Các ứng dụng của phản ứng chuỗi polymerase (PCR)

PCR với men sao chép ngược (RT-PCR)

RT-PCR, hay PCR với men sao chép ngược, là một biến thể của kỹ thuật PCR tiêu chuẩn, cho phép khuếch đại mRNA cụ thể thu được từ các mẫu rất nhỏ. Kỹ thuật này loại bỏ nhu cầu thực hiện quy trình tinh chế mRNA tốn thời gian vốn cần thiết cho các kỹ thuật nhân bản truyền thống. Với RT-PCR, ngoài các chất phản ứng PCR tiêu chuẩn, người ta còn sử dụng men sao chép ngược và mẫu RNA. Hỗn hợp phản ứng được làm nóng đến 37 ˚C, cho phép men sao chép ngược tạo ra bản sao cDNA bổ sung từ mẫu RNA. Sau đó, cDNA này kết hợp với một trong các mồi dẫn đến quá trình tổng hợp sợi đầu tiên. Tiếp theo là quá trình PCR tiêu chuẩn, trong đó dsDNA cuối cùng được tạo ra. RT-PCR thường được kết hợp với PCR thời gian thực (qPCR), được sử dụng rộng rãi để định lượng mức độ phiên mã trong tế bào và mô.

PCR khởi động nóng

PCR khởi động nóng là công nghệ ức chế hoạt động của enzyme Taq polymerase khởi động nóng hoặc sự kết hợp của dNTP biến đổi trong quá trình thiết lập phản ứng cho đến khi bước kích hoạt nhiệt diễn ra. Có nhiều phương pháp khác nhau để ức chế hoạt động của enzyme polymerase khởi động nóng, bao gồm phương pháp biến đổi hóa học, phương pháp qua trung gian kháng thể và phương pháp qua trung gian aptamer. 

PCR điểm cuối để khuếch đại
mục tiêu dài và chính xác

PCR điểm cuối thường được sử dụng để phát hiện sự hiện diện của mục tiêu và độ phong phú tương đối khi phản ứng kết thúc. Hạn chế về độ dài trình tự được tạo ra trong PCR tiêu chuẩn (khoảng 5 kb) phần nào được khắc phục nhờ việc bổ sung các yếu tố cung cấp hoạt tính “kiểm tra lại”. PCR dài và chính xác (LA) kết hợp việc sử dụng một polymerase chịu nhiệt thứ hai với exonuclease 3′→5′ để sửa chữa các sai sót trong việc kết hợp nucleotide ở đầu cuối, dẫn đến độ chính xác tăng lên đáng kể và khả năng khuếch đại các mục tiêu DNA có độ dài lên đến 40 kb.