Nečistoty v procesech a výrobcích
V procesu výroby monoklonálních protilátek (mAb) se vyskytuje řada nečistot nebo vznikají během tohoto procesu, včetně kontaminantů pocházejících z procesu či samotného produktu, které mohou narušit vývojový program vaší bioterapie. Naštěstí máme dlouholeté zkušenosti s prováděním testů jak v prostředí výzkumu a vývoje, tak v prostředí GMP, a dokážeme tak splnit požadavky na data v každé fázi vývojového cyklu. Díky nejmodernějšímu vybavení a krátkým dodacím lhůtám poskytujeme spolehlivé výsledky, které posunou váš projekt vpřed.
Hodnocení nečistot vznikajících v průběhu výroby
Abychom uspokojili potřeby testování následujících procesních nečistot, nabízíme řady testů pokrývající procesní kontaminanty, proteiny a DNA hostitelských buněk a procesní přísady.
Kontaminanty hostitelských buněk: Během výroby monoklonálních protilátek (mAb) mohou procesní nečistoty pocházet z hostitelské buňky použité k expresi vašeho léčiva. Nečistoty v podobě proteinů hostitelských buněk (HCP), které se v bioterapiích vyskytují v řádu ppm, představují významné riziko imunogenity, protože mohou u pacientů vyvolat nepředvídatelnou imunitní reakci. Jejich komplexní a rozmanitá povaha ztěžuje jejich detekci a monitorování. Vzhledem k tomu, že akceptační kritéria pro reziduální DNA hostitelských buněk jsou obvykle stanovena na velmi nízké úrovni (často ≤1,0 pg DNA na mg léčivé látky), jsou rozhodující účinné techniky odstraňování a citlivé detekční metody.
Výrobní přísady: Během vývoje a výroby monoklonálních protilátek (mAb) je nutné monitorovat širokou škálu výrobních přísad. Patří mezi ně detergenty, protein A, transfekční činidla, antibiotika, protipěnivá činidla a růstové faktory.
Mikrobiální kultura: Mnoho monoklonálních protilátek se vyrábí v mikrobiálních organismech, aby se využilo jejich rychlého růstu a vysokých výtěžků, proto je důležité sledovat a kontrolovat přítomnost mikrobiálních kontaminantů. Složka buněčné stěny gramnegativních bakterií, nazývaná endotoxin, vyvolává reakce sahající od horečky a zimnice až po smrtelný septický šok. Jeho odstranění z monoklonální protilátky je nejen zásadní, ale také regulačním požadavkem. Testování mikrobiální zátěže by mělo být prováděno v průběhu celého výrobního procesu monoklonálních protilátek a pro posouzení integrity výroby monoklonálních protilátek je rovněž důležité testování sterility.
Hodnocení nečistot v produktu
Abychom uspokojili potřeby testování následujících nečistot v produktu, jsou naše skupiny testů na kontaminanty strukturovány podle velikostních variant, variant náboje nebo mikrobiologie (živé či neživé).
Rozložení náboje: Varianty náboje, které vznikají v důsledku posttranslačních modifikací (PTM) během výrobního procesu nebo v důsledku chemických modifikací v průběhu čištění a skladování, mohou mít značný vliv na biologickou aktivitu a farmakokinetiku monoklonální protilátky. Analýza variant náboje je regulačním požadavkem pro monoklonální protilátky a využívá techniky, mezi které patří kationtová výměnná chromatografie (CEX) a kapilární izoelektrická fokusace (cIEF).
Rozložení velikosti: Výchozí výrobní materiál často obsahuje varianty velikosti, jako jsou agregáty, fragmenty a biomolekuly s přebytečnými lehkými řetězci. Jelikož tyto varianty mohou ovlivnit imunogenitu a účinnost, je důležité sledovat jejich přítomnost. Velikostně exkluzivní chromatografie (SEC) je nejčastěji používanou metodou pro hodnocení velikostního rozložení, přičemž vysoce informativní jsou také techniky, jako je dynamický rozptyl světla (DLS) a kapilární elektroforéza v gelu s dodecylsulfátem sodným (CE-SDS).
Analýza molekulové hmotnosti: Molekulová hmotnost je hlavním ukazatelem identity monoklonálních protilátek, na niž má vliv povaha lehkých a těžkých řetězců i posttranslační modifikace (PTM). Molekulová hmotnost monoklonálních protilátek se obvykle hodnotí pomocí analýzy neporušené hmotnosti (IM), lze ji však také zkoumat deglykosylací těžkých řetězců, čímž se odstraní jeden z hlavních zdrojů heterogenity bílkovin.
Mapování sekvencí: Široce používanou technikou mapování sekvencí pro určení identity mAb je mapování peptidů, které sahá od generování peptidových map pomocí jediného enzymu až po složitější analýzy, jako jsou metody datově závislého sběru (DDA) nebo kolizně aktivované disociace (CAD). Tyto informace lze doplnit pomocí sekvenování N- nebo C-konce či spektrometrie iontové mobility.
Analýza modifikací: Porozumění a kontrola jakýchkoli modifikací, ke kterým dochází během výrobního procesu, pomáhá zajistit konzistentní produkt mAb. Například mapování N-glykanů může poskytnout informace o stabilitě, bioaktivitě a imunogenitě mAb, zatímco kvantifikace kyseliny sialové je klíčová pro prevenci nadměrné sialylace. Je také vhodné provádět mapování disulfidových vazeb, protože je známo, že redukce disulfidových vazeb vyvolaná výrobním procesem vede k nízkým výtěžkům při sběru mAb.
Testování fyzikálních vlastností: Během výroby je nutné testovat mnoho různých fyzikálních vlastností monoklonálních protilátek. Patří mezi ně pH, koncentrace a osmolalita, což jsou vlastnosti nezbytné pro výrobu konzistentního léčivého přípravku.
Chcete-li s námi prodiskutovat vaše požadavky na testování nečistot a učinit další krok k zajištění budoucnosti vaší bioterapie, vyplňte prosím níže uvedený formulář.
