การกำหนด Hydrocortisone จากครีมเฉพาะที่โดยใช้ Discovery DSC-Si SPE และ HPLC-UV แบบย้อนกลับ
Hydrocortisone (รูปA) เป็นฮอร์โมนสเตียรอยด์ที่หลั่งออกมาจากต่อมหมวกไตและสังเคราะห์เพื่อใช้เป็นยา มันเป็นสารประกอบเชิงขั้วปานกลางที่มีโครงสร้าง glucocorticoid (นิวเคลียสเตียรอยด์) และใช้ในการรักษาความหลากหลายของเงื่อนไขการอักเสบและไม่อักเสบ สูตรในครีมเฉพาะทางเกรดยามักใช้เพื่อลดอาการคัน/อาการปวดที่เกิดจากผื่น
ในการศึกษานี้เราแสดงให้เห็นถึงประโยชน์ของ Discovery SPE โดยการพัฒนาการทดสอบ SPE แบบปกติที่เรียบง่ายและเลือกได้ซึ่งแยก Hydrocortisone ออกจากครีมเฉพาะที่ได้อย่างมีประสิทธิภาพสำหรับการวัด/วิเคราะห์ HPLC-UV ย้อนกลับในขั้นตอนถัดไป Chromatography (TLC) แบบ Thin-Layer ถูกใช้ในขั้นต้นเพื่อกำหนดสภาพการโหลดที่เหมาะสมและการกู้คืนจากสภาวะของวิธีการ SPE ขั้นสุดท้ายจะให้ค่าการกู้คืนและค่า RSD 99.86 ± 6.99%
รูป A.โครงสร้างของ Hydrocortisone
ปัญหาที่เกี่ยวข้องกับการเตรียมตัวอย่างไม่ดี/ไม่มี
โปรโตคอล HPLC แบบย้อนกลับส่วนใหญ่จะเรียกน้ำ: ส่วนผสมของเฟสมือถืออินทรีย์เพื่ออำนวยความสะดวกในการแยกภายในคอลัมน์ LC แม้ว่าแบรนด์ระดับชาติ Hydrocortisone ครีมตัวอย่าง (Hydrocortisone 1% ครีมความแข็งแรงสูงสุด) ทดสอบภายในรายงานนี้ถูกละลายในเมทานอลเมื่อตัวอย่าง methanolic ได้สัมผัสกับบัฟเฟอร์/น้ำฝนเกิดขึ้น (รูปB) นี่เป็นหลักเนื่องจากการละลายของส่วนผสมที่ไม่ใช้งาน lipophilic ภายในครีมเฉพาะ ส่วนประกอบดังกล่าวรวมถึงว่านหางจระเข้ barbadensis, cetearyl alcohol, กลีเซอรีน, stearate กลีเซอรีนและความหลากหลายของน้ำมัน
ผลที่ได้คือการสกัด/เจือจางตัวทำละลายอย่างง่ายเป็นการเตรียมตัวอย่างที่ไม่เพียงพอสำหรับการใช้งานนี้ ส่วนประกอบของ lipophilic ภายในครีมสามารถตกตะกอนได้อย่างง่ายดาย (เมื่อสัมผัสกับเฟสมือถือในน้ำ) ทำให้เกิดแรงดันย้อนกลับเพิ่มขึ้นและการอุดตันของระบบ
รูป Bการตกตะกอนของส่วนประกอบ lipophilic ของครีม Hydrocortisone เมื่อสัมผัสกับ DI H2O: เมทานอล (1: 1) (ขวดแก้วด้านซ้าย - ว่างเปล่าขวดแก้วด้านขวา - ตัวอย่างตกตะกอน)
การเพิ่มประสิทธิภาพการโหลดโดยใช้ TLC
