Nhân bản & biểu hiện

Protein Expression Vectors

Plasmid, hay vector biểu hiện protein, là những đoạn DNA tròn chứa nhiều yếu tố chức năng để nhân bản và biểu hiện protein quan tâm. Việc lựa chọn vector biểu hiện thích hợp được xác định một phần bởi loại protein, sinh vật sẽ biểu hiện protein, và ứng dụng cụ thể và các câu hỏi khoa học mà nhà nghiên cứu hướng tới. Sự đa dạng của các vectơ biểu hiện có sẵn cho phép các nhà nghiên cứu chọn nhân bản, lựa chọn nhân bản và các yếu tố biểu hiện protein nào là tốt nhất cho nghiên cứu của họ. Một khi trình tự gen quan tâm và vector biểu hiện được chọn, các nhà nghiên cứu thường sử dụng nuclease để cắt chính xác vector tại các vị trí cụ thể để cho phép trình tự di truyền quan tâm được nhân bản trong khung và cuối cùng biểu hiện trong một sinh vật chủ. Quan trọng hơn, các nhà nghiên cứu thường sẽ sử dụng các tế bào có năng lực hóa học và sự biến đổi của vi khuẩn để lưu trữ các plasmid DNA tái tổ hợp vì chúng ổn định khi được lưu trữ đông lạnh ở -70 °C.

Cách Chuyển đổi Ô

Sự chuyển đổi tế bào đề cập đến quá trình đưa DNA hoặc RNA, hoặc protein vào các tế bào nhân chuẩn. Một loạt các công nghệ vật lý, hóa học và sinh học có sẵn cho các nhà nghiên cứu để thực hiện phần này của quy trình biểu hiện protein. Các phương pháp vật lý, chẳng hạn như điện hóa, hoặc các phương pháp hóa học, bao gồm canxi photphat (CAPI), polyethylenimine (PEI), và thuốc thử mỡ đều được sử dụng phổ biến bởi các nhà nghiên cứu. Các hệ thống truyền virus, bao gồm lentivirus, oncoretrovirus và adenovirus cũng có sẵn cho các nhà khoa học. Tuy nhiên, việc sử dụng các phương pháp phân phối virus thường đòi hỏi phải có thêm ngăn chặn và giám sát vì lý do an toàn sinh học.

Protein Expression Systems

Các sinh vật khác nhau được các nhà nghiên cứu sử dụng để biểu hiện protein quan tâm của chúng. Vi khuẩn thường được sử dụng bởi các nhà nghiên cứu vì chúng hấp thu các vectơ biểu hiện một cách hiệu quả, có thời gian nhân đôi nhanh chóng và có thể sản xuất một lượng lớn protein tái tổ hợp trong điều kiện tối ưu. Tuy nhiên, vì vi khuẩn là sinh vật nhân sơ, chúng không thể cung cấp các thay đổi sau dịch mã protein mà một số protein yêu cầu. Các tế bào nhân chuẩn, bao gồm cả men và các dòng tế bào động vật có vú, tạo điều kiện sửa đổi sau dịch mã protein và cũng thường được sử dụng bởi các nhà nghiên cứu. Việc lựa chọn dòng tế bào tốt nhất để biểu hiện protein tái tổ hợp và chiến lược biểu hiện protein phụ thuộc nhiều vào nhu cầu ứng dụng cụ thể và các câu hỏi mà nhà khoa học muốn giải quyết.