Sterilitásvizsgálat
A sterilitási vizsgálat egy alapvető GMP-követelmény, amelynek célja annak igazolása, hogy a gyógyszeripari termékek, az orvostechnikai eszközök, a biológiai készítmények, valamint a sejt- és génterápiák a betegek számára történő beadás előtt mentesek az életképes mikroorganizmusoktól. A sikertelen sterilitási vizsgálat – függetlenül attól, hogy valódi pozitív vagy hamis eredményről van szó – súlyos következményekkel jár: termékvisszahívásokkal, a betegek biztonságát veszélyeztető kockázatokkal és költséges hatósági vizsgálatokkal.
Ahogy a gyógyszerkönyvi szabványok fejlődnek és a szabályozói ellenőrzés szigorodik, a modern sterilitási vizsgálati programoknak három, egymással összefüggő kihívással kell megbirkózniuk: a módszertani pontossággal, az adatintegritással és a forgalomba hozatal gyorsaságával. A rendelkezésre álló sterilitási vizsgálati módszerek, azok szabályozási kereteinek, valamint a digitális munkafolyamatok és a gyors mikrobiológiai módszerek legújabb fejleményeinek megértése elengedhetetlen minden GMP szerint működő minőség-ellenőrző laboratórium számára.
A termékéhez és csomagolási formájához legmegfelelőbb vizsgálati módszer kiválasztásától kezdve az adatintegritással és a forgalomba hozatal gyorsaságával kapcsolatos, folyamatosan változó szabályozási elvárásoknak való megfelelésig ez az útmutató végigvezeti Önt a sterilitásvizsgálat minden fontos szempontján.
- Gyógyszeripari sterilitásvizsgálati módszerek
- Membránszűréses sterilitási vizsgálat
- Közvetlen beoltásos sterilitási vizsgálat
- Gyors mikrobiológiai módszerek (RMM) a sterilitásvizsgálatban
- Adatintegritás és irányítás a sterilitási vizsgálatokban
- Sterilitási vizsgálati alkalmazások: a gyógyszerektől a sejt- és génterápiákig
- A sterilitásvizsgálat munkafolyamatai
Kiemelt kategóriák
Mikrobiológiai minőség-ellenőrzéshez szükséges, sterilitásvizsgálatra szolgáló laboratóriumi műszerek és fogyóeszközök: sterilitásvizsgálati táptalajok, szivattyúk, berendezések és kiegészítők.
A biztonság garantálása: A pirogénvizsgálat elengedhetetlen a gyógyszerek és az orvostechnikai eszközök esetében. A monocita-aktivációs teszt (MAT) kimutatja az endotoxint és a nem endotoxikus pirogéneket.
Gyorsítsa fel az eredmények megszerzését a teljes körű membránszűrő rendszereinkkel végzett gyors mikrobiológiai vizsgálatok segítségével; ezeket a rendszereket bioterhelés-vizsgálatokhoz, élelmiszer- és italelemzésekhez, valamint kannabisz-mikrobiológiai vizsgálatokhoz használják.
Gyógyszeripari sterilitásvizsgálati módszerek
A gyógyszeripari termékek szabvány szerinti sterilitási vizsgálatát az USP <71>, a Ph. Eur. 2.6.1 és a JP <4.06> szabályozza, amelyek előírják, hogy a mintákat két különálló táptalajon, 14 napos inkubációs időszak alatt kell tenyészteni. A mikroorganizmusok átfogó lefedettségének biztosítása érdekében két tenyésztőközeget használnak: a folyékony tioglikolát-tenyésztőközeget (FTM) az anaerob és aerob baktériumok számára (32,5 °C-on inkubálva), valamint a szójabab-kazein-emésztő tápközeget (SCDM), más néven triptikáz-szója-húslevest (TSB) az aerob baktériumok és gombák számára (22,5 °C-on inkubálva). Az inkubáció után megfigyelt bármilyen zavarosság potenciális mikrobiális szennyeződésre utal, ezért azt ki kell vizsgálni.
Két, a gyógyszerkönyvekben szereplő módszer elismert: a membránszűrés és a közvetlen beoltás. A módszer kiválasztása a termék jellegétől, csomagolási formájától és fizikai-kémiai tulajdonságaitól függ. Amennyiben a termék jellege megengedi, a membránszűrés a választandó módszer – amint azt az USP <71>, a Ph. Eur. 2.6.1 és a JP <4.06> előírja –, mivel ez nagyobb érzékenységgel rendelkezik, és képes eltávolítani a gátló anyagokat. A közvetlen beoltás akkor alkalmazható, amikor a szűrés nem kivitelezhető.
