Test sui micoplasmi nel settore farmaceutico
La contaminazione da micoplasmi è un problema diffuso e ricorrente per molti sistemi di coltura cellulare nella ricerca nel campo delle scienze della vita e nell’industria farmaceutica. I micoplasmi possono raggiungere titoli elevati nei terreni di coltura senza mostrare i tipici segni di contaminazione batterica, come la torbidità. I loro effetti sulle cellule in coltura includono alterazioni del metabolismo, rallentamento della proliferazione e aberrazioni cromosomiche. In sintesi, la contaminazione da micoplasmi compromette la validità dei dati relativi alle linee cellulari interessate e dei risultati nella ricerca nel campo delle scienze della vita. Ciò rende i test per i micoplasmi, e quindi il mantenimento di colture cellulari prive di contaminazione, fondamentali per la ricerca basata sulle cellule e per la produzione di beni in cui la salute dei consumatori è una preoccupazione primaria.
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Un terreno di coltura microbico è una miscela di sostanze che favorisce e sostiene la crescita e la differenziazione dei microrganismi.
I test di sterilità costituiscono una parte essenziale della convalida dei prodotti fabbricati secondo le GMP e che si dichiarano sterili.
Garantire la sicurezza: i test pirogenici sono fondamentali per i prodotti farmaceutici e i dispositivi medici. Il test di attivazione dei monociti (MAT) rileva sia le endotossine che i pirogeni non endotossici.
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SERVIZI DI ANALISI DI BIOSICUREZZA
Servizi di analisi di biosicurezza per lo studio di anticorpi monoclonali (mAb), materiali per la terapia cellulare e genica e vaccini, al fine di garantire che siano privi di agenti avventizi o di risultati inattesi che possano causare guasti catastrofici nelle fasi di lavorazione a valle, tra cui: analisi per la ricerca di micoplasmi.
Informazioni sui batteri micoplasmi
I micoplasmi sono tra i batteri più piccoli conosciuti, in grado di passare attraverso filtri con pori di 0,2 µm. Questi microrganismi crescono in condizioni aerobiche o anaerobiche facoltative.
I micoplasmi possono essere parassiti o saprofiti. Diverse specie, ad esempio M. pneumoniae, sono patogene e causano polmonite e altri disturbi respiratori nell’uomo. Si presume che M. genitalium sia coinvolto nelle malattie infiammatorie pelviche. Essendo batteri privi di parete cellulare, i micoplasmi non sono sensibili alle penicilline né ad altri antibiotici che agiscono su questa struttura. Per stabilizzare le loro membrane citoplasmatiche, la maggior parte dei micoplasmi necessita di steroli, che assorbono dall’ambiente circostante, solitamente sotto forma di colesterolo proveniente dai loro ospiti animali. Molti ceppi di Mycoplasma sono inoltre tolleranti a una varietà di altri antibiotici.
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Fonti di contaminazione da micoplasmi
Le fonti di contaminazione da micoplasmi in laboratorio e nei processi produttivi sono molto difficili da controllare. Alcune specie sono presenti sulla pelle umana e possono essere introdotte nelle colture a causa di pratiche asettiche inadeguate. Inoltre, i micoplasmi possono essere introdotti tramite integratori contaminati, come il siero fetale bovino o, più comunemente, per trasmissione da altre colture cellulari contaminate. Una volta che una coltura cellulare contiene micoplasmi, questi microbi possono diffondersi rapidamente e contaminare altre aree del laboratorio attraverso aerosol e particelle generate durante la manipolazione delle colture. Il rigoroso rispetto delle buone pratiche asettiche di laboratorio è fondamentale, e si raccomanda vivamente di effettuare test di routine sulle colture per un controllo efficace della contaminazione da micoplasmi nelle aree di produzione.
Perché effettuare test per il Mycoplasma nell’industria farmaceutica?
