การทดสอบปริมาณจุลินทรีย์

 หลักการพื้นฐานของการทดสอบปริมาณจุลินทรีย์

การทดสอบปริมาณจุลินทรีย์ หรือการทดสอบจุลินทรีย์ เป็นกระบวนการควบคุมคุณภาพที่ตรวจหาและวัดปริมาณการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ในผลิตภัณฑ์ ณ ขั้นตอนต่าง ๆ ของกระบวนการผลิต เช่น ตั้งแต่การผลิตขั้นต้นจนถึงการแจกจ่ายขั้นสุดท้าย การควบคุมคุณภาพที่มีประสิทธิภาพและผลการทดสอบที่แม่นยำเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อลดความเสี่ยงต่อผู้บริโภค และถือเป็นข้อกำหนดในสภาพแวดล้อมการผลิตที่อยู่ภายใต้การกำกับดูแล ดังนั้น การวิเคราะห์ปริมาณจุลินทรีย์จึงมักถูกรวมไว้ในการทดสอบประจำ เพื่อรับประกันความปลอดภัย คุณภาพ และการปฏิบัติตามข้อกำหนดทางกฎหมายของทุกล็อตผลิตภัณฑ์ที่ผลิตออกมา

การทดสอบปริมาณจุลินทรีย์ถูกดำเนินการสำหรับอุปกรณ์ทางการแพทย์ ยา อาหารและเครื่องดื่ม น้ำ บรรจุภัณฑ์ วัตถุดิบ เนื้อเยื่อมนุษย์ เนื้อเยื่อสัตว์ และเครื่องสำอาง เมื่อปฏิบัติตามวิธีการมาตรฐานตามที่อธิบายไว้ด้านล่างนี้ สิ่งสำคัญคือต้องมั่นใจว่าวิธีการทดสอบไม่ทำให้แบคทีเรียเข้าสู่ตัวอย่างทดสอบหรือฆ่าแบคทีเรียในตัวอย่างทดสอบ

• วิธีการกรองด้วยเมมเบรนสำหรับการทดสอบปริมาณจุลินทรีย์
• วิธีเพาะเชื้อโดยตรงสำหรับการทดสอบปริมาณจุลินทรีย์
• วิธี Most Probable Number (MPN) สำหรับการทดสอบปริมาณจุลินทรีย์

วิธีการกรองด้วยเมมเบรนสำหรับการทดสอบปริมาณจุลินทรีย์ 

การกรองด้วยเมมเบรนเป็นวิธีการที่นิยมใช้สำหรับผลิตภัณฑ์ที่มีสารต้านจุลชีพ ในวิธีการนี้ ตัวอย่างจะถูกส่งผ่านตัวกรองเมมเบรนที่มีขนาดรู 0.45 µm เมมเบรนทำหน้าที่เป็นชั้นกั้นและจับจุลินทรีย์ที่มีขนาดใหญ่กว่ารูของเมมเบรน ระหว่างการกรอง สามารถใช้สุญญากาศเพื่อเร่งกระบวนการได้ หลังจากนั้น เมมเบรนจะถูกย้ายไปยังสื่อเพาะเลี้ยงและวางไว้ในตู้บ่มเชื้อเป็นเวลาอย่างน้อย 5 วัน ที่อุณหภูมิ 30–35 °C สำหรับการตรวจหาแบคทีเรีย และที่อุณหภูมิ 20–25 °C สำหรับการตรวจหาเชื้อรา จากนั้นจะนับจำนวนเชื้อที่เพาะเลี้ยงได้เพื่อกำหนดระดับการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ในตัวอย่าง ควรดำเนินการตามมาตรการที่เหมาะสมเพื่อป้องกันการปนเปื้อนข้าม ซึ่งอาจนำไปสู่ผลการทดสอบที่เป็นบวกเทียม

วิธีเพาะเชื้อโดยตรงสำหรับการทดสอบปริมาณจุลินทรีย์

วิธีการเพาะเชื้อโดยตรงสำหรับการทดสอบปริมาณจุลินทรีย์ ได้แก่ วิธีเทลงจานเพาะเชื้อ (pour plate) และวิธีปาดลงจานเพาะเชื้อ (spread plate) วิธีเทลงจานเพาะเชื้อเป็นที่นิยมมากกว่าเนื่องจากมีความแม่นยำทางทฤษฎีสูงกว่า ในวิธีเทลงจานเพาะเชื้อ สารอาหารเพาะเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อจะถูกเทลงในจานเพาะเชื้อที่มีตัวอย่างทดสอบอยู่ และปล่อยให้แข็งตัว ในทางตรงกันข้าม ในวิธีปาดลงจานเพาะเชื้อ ตัวอย่างจะถูกปาดลงบนจานเพาะเชื้อที่มีสารอาหารเพาะเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อและแข็งตัวแล้ว ไม่ว่าใช้วิธีการใด หลังจากที่ตัวอย่างถูกเพิ่มเข้าสู่ระบบเพาะเลี้ยง จานเพาะเลี้ยงจะถูกนำไปบ่ม และนับจำนวนเชื้อที่เพาะเลี้ยงได้

วิธีจำนวนที่คาดการณ์ได้มากที่สุด (MPN) สำหรับการทดสอบปริมาณเชื้อจุลินทรีย์

วิธีจำนวนที่คาดการณ์ได้มากที่สุด (MPN) เป็นวิธีเชิงปริมาณที่ใช้เพื่อกำหนดความเข้มข้นของแบคทีเรียในตัวอย่างอย่างคร่าวๆ โดยแบ่งสารละลายต้นฉบับหรือตัวอย่างออกเป็นหลายส่วนตามลำดับขนาด (มักเป็น 10× หรือ 2×) ลงในน้ำเลี้ยงเชื้อ แล้วตรวจสอบการมีอยู่หรือไม่มีของจุลินทรีย์ ข้อเสียของวิธี MPN คือจำเป็นต้องทำการทดลองซ้ำหลายครั้งในระดับการเจือจางที่เหมาะสม เพื่อลดช่วงความเชื่อมั่น นอกจากนี้ วิธีนี้มีประสิทธิภาพเฉพาะในการตรวจสอบแบคทีเรียเท่านั้น และไม่ให้ผลลัพธ์ที่น่าเชื่อถือสำหรับการนับจำนวนเชื้อรา