웨스턴 블로팅
웨스턴 블로팅은 단백질을 검출, 분석, 정량화를 위해 잘 확립된 분석 기법입니다. 이 방법은 조직 균질물 및 세포 용해물과 같은 복잡한 샘플에서 특정 단백질 분자를 검출하도록 널리 사용됩니다. 웨스턴 블로팅은 일반적으로 겔 전기영동으로 단백질을 분리한 다음, 폴리비닐리덴 디플루오라이드(PVDF) 또는 니트로셀룰로스 막으로 전달합니다. 단백질이 전달된 후, 시각화를 위해 염색될 수 있고 N 말단 염기서열 분석, 질량 분석 또는 면역검사에 의해 직접적으로 식별될 수 있습니다.
웨스턴 블로팅 면역검사에서 단백질은 특정 항체 결합을 통해 식별됩니다. 일반적으로 1차 항체는 적절한 기질을 이용한 화학 발광 또는 발색 검출을 위해 HRP 또는 AP 결합 2차 항체와 함께 사용됩니다. 또는 형광이 표지된 1차 항체 또는 2차 항체를 직접 시각화에 사용할 수 있습니다.
관련 기술 문서
- 항체 기초 원리에 대한 기술 지원에는 기본 구조, 클래스 및 정상 면역글로불린 항체의 범위가 포함됩니다.
- 머크는 특정 응용분야의 요구 사항을 만족하는 항체 및 기타 단백질 결합에 최적화된 광범위한 알칼리성 포스파타아제 효소 및 기질을 제공합니다.
- Loading controls in western blotting application.
- Gelatin is a heterogeneous mixture of water-soluble proteins extracted by boiling skin, tendons, ligaments, bones, etc. in the water.
- The possible causes and potential remedies for poor or inconsistent transfer of proteins from a gel to the Western blot membrane. Optimal transfer conditions may vary depending on the molecular weight of the protein of interest.
- 모두 보기 (34)
관련 프로토콜
- 세포 용해용 시료 조제를 위한 프로토콜과 배양된 조직 및 세포에서 후속 웨스턴 블로팅을 위한 효율적인 단백질 추출.
- 다양한 블롯 절차를 위한 워크플로 단계를 가진 웨스턴 블롯 프로토콜은 단백질이 SDS 폴리아크릴아미드 겔에서 니트로셀룰로오스 시트로 전기영동을 통해 전달되는 과정을 설명합니다. 이는 또한 면역 블로팅 프로토콜로도 알려져 있습니다.
- 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate (BCIP)/nitro blue tetrazolium (NBT) is an ideal insoluble substrate for use with alkaline phosphatase. This system produces a blue-purple product. The intense color can be observed visually, is very stable, and will not fade upon exposure to light.
- This page describes chemiluminescence detection of GST-tagged proteins with Amersham ECL, Amersham ECL Prime, and Amersham ECL Select from Cytiva.
- The SNAP i.d. 2.0 Protein Detection System is the second generation of the SNAP i.d. method for detecting immunoreactive proteins on Western blots.
- 모두 보기 (17)
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웨스턴 블로팅은 생화학에서 특정 단백질을 검출하고, 번역 후 변형 정도를 결정하며, 클로닝 애플리케이션에서 단백질 발현을 검증하고, 단백질과 생체표지자 발현 수준을 분석하며, 항체 에피토프 맵 및 임상 환경에서 질병 표지자를 검사하기 위해 광범위하게 사용됩니다.
제한된 샘플에서 더 많은 단백질을 동시에 분석해야 할 필요성은 블로팅 기술의 민감도와 속도를 향상하기 위한 지속적 연구를 주도해왔습니다. 이중 블로팅은 비특정적 상호 작용으로 인해 발생하는 위양성을 제거합니다. 파웨스턴 블로팅으로 특정 단백질-단백질 상호작용을 검출을 할 수 있습니다. 사우스웨스턴 블로팅은 특정 DNA 서열과 상호작용하는 단백질을 식별하도록 사용됩니다. 멀티스트립 블로팅은 처리량을 증가시키고 블로팅 간 변동성을 최소화합니다. 신호 생성에 필요한 단백질의 양을 줄이고 웨스턴 블로팅의 정량적 역량을 향상시키기 위한 신기술이 개발되고 있습니다.
Workflow
Gel Electrophoresis
단백질 젤 전기 영동은 블로팅 전에 단백질을 분리하고 분해하도록 사용됩니다. 전처리된 단백질 혼합물은 분자량과 전하량에 따라 단백질을 분류하기 위해 폴리아크릴라미드 겔에서 이동합니다.
막으로 전달
전기영동법에 의해 겔 상에서 분리된 단백질은 PVDF 또는 니트로셀룰로오스 막에 전달되어 고정됩니다. 전류를 사용하여 겔에서 막으로 단백질을 전달합니다(전기블로팅).
Detection
표적 단백질은 HRP 또는 AP 결합 2차 항체 및 적절한 화학 발광 또는 발색 기질과 결합하거나 형광이 표지된 1차 항체 또는 2차 항체를 사용하여 검출됩니다.
하이라이트
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