezett kiegészítő anyagok, például borjúszérum, vagy – ami a leggyakoribb – más szennyezett sejttenyészetekből való átvitel útján is bekerülhetnek. Ha egy sejtkultúra egyszer már tartalmaz mikoplazmákat, ezek a mikroorganizmusok gyorsan elterjedhetnek, és a tenyészetek kezelése során keletkező aeroszolok és részecskék révén szennyezhetik a laboratórium más területeit is. A helyes aszeptikus laboratóriumi gyakorlatok szigorú betartása elengedhetetlen, és a gyártási területeken a mikoplazma-szennyeződés sikeres ellenőrzése érdekében erősen ajánlott a tenyészetek rutinszerű vizsgálata.
Miért szükséges a Mycoplasma-vizsgálat a gyógyszeriparban?
Azoknak a biofarmakológiai létesítményeknek, amelyek eukarióta sejteket használnak vakcinák előállításához, meg kell vizsgálniuk sejtbankjaikat, vírusmag-tételeiket, valamint a vakcinák nagykereskedelmi tételeit a Mycoplasma-fertőzés szempontjából. Ezen baktériumnemzetség fajai megfertőzik az eukarióta sejteket, megzavarva azok növekedését és anyagcseréjét. Ha a mycoplasmák zavarják a vakcina előállítását, ez hatással lehet a fehérje minőségére és a hozamra, és ami még fontosabb, mellékhatásokat okozhat azoknál a betegeknél, akiknek a végső vakcinaterméket beadják.
A bioreaktorok mycoplasma-fertőzése jelentős idő-, anyag- és bevételveszteséghez vezethet, ha azt nem azonosítják a gyártási folyamat korai szakaszában. Szigorú vizsgálati eljárások nélkül a biofarmakológiai gyártási tételek mycoplasma-fertőzését rendkívül nehéz felismerni, mivel a mycoplasmák jelenléte általában nem okoz pH-változást vagy látható zavarosságot a tenyészközegben. A gyógyszerkönyvben szereplő mikoplazma-vizsgálati módszer a kimutatáshoz mind tenyésztési, mind indikátorsejt-vizsgálatokat magában foglal. Ha az elemzéshez csak két táptalajt használnak, ajánlott a FREY és a FRIIS táptalajok kombinált alkalmazása.
Mikoplazma-vizsgálati módszerek
A minőség-ellenőrzés során fontos, hogy a biogyógyszereket, vakcinákat, sejtkultúrákat és víruskultúrákat különböző időpontokban mycoplasma-vizsgálatnak vessük alá. A három leggyakoribb vizsgálati módszer a következő:
- Mikoplazma-tenyésztés, amelynek során a mikoplazmákra optimalizált baktériumtenyésztő táptalajba beoltják a vizsgálandó mintákat
- DNS-festési módszerek, amelyek során a mikoplazmák sejtmagjait Hoechst-tel vagy DAPI-val kontrasztfestik, majd fluoreszcens mikroszkóppal leképezik
- PCR (polimeráz láncreakció) a bakteriális DNS amplifikálására, amennyiben a mintában mikoplazmák vannak jelen
A mikoplazmák kimutatására szolgáló munkafolyamat az EP 2.6.7 és az USP 63 szerint
* Az inokulálást követő napokon minden folyékony táptalajt átültessünk úgy, hogy legalább egy-egy szilárd táptalaj-lemezt 0,2 ml-rel beoltunk. Az eljárást ismételjük meg a vizsgálat 6. és 8. napja között, majd a 13. és 15. napja között, végül a 19. és 21. napja között. A folyékony táptalajokat 2–3 naponta ellenőrizzük, és ha színváltozás lép fel, végezzünk átültetést.
Megjegyzés: Ezen felül minden szilárd és folyékony táptalajhoz egy-egy pozitív és egy-egy negatív kontrollra van szükség, 14 napos inkubációs idővel.
Készre kevert táptalajok a gyógyszerkönyvi mycoplasma-kimutatáshoz
Teljes körű választékot kínálunk az Európai Gyógyszerkönyv 6.1 (2.6.7.) és az USP 35 (63) szerint a mikoplazmák kimutatásához szükséges, használatra kész folyékony és szilárd tenyésztőközegekből. Használatra kész mikoplazma-tenyésztőközegeink további előkészítési lépések nélkül biztosítják az állandó termékminőséget és a teljes nyomonkövethetőséget, tételre vonatkozó analitikai tanúsítványokkal.
Összetevőik miatt a mikoplazma-tenyésztő táptalajok eltarthatósága általában jóval rövidebb, mint a mikrobiológiai minőség-ellenőrzéshez használt legtöbb egyéb tenyésztő táptalajé. Készre kevert Friis-, Frey- és Hayflick folyékony és szilárd táptalajaink eltarthatósági idejét az agarlemezek esetében 4 hónapra, a táptalajok esetében pedig 6 hónapra meghosszabbítottuk. Ismerje meg a hosszabb eltarthatósági idejű, készre kevert táptalajok teljes választékát, amelyek megkönnyítik a mikoplazma-vizsgálatokat.
Kapcsolódó cikkek
- 10. sejttenyésztési protokoll: A sejtek vizsgálata mikoplazma-szennyezettségre Hoechst DNS-festésselSejttenyésztési protokoll a sejtvonalak mikoplazma-szennyezettségének vizsgálatára Hoechst 33342 indirekt DNS-festéssel.
- Összes megtekintése (2)
További cikkek
Hogyan segíthetünk?
Ha bármilyen kérdése van, kérjük, nyújtson be ügyfélszolgálati kérelmet
, vagy vegye fel a kapcsolatot ügyfélszolgálati csapatunkkal:
E-mail: custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173 számot
További támogatás
- Kromatogram-keresés
Használja a kromatogram-keresőt a mintában található ismeretlen vegyületek azonosításához.
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Ügyfélszolgálati kérelem
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- GYIK
Olvassa el a „Gyakran feltett kérdések” részt, ahol megtalálja a termékeinkkel és szolgáltatásainkkal kapcsolatos leggyakrabban feltett kérdésekre adott válaszokat.