แผ่นซิลิกา 60 TLC สองแผ่นแยกจากกัน (0.5 x 2.5 ซม.) มีทั้งตัวอย่างครีม methanolic hydrocortisone ขนาด 1 มก./มล. และมาตรฐาน hydrocortisone แต่ละแผ่นถูกแยกด้วยเอทิลอะซิเตตหรือเอทิลอะซิเตต: เฮกเซน (1: 1) การย้ายจุดเกิดขึ้นสำหรับทั้งมาตรฐานและตัวอย่างบนแผ่นเอทิลอะซิเตท TLC ในขณะที่ไม่มีการย้ายจุดเกิดขึ้นบนแผ่นเอทิลอะซิเตต: เฮกเซน TLC
จากผลลัพธ์ข้างต้นครีม hydrocortisone ถูกละลายในเอทิลอะซิเตต: เฮกเซน (1: 2) ก่อนที่จะโหลดตัวอย่างในตลับ Discovery DSC-Si (ซิลิกา) SPE, 500 มก./3 มล. (52654 ยู) ส่วนประกอบเอทิลอะซิเตทของส่วนผสมเป็นสิ่งจำเป็นในการละลายครีมเฉพาะที่ เฮกเซนจำเป็นต้องกระตุ้นให้เกิดการมีปฏิสัมพันธ์เชิงขั้วซึ่งจำเป็นต่อการรักษา hydrocortisone บนตัวดูดซับซิลิกาเอสพีอีอย่างเพียงพอ
ทำความสะอาดตัวอย่างการกู้คืนและการทำซ้ำที่ยอดเยี่ยม
ใช้วิธีการ SPE ที่มีรายละเอียดใน ตารางที่ 1 ตัวอย่าง aliquot 1 3 กรัมของครีมไฮโดรคอร์ติโซนระดับชาติ (Hydrocortisone 20% Cream, ความแข็งแรงสูงสุด) ถูกสกัดและวิเคราะห์โดยใช้ตลับ Discovery DSC-Si SPE (500mg/500 มล.) และคอลัมน์ Discovery HS C18 HPLC, 5 ซม. x 1 มม., 5µm อันเป็นผลมาจากขั้นตอน SPE การรบกวนของ lipophilic ที่มีอยู่ในครีมเฉพาะที่ถูกลบออกจากตัวอย่างก่อนการวิเคราะห์ HPLC-UV ซึ่งจะช่วยลดความเสี่ยงจากการตกตะกอนตัวอย่างลงอย่างมากเมื่อสัมผัสกับระยะเคลื่อนที่ ซึ่งได้รับการสนับสนุนเพิ่มเติมจากโครมาโตแกรมที่สะอาดซึ่งสังเกตได้ในระหว่างการวิเคราะห์ (รูปC)
รูป C.ตัวอย่าง Chromatogram ของสารสกัด Hydrocortisone โดยใช้ Discovery DSC-SPE
มาตรฐานภายนอกถูกนำมาใช้ในการวัดการฟื้นตัวกับเปอร์เซ็นต์น้ำหนักของไฮโดรคอร์ติโซนที่รู้จักกันอธิบายไว้บนฉลากของผู้ผลิตครีมไฮโดรคอร์ติโซน การใช้วิธี SPE และ HPLC ที่อธิบายไว้ในรายงานนี้พบว่ามีการฟื้นตัวสัมบูรณ์เฉลี่ยและค่า RSD 99.86 ± 6.99% (n= 6) เพื่อหาค่าเฉลี่ยของ hydrocortisone ร้อยละ 1.02 ในครีมเฉพาะที่ (ตารางที่ 2)
สรุป
บ่อยครั้งที่นักวิจัยถูกขอให้แยกและวัดความหลากหลายของสารประกอบจากเมทริกซ์ตัวอย่างที่ยาก ขั้นตอน SPE ที่อธิบายไว้ในรายงานนี้มีวิธีการที่ยอดเยี่ยมในการแยกการวิเคราะห์ความสนใจออกจากการสอดแทรกตัวอย่างหลักก่อนการวิเคราะห์ ดังนั้นทั้งวิธีการ Discovery SPE และ HPLC ที่อธิบายไว้ในรายงานนี้จึงให้ความแม่นยำและความแม่นยำที่ยอดเยี่ยมในการกำหนดระดับไฮโดรคอร์ติโซนในครีมไฮโดรคอร์ติโซน 1 เปอร์เซ็นต์