효소 활성 분석
그림 1.이는 기질의 형광 공여체와 소광 수용체가 효소 절단 과정을 거쳐 소광체를 제거하는 효소 활성 분석 과정을 나타낸 것으로, 형광 활성이 증가하며 효소 활동이 일어나고 있음을 표현하고 있습니다.
효소 활성 분석법은 유기체, 조직 또는 샘플에서 특정 효소의 존재 또는 수량을 식별하기 위해 연구자들이 주로 수행합니다. 이러한 효소의 예에는 α-아밀라아제, 카탈라아제, 락케이즈, 과산화효소, 라이소자임 및 리포터 효소 알칼리인산분해효소 그리고 루시페라아제를 포함합니다. 특정한 효소-기질 상호작용을 연구할 수 있도록 하는 다양한 시약과 방법론이 폭넓게 있습니다. 적절한 작업공정 솔루션의 선택은 연구자가 필요한 민감도에 따릅니다. 발색 솔루션은 검출에 유용하지만, 형광-기반 시약은 효소 활성의 정량화에 적절합니다.
주요 카테고리
기질 및 효소는 검출 시스템에서 도구이자 표적으로서 생명 공학 연구에서 중요합니다. 자사의 다양한 검출 기질 및 효소 포트폴리오를 통해 ELISA, 면역조직화학, 웨스턴 블로팅 등을 위한 효소 기반 단백질 검출 시스템을 발견해보십시오.
효소 활성을 위한 최적의 조건 결정
수많은 효소 분석법이 문헌에서 설명되었지만, 연구하려는 효소의 고유한 요건에 맞도록 이러한 절차를 변경할 필요가 있습니다. 효소의 특정한 활성은 pH, 온도, 이온 강도 및 분석의 모든 성분 농도를 포함한 여러 요인에 따릅니다. pH와 같은 조건의 경우, 효소 활성은 종 곡선과 빈번히 유사합니다. 특정 pH에서 최고 활성은 Vmax로 나타내며, 곡선의 한쪽 끝에서 활성 감소가 관찰됩니다. 일부 효소는 반응에 직접적으로 참여하지 않는 화합물을 위해, 금속 이온, 세제 및 소수성 분자와 같은 추가적인 고려사항이 필요합니다.
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효소 분석법 성분
여러 효소의 경우, 세포에서 발견되는 동일한 수분-기반 환경과 동일하게 용수가 표준 용매입니다. 하지만, 효소 또는 효소 성분이 수분에서 불용성인 일부 사례에서 유기 용매가 사용됩니다. 추가로, 효소 반응을 위한 기질 및 보조인자, 촉매 또한 효소 반응 분석법에서 중요한 성분입니다. 기질 및 보조인자는 생리학적 조건에서 그 기능을 근거로 빈번히 식별됩니다. 이러한 기질 및 보조인자는 폭넓게 상호작용하며 다양한 범위의 효소에서 필요할 수 있습니다. 완충액 및 이온은 분석에서 pH를 안정화하기 위해 필수적이며 효소 활성에 직접적으로 영향을 끼치므로 고려해야 할 추가적인 주요 요소입니다. 예를 들면, 일가 또는 이가 금속 이온은 반응에서 보조인자의 촉매 활성을 위해 필요할 수 있으며 효소 활성을 위해서 필수적입니다.
효소 분석 수행
효소 분석 성분의 준비는 실질적인 첫 번째 단계입니다. 한 개의 활성화 성분을 제외하고, 대량의 분석 혼합물을 제조하는 것이 소량을 피펫할 때 내재하는 피펫 오류를 피하기 위해 일반적으로 유리합니다. 분석 혼합물을 준비한 후, 연구자는 최종 활성화 성분을 혼합물에 추가하여 활성 분석을 개시합니다. 냉장 온도에서 효소 저장 그리고 여러 화학적 또는 단백질 추가제를 빈번히 포함하는 효소 전처리는 분석 개시 이전에 효소 안정성 및 최대 활성을 보장하기 위한 중요한 요소입니다. 반응 물질을 관찰 용기에 추가하면, 해당 반응이 시작되므로 모든 성분을 신속히 그리고 완전히 혼합해야 합니다. 혼합 후 데이터 기록을 즉시 시작해야 하며 해당 분석의 검출 신호를 반응의 완전한 시간 경과에 대해 도표를 만듭니다.
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