Test di sterilità

Le procedure di verifica della sterilità vengono applicate ai prodotti in molti settori industriali, tra cui quello alimentare e delle bevande, ma i settori principali sono quello farmaceutico e quello medico, dove la verifica della sterilità dei prodotti rimane un compito fondamentale e di routine per i microbiologi.

• Metodi di verifica della sterilità nel settore farmaceutico
• Metodi di verifica della sterilità per dispositivi medici
• Flusso di lavoro dei test di sterilità

Metodi di verifica della sterilità farmaceutica

I metodi farmacopeici per il test di sterilità dei prodotti farmaceutici richiedono che i campioni vengano coltivati in due terreni di coltura separati. Nei test di sterilità vengono utilizzati due diversi tipi di terreni di coltura per favorire la crescita di anaerobi residui, oltre che di aerobi e funghi. Il terreno fluido tioglicolato (FTM) viene solitamente utilizzato per la coltura di batteri anaerobici e di alcuni batteri aerobici, mentre il terreno di digestato di caseina e soia (SCDM) viene solitamente utilizzato per la coltura di funghi e batteri aerobici. I campioni vengono incubati per 14 giorni rispettivamente a 32,5 °C e 22,5 °C, prima dell'esame. Qualsiasi torbidità nei terreni di coltura può indicare una crescita e deve essere indagata. Esistono due metodi raccomandati per i test di sterilità dei prodotti farmaceutici: la filtrazione su membrana e l'inoculazione diretta.

Test di sterilità mediante filtrazione a membrana

Il test di sterilità mediante filtrazione su membrana è il metodo normativo di scelta per i prodotti farmaceutici filtrabili, come citato nell'USP <71>, nella Farmacopea UE < 2.6.1> e nella Farmacopea JP <4.06>. I campioni vengono fatti passare attraverso un filtro a membrana da 0,45 µm in un contenitore di filtrazione e viene aggiunto un terreno di coltura per l'incubazione. Questo metodo di test di sterilità può fornire una maggiore sensibilità rispetto ad altri metodi, poiché l'intero campione, o un campione composito, viene fatto passare attraverso un unico filtro. La filtrazione offre inoltre l'opportunità di eliminare i componenti del campione che potrebbero causare torbidità o inibire la crescita, come antibiotici o conservanti.

Test di sterilità mediante inoculazione diretta

Nell'inoculazione diretta, un piccolo volume di campione viene prelevato in modo asettico dall'unità campione e inoculato direttamente in un volume adeguato di terreno di coltura prima dell'incubazione. Sebbene semplice, questo metodo di analisi può presentare alcune limitazioni significative. È possibile inoculare nel terreno di coltura solo piccoli volumi di prodotto, limitando la sensibilità del test. Se il campione appare torbido o opaco dopo l'inoculazione, può essere difficile distinguere la torbidità dalla crescita microbica al termine del periodo di incubazione. Inoltre, se il prodotto ha proprietà antimicrobiche, il campione deve essere neutralizzato in modo da non inibire la crescita microbica.

Metodi di test di sterilità per dispositivi medici

Per i test di sterilità dei dispositivi medici si raccomanda il test di sterilità a trasferimento diretto. Il dispositivo da testare è a contatto diretto con il mezzo di prova per tutto il periodo di incubazione, durante il quale qualsiasi microrganismo presente all'interno o sulla superficie del dispositivo crescerà e prolifererà. Inoltre, il test di sterilità con lavaggio del prodotto è preferibile per i prodotti con tubi cavi, come i sistemi di trasfusione e infusione, in cui il percorso del fluido è etichettato come sterile. Il lume del prodotto viene lavato con un fluido di risciacquo, l'eluato viene filtrato su membrana e posto in un mezzo adatto all'incubazione.

Flusso di lavoro del test di sterilità

1. Preparazione del test: inserire il tubo del dispositivo di filtrazione a membrana nella pompa

2. Pre-bagnatura del filtro: pre-bagnare il dispositivo di filtrazione a membrana per ottimizzare la filtrazione e ridurre al minimo l'adesione del prodotto al filtro.

3. Filtrazione del campione: filtrare una quantità uguale di prodotto in entrambi i contenitori. I microrganismi vengono trattenuti da un filtro con pori di 0,45 µm.

4. Risciacquo: tutti i composti inibitori vengono risciacquati utilizzando una o più soluzioni di risciacquo adeguate.

5. Riempimento dei terreni di coltura: i dispositivi di filtrazione a membrana vengono riempiti con terreni di coltura sterili TSB e FTM.

6. Tempo di incubazione: 14 giorni.

7. Risultati finali del test: controllo visivo della torbidità/assenza di torbidità.