qPCR

เทคนิค PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ (qPCR) ใช้โมเลกุลตัวรายงานเรืองแสงเพื่อวัดปริมาณผลิตภัณฑ์ที่ถูกขยายตัว เช่นเดียวกับ PCR แบบดั้งเดิม ที่ใช้แม่แบบ DNA, cDNA หรือ RNA ในการขยายตัว แต่ในทุกวงจร จะมีการติดตามสัญญาณเรืองแสงเพื่อวัดปริมาณแบบสัมพัทธ์หรือแบบสัมบูรณ์

เทคนิคนี้มีประโยชน์ในหลายด้านของการวิจัย รวมถึงการวิเคราะห์การแสดงออกของยีน การกำหนดแบบพันธุกรรม การวิเคราะห์ไมโครอาร์เอ็นเอ การวิเคราะห์ความแปรผันทางพันธุกรรม และการวิเคราะห์โปรตีน

หมวดหมู่ที่แนะนำ

มือที่สวมถุงมือกำลังถือหลอดทดลองที่มีสารสีเขียวอยู่เหนือชั้นวางหลอดทดลองอื่นๆ ในห้องปฏิบัติการ

สารเคมีและชุดอุปกรณ์ PCR

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) เป็นเทคนิคหลักในห้องปฏิบัติการชีววิทยาโมเลกุล PCR ใช้เพื่อเพิ่มปริมาณ DNA ขึ้นหลายระดับ และสารเคมีและทรัพยากรของเราเหมาะสำหรับกระบวนการวิจัยต่าง ๆ มากมาย รวมถึงการวิเคราะห์การแสดงออกของยีน การกำหนดแบบพันธุกรรม การหาลำดับดีเอ็นเอ และความต้องการในการสร้างการกลายพันธุ์

ซื้อเลย

การโคลนนิ่งระดับโมเลกุลและการแสดงออกของโปรตีน

วิธีการและขั้นตอนการโคลนนิ่งระดับโมเลกุลและการแสดงออกของโปรตีน เพื่อการโคลนนิ่งที่เชื่อถือได้และการแสดงออกของโปรตีนที่มีประสิทธิภาพสูง จากเวกเตอร์การแสดงออกของโปรตีนของแมลง แบคทีเรีย และสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม

ซื้อเลย

เอพิเจเนติกส์

สารและทรัพยากรด้านเอพิเจเนติกส์ สำหรับการศึกษาชนิดของ RNA การเมทิลเลชันของ DNA การเปลี่ยนแปลงของโครมาติน และการเปลี่ยนแปลงของฮิสโตน

ซื้อเลย

ไมโครไบโอม

การวิเคราะห์ไมโครไบโอมในลำไส้อย่างครบถ้วน: ค้นพบโซลูชันแบบองค์รวมที่ครอบคลุมการเตรียมตัวอย่าง การหาลำดับพันธุกรรม การวิเคราะห์ข้อมูลชีวภาพ และสถิติ ตั้งแต่ 16S ไปจนถึง WGS

ซื้อเลย

วิธีวิเคราะห์ข้อมูล qPCR

ความเรืองแสงของโมเลกุลรีพอร์ตเตอร์จะถูกวัดและกำหนดปริมาณ; โดยทั่วไปโมเลกุลเหล่านี้คือสารสี (เช่น SYBR® Green, Ethidium Bromide) ที่แทรกตัวระหว่างเบสใน DNA สายคู่ หรือโพรบที่ออกแบบมาเพื่อจับกับลำดับเบสเฉพาะ (เช่น Molecular Beacons, TaqMan®probes) บน DNA

การวัดปริมาณแบบสัมพัทธ์ของข้อมูล qPCR

มีวิธีการวัดปริมาณข้อมูล qPCR สองวิธีหลัก การวัดปริมาณแบบสัมพัทธ์ ซึ่งเป็นวิธีที่นิยมใช้มากกว่า ใช้ข้อมูล ΔΔCt เพื่อกำหนดอัตราส่วนการแสดงออกหรือความอุดมสมบูรณ์ของยีนเป้าหมายในตัวอย่าง เมื่อเทียบกับยีนควบคุม และปรับให้เป็นมาตรฐานด้วยอัตราส่วนการแสดงออกของยีนอ้างอิง เนื่องจากค่าประสิทธิภาพ E ของยีนเป้าหมายและยีนอ้างอิงมีความแตกต่างกัน วิธีนี้จึงคำนึงถึงความแตกต่างของค่า E ด้วย วิธีนี้มักถูกใช้บ่อยขึ้นในการวิเคราะห์การแสดงออกของยีน

การวัดปริมาณแบบสัมบูรณ์ของข้อมูล qPCR

วิธีที่สอง คือ การวัดปริมาณแบบสัมบูรณ์ ซึ่งนิยมใช้ในสาขาจุลชีววิทยาสิ่งแวดล้อม และใช้เส้นโค้งมาตรฐาน (SC) วิธี SC ใช้ชุดการเจือจางที่มีความเข้มข้นของเทมเพลตที่ทราบค่า N0 เพื่อสร้างเส้นโค้งมาตรฐานโดยใช้การถดถอยเชิงเส้นของ log(N0) เทียบกับ CT (threshold cycle) ซึ่งนำไปใช้ในการคำนวณความเข้มข้นของเทมเพลตในตัวอย่าง พื้นฐานของวิธีนี้คือค่าประสิทธิภาพของตัวอย่างเท่ากับค่าประสิทธิภาพของมาตรฐาน

ดูสินค้า qPCR ทั้งหมด