Bár a 14 napos inkubációs időszak továbbra is a gyógyszerkönyvi szabvány, az ATP-biolumineszcencia-technológián alapuló gyors mikrobiológiai módszereket (RMM-ek) a szabályozó hatóságok egyre inkább elfogadják a rövid eltarthatóságú termékek, beleértve a sejt- és génterápiákat is, esetében. Az új USP <73> fejezet – „ATP-biolumineszcencián alapuló mikrobiológiai módszerek a rövid eltarthatóságú termékekben előforduló szennyeződések kimutatására” – egyértelmű szabályozási keretet biztosít az RMM-ek bevezetéséhez, valamint e technológia validálásához és megvalósításához, 2025. augusztusától hatályba lépve.
A választott módszertől függetlenül az adatintegritási követelmények egyformán vonatkoznak minden sterilitási vizsgálati munkafolyamatra: minden vizsgálati adatnak teljes mértékben nyomon követhetőnek, auditálásra késznek és az ALCOA++, a 21 CFR 11. rész, valamint az EU 11. melléklet előírásainak megfelelőnek kell lennie – a minta átvételétől a végső eredmény rögzítéséig.
Membránszűréses sterilitási vizsgálat
Látogasson el a dokumentumkereső oldalunkra, ahol megtalálja az adatlapokat, tanúsítványokat és műszaki dokumentációkat.
Az iparág úttörőjeként több mint 50 éves tapasztalattal rendelkező Steritest® megoldás megbízható eredményeket biztosító, megbízható és biztonságos sterilitási vizsgálatot kínál. A membránszűrés az USP <71>, a Ph. Eur. 2.6.1 és a JP <4.06> szerint a szűrhető gyógyszeripari termékek esetében előírt szabályozási módszer. A mintát egy 0,45 µm-es membránszűrőn vezetik át, ahol a mikroorganizmusok visszamaradnak, majd azokat megfelelő táptalajon tenyésztik.
Ez a módszer számos fontos előnnyel jár a közvetlen beoltáshoz képest:
- Nagyobb érzékenység — a teljes mintát, vagy annak összetett változatát egyetlen membránon szűrik át
- Gátlóanyagok eltávolítása — az antibiotikumokhoz vagy tartósítószerekhez hasonló antimikrobiális vegyületek az inkubálás előtt kiöblíthetők, így megelőzhetők a hamis negatív eredmények
- Zárt rendszerű védelem — a modern, zárt rendszerű szűrőberendezések biztosítják, hogy a termék a vizsgálat során soha ne kerüljön kapcsolatba a környezettel, ami jelentősen csökkenti az idegen szennyeződés és az érvénytelen vizsgálati eredmények kockázatát
A zárt rendszerű, egyszer használatos membránszűrő eszközök használata a GMP-nek megfelelő sterilitási vizsgálati környezetekben – mind a lamináris áramlású burákban, mind az izolátorokban – bevált gyakorlatnak számít.
Közvetlen beoltásos sterilitásvizsgálat
A közvetlen beoltásos sterilitási vizsgálat során a minta kis mennyiségét aszeptikusan átviszik egy megfelelő táptalajba, majd inkubálják. Bár a módszer végrehajtása egyszerű, számos korlátozással jár, amelyeket a laboratóriumoknak figyelembe kell venniük:
- Csökkent érzékenység — csak kis mennyiségű mintát lehet beoltani, ami növeli annak kockázatát, hogy az alacsony szintű szennyeződést nem észlelik
- A zavarosság okozta zavar — a természetüknél fogva zavaros vagy színes termékek elrejthetik a mikrobiális növekedést a vizuális vizsgálat során
- Antimikrobiális gátlás — az antimikrobiális tulajdonságokkal rendelkező termékeket az inokulálás előtt semlegesíteni kell a hamis negatív eredmények elkerülése érdekében
Gyors mikrobiológiai módszerek (RMM) a sterilitás vizsgálatához
Ahogy a szabályozási keretek az innovációhoz igazodva fejlődnek, a gyors mikrobiológiai módszerek (RMM-ek) egyre inkább elismert, tudományosan validált alternatívákká válnak a hagyományos, gyógyszerkönyvi sterilitási vizsgálatok helyett. Az RMM-ek különösen fontosak a rövid eltarthatósági idejű termékek – például a sejt- és génterápiák, a radiofarmakonok és a rövid élettartamú biológiai készítmények – esetében, ahol a 14 napos inkubációs időszak összeegyeztethetetlen a termék forgalomba hozatalának határidejével vagy a betegek kezelési ütemtervével.
