ตัวอย่างการทำให้บริสุทธิ์

เทคนิคการทำให้บริสุทธิ์ที่พบได้บ่อยที่สุดบางประการต่อไปนี้ถูกใช้ในห้องปฏิบัติการเพื่อเตรียมตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์ต่อไป

การฟอกเลือด

การฟอกเลือดเป็นเทคนิคการฟอกที่ใช้เพื่อกำจัดเกลือหรือโมเลกุลที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำอื่น ๆ ออกจากตัวอย่าง. นอกจากนี้ยังใช้เพื่อเปลี่ยนองค์ประกอบของบัฟเฟอร์ในตัวอย่าง. การฟอกเลือดเป็นเทคนิคแบบไม่ใช้พลังงานซึ่งต้องการปริมาณบัฟเฟอร์ที่มาก.

บัฟเฟอร์เอ็กซ์CHANGE & เดสอลต์ติ้ง

การกำจัดเกลือเป็นวิธีง่าย ๆ ในการกำจัดเกลือและสารปนเปื้อนที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำออกจากตัวอย่าง. วิธีนี้ยังใช้สำหรับการแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ก่อนหรือหลังขั้นตอนโครมาโตกราฟีต่าง ๆ และสำหรับการกำจัดสารรีเอเจนต์อย่างรวดเร็วเพื่อสิ้นสุดปฏิกิริยา.

ปริมาณน้ำฝนแบบเศษส่วน

การตกตะกอนแบบเศษส่วนใช้เพื่อกำจัดสิ่งเจือปนหยาบออกจากปริมาณตัวอย่างขนาดเล็ก เทคนิคการตกตะกอนจะแยกส่วนต่าง ๆ ตามหลักการของความละลายที่แตกต่างกัน การที่โปรตีนแต่ละชนิดมีความชอบน้ำไม่เท่ากัน ทำให้ความเข้มข้นของเกลือที่เพิ่มขึ้นสามารถเพิ่มปฏิสัมพันธ์แบบไม่ชอบน้ำระหว่างโปรตีนและทำให้เกิดการตกตะกอน

การสกัด

การเตรียมตัวอย่างโดยการสกัดเกี่ยวข้องกับการแยกสารเป้าหมายออกจากตัวอย่างที่ซับซ้อน หรือปริมาณตัวอย่างที่มากกว่ามาก กระบวนการนี้กำจัดส่วนประกอบของตัวอย่างที่รบกวนซึ่งอาจอุดตันคอลัมน์ HPLC และ GC นอกจากนี้ยังเพิ่มความเข้มข้นของสารวิเคราะห์ได้ถึง 100 ถึง 5,000 เท่า ซึ่งช่วยปรับปรุงความไวในการตรวจจับได้อย่างมีนัยสำคัญ ในฐานะที่เป็นส่วนหนึ่งของการเตรียมตัวอย่างที่เลือกสรรและเฉพาะเจาะจง การสกัดช่วยให้มั่นใจได้ถึงการวิเคราะห์โครมาโทกราฟีที่เชื่อถือได้มากขึ้น ประเภทของการสกัดได้แก่ การสกัดด้วยของเหลว-ของเหลว การสกัดด้วยเฟสของแข็ง (SPE) และการสกัดด้วยเฟสของแข็งแบบไมโคร (SPME)

โครมาโตกราฟีเชิงสัมพันธ์

โครมาโทกราฟีแบบความชอบแยกโปรตีนโดยอาศัยปฏิสัมพันธ์แบบย้อนกลับระหว่างโปรตีนกับลิแกนด์เฉพาะที่ถูกจับกับเมทริกซ์ของโครมาโทกราฟี เทคนิคนี้มีความจำเพาะสูงและสามารถทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ได้ในปริมาณมาก โครมาโทกราฟีแบบความชอบสามารถใช้ได้ทุกเมื่อที่มีลิแกนด์ที่เหมาะสมสำหรับโปรตีนที่ต้องการ

การทำให้บริสุทธิ์โดยโครมาโทกราฟีแบบเลือกจำเพาะเกี่ยวข้องกับขั้นตอนการจับและการชะล้าง ในระยะการจับ โปรตีนเป้าหมายจะถูกจับกับลิแกนด์ที่เข้ากันได้ซึ่งถูกตรึงไว้บนเมทริกซ์โครมาโทกราฟีอย่างจำเพาะและย้อนกลับได้ วัตถุประสงค์คือเพื่อแยก เพิ่มความเข้มข้น และทำให้ผลิตภัณฑ์เป้าหมายมีเสถียรภาพ โดยรักษาความแรงและกิจกรรมของมันไว้ หลังจากล้างเมทริกซ์เพื่อกำจัดวัสดุที่ไม่จับตัวแล้ว โปรตีนเป้าหมายที่จับอยู่จะถูกกู้คืนโดยการเปลี่ยนสภาวะให้เอื้อต่อการชะล้าง การชะล้างจะดำเนินการโดยเฉพาะเจาะจงโดยใช้ลิแกนด์ที่แข่งขัน หรือไม่เฉพาะเจาะจงโดยการเปลี่ยนค่า pH ความเข้มข้นของไอออน หรือขั้วไฟฟ้า การชะล้างช่วยให้สามารถเก็บรวบรวมโปรตีนเป้าหมายในรูปแบบที่บริสุทธิ์และมีความเข้มข้นสูง