Media Preparation
세포 배양 배지 제조는 포유류 세포 성장과 실험 결과에 커다란 영향을 줍니다. 유사하게, 미생물 in vitro의 배양을 지지하도록 조성된 특별한 배지가 있습니다. 배양 배지는 세포 성장을 위한 에너지원 그리고 세포 공정을 조절하는 화합물을 제공합니다. 원핵 및 진핵 배양 모두 특정한 성장 요구조건을 가집니다. 배지 선택은 배양 유형, 배양 목적 그리고 세포 밀도 요구조건에 따릅니다.
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Media Preparation
상용 배양 배지는 탈수된 또는 분말형 형태, 액상 농축액 또는 작업 용액으로 제공됩니다. Broth 배양용 탈수 배지는 멸균 전 증류수에 용해시키고 최종 pH를 조정하여 제조해야 합니다. 아가 배양을 위한 분말형 배지는 무균 기법을 이용하여 무균 페트리접시에 붓기 이전에 증류수에 용해시켜, 교반하여, 끓이거나 오토클레이브 되어야합니다. 액상 농축액으로 제공되는 배양 배지는 증류수에서 무균적으로 희석되어, pH를 조정하여 저장을 위해 무균 용기에 배분되어야 합니다. 멸균 여과 및/또는 무균 조건에서 일체의 필요한 혈청 또는 기타 보충제를 추가하고 세포 성장을 위한 적정 온도로 가온한 이후 작업 용액으로 제공된 배양 배지는 사용 준비가 됩니다.
배양 배지 멸균
분말에서 제조된 배양 배지는 사용 이전에 여과, 가열 또는 가압증기멸균법으로 멸균해야 합니다. 액상 배지는 멸균 상태의 즉석 사용이 가능한 농도로 공급되지만, 사용 전에 혈청 또는 기타 보충제를 추가하는 경우 특히 멸균 여과가 권장됩니다. 멸균 이후, 교차 오염이나 원하지 않는 미생물의 성장을 방지하기 위해서 배양 배지를 취급할 때 무균 기법을 사용해야 합니다.
배양 배지 보충제
세포 배양 또는 조절에 필요한 특정 보충제는 불안정하거나 열에 불안정합니다. 따라서 사용하기 전에 사용자가 열 멸균된 기본 배양 배지에 첨가해야 합니다. 소에서 유래한 혈청(FBS)은 동물 세포 배지에 흔히 사용되는 보충제입니다. 호르몬, 성장 인자 및 특이적 신호전달 분자는 특정 세포 유형의 성장을 위해 필요합니다. IPTG와 같은 첨가제는 단백질 발현을 유도하기 위해 사용합니다. 박테리아 및 곰팡이 오염 물질의 성장을 제어하기 위해 배양 배지에 항생제를 첨가할 수도 있지만, 배지를 적절하게 취급하고 보관하면 오염을 잘 제어할 수 있습니다.
배양 배지 보관 및 사용
액상 형태, 부어진 아가 형태 또는 작업 용액의 상용 및 제조된 배양 배지는 일반적으로 4 °C의 어두운 곳에 보관하여 기회성 미생물의 성장을 억제하고 배양 배지 성분의 광유발 분해를 방지합니다. 배양물을 접종하기 이전에, 배지는 세포 성장을 위한 적절한 온도로 가온해야 합니다.
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