A legelterjedtebb RMM-technológiák közül az ATP-biolumineszcencia a biolumineszcens reagenssel való reakciót követően az életképes mikroorganizmusok által kibocsátott fényt érzékeli, lehetővé téve a szennyeződés gyors, érzékeny és kvantitatív kimutatását. A hagyományos, inkubáción alapuló módszerekkel ellentétben az ATP-biolumineszcencia a szubjektív, vizuális zavarosság-értékelést kvantitatív, műszeres méréssel váltja fel, lehetővé téve a korábbi és jobban reprodukálható eredmények értelmezését.
Az USP <73> – „ATP-biolumineszcencián alapuló mikrobiológiai módszerek a rövid élettartamú termékek szennyeződésének kimutatására” című szabvány 2025. augusztusában történő hatálybalépése jelentős szabályozási mérföldkövet jelent, amely a laboratóriumok számára egyértelmű gyógyszerkönyvi keretrendszert biztosít az RMM-alapú sterilitási vizsgálatok bevezetéséhez és validálásához. Ezt kiegészíti az USP <1071>, amely szélesebb körű iránymutatást nyújt a gyors mikrobiológiai módszerek bevezetéséhez és validálásához.
Az RMM-ek nemcsak a végtermékek sterilitási vizsgálatára alkalmasak, hanem a gyártási munkafolyamat során végzett folyamatközi mikrobiális terhelés-monitorozásra is, így sokoldalú és előírásoknak megfelelő megoldást kínálnak a laboratóriumok számára számos minőség-ellenőrzési alkalmazáshoz.
A Milliflex® Rapid System 2.0 teljes mértékben megfelel az USP <73> követelményeinek, és lehetővé teszi laboratóriumának, hogy validált, előírásoknak megfelelő, RMM-alapú sterilitási vizsgálati munkafolyamatot vezessen be – amely 5 napon belül vagy annál rövidebb idő alatt szolgáltat eredményeket.
Adatintegritás és adatkezelés a sterilitási vizsgálatok során
A sterilitási vizsgálat eredménye csak annyira megbízható, amennyire az azt alátámasztó adatok – és a világszerte működő szabályozó hatóságok az adatintegritást helyezik a GMP mikrobiológiai előírások betartásának középpontjába. A módszertanon túl ugyanolyan fontosságot tulajdonítanak annak is, hogy a sterilitási vizsgálati adatok hogyan kerülnek előállításra, rögzítésre és karbantartásra a vizsgálat teljes életciklusa során. A szabályozó hatóságok, köztük az FDA, az EMA és a PMDA, előírják, hogy minden laboratóriumi adatnak meg kell felelnie az ALCOA++ elveknek: az adatoknak nyomon követhetőnek, olvashatónak, időszerűnek, eredetinek és pontosnak kell lenniük, emellett teljes körűségre, következetességre és elérhetőségre is vonatkoznak további elvárások.
Az Egyesült Államokban a 21 CFR 11. rész határozza meg az elektronikus nyilvántartásokra és az elektronikus aláírásokra vonatkozó követelményeket, így a digitális dokumentációt jogilag egyenértékűvé téve a papír alapú nyilvántartásokkal. Európában az EU 11. melléklete hasonló elvárásokat támaszt a GMP-környezetben működő számítógépes rendszerekkel szemben. Ezek a szabályozások együttesen egyértelmű keretrendszert határoznak meg a minőség-ellenőrzési laboratóriumi adatok – beleértve a sterilitási vizsgálatokat is – adatintegritására vonatkozóan: a valós idejű adatgyűjtést, az automatikus ellenőrzési nyomvonal létrehozását és a teljes, végpontok közötti digitális nyomonkövethetőséget – a kezelő azonosításától és a műszeradatoktól kezdve a mintákra vonatkozó információkon át a végső eredményekig – a szabályozó hatóságok egyre inkább elvárják a GMP-ellenőrzések során, és ezeket az iparág legjobb gyakorlatának tekintik. Az M-Trace® szoftver és mobilalkalmazás segít laboratóriumának megfelelni ezeknek a szabályozási elvárásoknak.