Gli stabilimenti biofarmaceutici che utilizzano cellule eucariotiche per la produzione di vaccini devono sottoporre a test le proprie banche cellulari, i lotti di semi-virus e i vaccini sfusi per verificare la presenza di contaminazione da micoplasmi. Le specie appartenenti a questo genere batterico infettano le cellule eucariotiche, compromettendone la crescita e il metabolismo. Quando i micoplasmi interferiscono con la produzione dei vaccini, ciò può influire sulla qualità e sulla resa delle proteine e, cosa ancora più importante, causare effetti collaterali nei pazienti a cui viene somministrato il prodotto vaccinale finale.
La contaminazione dei bioreattori da micoplasmi può comportare una significativa perdita di tempo, materiali e ricavi, a meno che non venga individuata nelle prime fasi del processo di produzione. In assenza di rigorose procedure di analisi, la contaminazione da micoplasmi dei lotti di produzione biofarmaceutica è estremamente difficile da individuare, poiché la presenza di micoplasmi non comporta generalmente variazioni del pH né torbidità visiva nei terreni di coltura. Il metodo di analisi dei micoplasmi previsto dalla farmacopea prevede sia test di coltura che test con cellule indicatrici per il rilevamento. Se per l’analisi vengono utilizzati solo due terreni di coltura, si raccomanda di impiegare in combinazione i terreni FREY e FRIIS.
Metodi di analisi dei micoplasmi
È importante sottoporre a test per la ricerca dei micoplasmi i prodotti biofarmaceutici, i vaccini, le colture cellulari e le colture virali in varie fasi del controllo di qualità. I tre metodi di analisi più comuni sono:
- Coltura dei micoplasmi, in cui i terreni di coltura batterici ottimizzati per i micoplasmi vengono inoculati con i campioni da analizzare
- Metodi di colorazione del DNA, in cui i nuclei dei micoplasmi vengono controcolorati con Hoechst o DAPI e osservati al microscopio a fluorescenza
- PCR (reazione a catena della polimerasi) per amplificare il DNA batterico qualora nel campione siano presenti micoplasmi
Flusso di lavoro per l'individuazione dei micoplasmi secondo EP 2.6.7 e USP 63
* Nei giorni successivi all’inoculazione, effettuare una subcoltura di ciascun terreno liquido inoculando 0,2 mL su almeno 1 piastra di ciascun terreno solido. Ripetere la procedura tra il 6° e l’8° giorno, poi nuovamente tra il 13° e il 15° giorno e ancora tra il 19° e il 21° giorno del test. Osservare i terreni liquidi ogni 2 o 3 giorni e, se si verifica un cambiamento di colore, effettuare una subcoltura.
Nota: Inoltre, è necessario un controllo positivo e uno negativo per ciascun terreno solido e liquido, con un tempo di incubazione di 14 giorni.
Terreni di coltura pronti all’uso per la rilevazione dei micoplasmi secondo le norme farmacopeiche
Forniamo una gamma completa di terreni di coltura liquidi e solidi pronti all’uso necessari per la rilevazione dei micoplasmi secondo la Farmacopea Europea 6.1 (2.6.7.) e l’USP 35 (63). Senza ulteriori fasi di preparazione, i nostri terreni di coltura per micoplasmi pronti all’uso garantiscono una qualità costante del prodotto e una tracciabilità completa con certificati di analisi specifici per ogni lotto.
A causa dei loro ingredienti, i terreni di coltura per micoplasmi hanno generalmente una durata di conservazione molto più breve rispetto alla maggior parte degli altri terreni di coltura utilizzati per il controllo di qualità microbiologico. La durata di conservazione dei nostri terreni di coltura liquidi e solidi Friis, Frey e Hayflick pronti all’uso è stata estesa a 4 mesi per le piastre di agar e a 6 mesi per i brodi. Scoprite la nostra gamma completa di terreni di coltura pronti all’uso con una durata di conservazione più lunga per semplificare i test sui micoplasmi.
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