Sterilitási vizsgálatok alkalmazási területei: a gyógyszeripartól a sejt- és génterápiákig
A sterilitási vizsgálat rutin minőség-ellenőrzési követelmény a GMP-szabályozás alá tartozó iparágak széles körében. Míg az alapelvek változatlanok maradnak, a módszer megválasztása, a szabályozási keret és az eredmények gyors rendelkezésre állására vonatkozó követelmények szegmensenként jelentősen eltérnek:
- A gyógyszeripari termékek – beleértve az injekciós készítményeket, a szemészeti készítményeket és az infúziós folyadékokat – jelentik a sterilitási vizsgálatok legnagyobb részét, amelyekre az USP <71>, a Ph. Eur. 2.6.1 és a JP <4.06> előírások vonatkoznak
- Biológiai készítmények, bioszimilárok és vakcinák — steril parenterális termékek, amelyeknél a GMP szerint szigorú tételengedélyezési vizsgálat szükséges
- Orvostechnikai eszközök – az eszköz formájához igazított sterilitási vizsgálatok, közvetlen átvitel vagy terméköblítés módszerek alkalmazásával
- Sejt- és génterápiák (CGT) és ATMP-k — rövid vagy rendkívül rövid eltarthatósági idejű termékek, amelyek esetében a gyors mikrobiológiai módszerek gyakran az egyetlen megvalósítható lehetőség az aznapi vagy másnapi forgalomba hozatali döntések meghozatalához
- Radiofarmakonok — olyan termékek, amelyek felezési ideje órában mérhető, és amelyek esetében a hagyományos 14 napos inkubáció nem kivitelezhető, ezért egyre inkább előírják a gyors mikrobiológiai módszerek (RMM-ek) alkalmazását
- Szöveti és regeneratív orvoslás — sterilitás igazolása a transzplantáció vagy az alkalmazás előtt"
A sterilitásvizsgálati munkafolyamatok
Hagyományos, gyógyszerkönyvi előírások szerinti munkafolyamat — membránszűrés
Az alábbi lépésenkénti munkafolyamat az USP <71>, a Ph. Eur. 2.6.1 és a JP <4.06> szerint végzett membránszűréses sterilitási vizsgálatot írja le.
A vizsgálat előkészítése — Szerelje össze a membránszűrő eszközt, és csatlakoztassa a csöveket a sterilitásvizsgálati szivattyúhoz a szabályozott környezetben (lamináris áramlású burkolat vagy izolátor)
- A membrán/szűrő öblítése és előnedvesítése — Nedvesítse elő a membránt a szűrési hatékonyság optimalizálása és a termék szűrőhöz való adszorpciójának minimalizálása érdekében
- Minta szűrése — Szűrjön azonos térfogatú terméket mindkét tartályba; a mikroorganizmusok a 0,45 µm-es membránon
visszatartódnak - Öblítés — A hamis negatív eredmények
elkerülése érdekében távolítsa el a gátló vegyületeket egy validált öblítőoldattal - Tápközeg feltöltése — Töltse fel a membránszűrő eszközöket SCDM (TSB) és FTM steril tápközegekkel
- Inkubálás — 14 napig 32,5 °C-on (FTM) és 22,5 °C-on (SCDM). Ezek a hőmérsékletek a gyógyszerkönyvi tartományok középértékeit jelentik, amelyek rendre 30–35 °C és 20–25 °C, az USP <71>, a Ph. Eur. 2.6.1 és a JP <4.06>
előírásai szerint - Eredményvizsgálat — Vizuális zavarosság-ellenőrzés; bármilyen zavarosságot potenciális mikrobiális szennyeződésként
kell kivizsgálni - Digitális vizsgálati jegyzőkönyv — Az összes vizsgálati lépés, a kezelői műveletek és a műszeradatok egyidejű, automatikus rögzítése egyetlen, ellenőrizhető elektronikus jegyzőkönyvben támogatja a 21 CFR 11. rész, az ALCOA++ adatintegritási elvek betartását, valamint a szabályozói ellenőrzésre való felkészültséget
A lépések leírása összhangban van az USP <71>, a Ph. Eur. 2.6.1 és a JP <4.06> gyógyszerkönyvi követelményeivel. A 8. lépés a gyógyszerkönyvi követelményeken túlmutatva tükrözi a 21 CFR 11. rész és az EU 11. melléklet szerinti, az adatintegritásra vonatkozó jelenlegi szabályozási elvárásokat.
Gyors sterilitásvizsgálati munkafolyamat – ATP-biolumineszcencia
A rövid eltarthatósági idejű termékek – ideértve a sejt- és génterápiákat, a radiofarmakonokat és a rövid élettartamú biológiai készítményeket – esetében a hagyományos 14 napos inkubációs időszak gyakran összeegyeztethetetlen a termékkibocsátási határidőkkel. A gyors mikrobiológiai módszerek (RMM-ek) tudományosan validált, szabályozási szempontból elfogadott alternatívát kínálnak.
Az ATP-biolumineszcencia a sterilitásvizsgálat egyik legelterjedtebb RMM-technológiája. A módszer a biolumineszcens reagenssel való reakciót követően az életképes mikroorganizmusok által kibocsátott fényt érzékeli, lehetővé téve a gyors, érzékeny és kvantitatív szennyeződés-kimutatást. Az új USP <73> fejezet – „ATP-biolumineszcencián alapuló mikrobiológiai módszerek a rövid élettartamú termékekben előforduló szennyeződés kimutatására” – egyértelmű szabályozási keretet biztosít az RMM-ek bevezetéséhez, amely 2025. augusztusától lép hatályba.
A tipikus ATP-biolumineszcens gyors sterilitásvizsgálati munkafolyamat a következőképpen zajlik:
- Minta szűrése — A mintát egy speciális membránon szűrik át, amely visszatartja az életképes mikroorganizmusokat
- ATP-reagens felvitele — A biolumineszcencia-reagenseket a membránra viszik fel, az életképes sejtekre irányítva
- Automatizált detektálás és mennyiségi meghatározás — Egy rendkívül érzékeny detektáló kamera rögzíti és számszerűsíti az életképes mikroorganizmusoktól származó fényjeleket
- Eredmények 5 napon belül – Az eredmények akár 75%-kal gyorsabban állnak rendelkezésre, mint a hagyományos, 14 napos gyógyszerkönyvi módszer esetében. A tényleges eredményelérés ideje a validált módszertől és a termék típusától függ.
- Elektronikus vizsgálati jegyzőkönyv — Minden eredményt 21 CFR Part 11-nek megfelelő, teljes mértékben ellenőrizhető digitális jegyzőkönyvben rögzítenek
Ez a munkafolyamat az USP <73>-ban leírt ATP-biolumineszcencia-technológián alapul. Az 5. lépés tükrözi a 21 CFR Part 11 és az EU 11. melléklet szerinti, az adatintegritásra és az elektronikus nyilvántartásra vonatkozó jelenlegi szabályozási elvárásokat.
Az ATP-biolumineszcenciát alkalmazó RMM-ek egyaránt alkalmasak sterilitási vizsgálatokra és a gyártási folyamat közbeni mikrobiális terhelés-monitorozásra, így a laboratóriumok számára sokoldalú, gyors és a szabályozási követelményeknek megfelelő megoldást nyújtanak a gyártási munkafolyamat egészében.
Kapcsolódó cikkek
- The user-friendly Steritest® Symbio pumps and accessories are designed for easy and reliable sterility testing. The system improves your workflow and maximizes safety, confidence, and convenience.
- Sterility testing is one of the most crucial steps in pharmaceutical product release. Regulatory-compliant membrane filtration sterility testing devices ensure the safety of pharmaceutical products.
- Our sterility testing media and fluids are formulated and tested to meet EU, US, and JP pharmacopeia regulations, and are supplied with full certification containing pH, sterility, and growth promotion information.
- Direct inoculation of culture media is the method of choice for sterility testing of non-filterable samples. Select from our range of sterility testing media including soybean casein digest medium (TSB), and Fluid Thioglycollate medium (FTM standard and clear).
- Irradiated Isopropyl Myristate (IPM) enhances filterability for sterility testing of viscous products using the Steritest® NEO device.
- Összes megtekintése (9)
Kapcsolódó protokollok
- Cell culture protocol for testing cell lines for bacterial and fungal contamination.
További cikkek és protokollok
Hogyan segíthetünk?
Ha bármilyen kérdése van, kérjük, nyújtson be ügyfélszolgálati kérelmet
, vagy vegye fel a kapcsolatot ügyfélszolgálati csapatunkkal:
E-mail: custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173 számot
További támogatás
- Kromatogram-keresés
Használja a kromatogram-kereső funkciót a mintában található ismeretlen vegyületek azonosításához.
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Ügyfélszolgálati kérelem
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- GYIK
Olvassa el a „Gyakran feltett kérdések” részt, ahol megtalálja a termékeinkkel és szolgáltatásainkkal kapcsolatos leggyakrabban feltett kérdésekre adott válaszokat.
