Impurità nei processi e nei prodotti
Nel processo di produzione degli anticorpi monoclonali (mAb) sono presenti o vengono generate numerose impurità, tra cui contaminanti di processo o di prodotto che possono compromettere il programma di sviluppo della vostra bioterapia. Fortunatamente, vantiamo anni di esperienza nell’esecuzione di analisi sia in ambienti di ricerca e sviluppo (R&S) che in conformità alle norme GMP, soddisfacendo i requisiti di dati in ogni fase del ciclo di sviluppo. Grazie a strumentazioni all’avanguardia e tempi di risposta rapidi, forniamo risultati affidabili per far progredire il vostro progetto.
Valutazione delle impurità di processo
Per soddisfare le esigenze di analisi relative alle seguenti impurità di processo, offriamo famiglie di test che coprono i contaminanti di processo, le proteine e il DNA delle cellule ospiti e gli additivi di processo.
Contaminanti delle cellule ospiti: durante la produzione di mAb, le impurità di processo possono derivare dalla cellula ospite utilizzata per l’espressione del farmaco. Le impurità costituite da proteine delle cellule ospiti (HCP), presenti a livelli di ppm nelle bioterapie, rappresentano un grave rischio di immunogenicità poiché possono provocare una risposta immunitaria imprevedibile nei pazienti. La loro natura complessa e diversificata rende difficile la loro individuazione o il loro monitoraggio. Poiché i criteri di accettazione per il DNA residuo delle cellule ospiti sono solitamente fissati a un livello molto basso (spesso ≤1,0 pg di DNA per mg di principio attivo), è fondamentale disporre di tecniche di rimozione efficaci e di metodi di rilevamento sensibili.
Additivi di produzione: durante lo sviluppo e la produzione degli mAb è necessario monitorare un’ampia varietà di additivi di produzione. Tra questi figurano detergenti, proteina A, reagenti di trasfezione, antibiotici, agenti antischiuma e fattori di crescita.
Batterio-carica: molti mAb vengono prodotti in organismi microbici per sfruttare i rapidi tassi di crescita e le elevate rese, rendendo importante il monitoraggio e il controllo della presenza di contaminanti microbici. Un componente della parete cellulare dei batteri Gram-negativi, chiamato endotossina, provoca reazioni che vanno dalla febbre e dai brividi allo shock settico fatale. La sua rimozione dall’anticorpo monoclonale non solo è fondamentale, ma costituisce anche un requisito normativo. I test di carico microbico dovrebbero essere impiegati durante l’intero processo di produzione degli anticorpi monoclonali, e anche i test di sterilità sono importanti per verificare l’integrità della produzione.
Valutazione delle impurità del prodotto
Per soddisfare le esigenze di analisi relative alle seguenti impurità del prodotto, le nostre famiglie di test per i contaminanti sono strutturate in base alle varianti dimensionali, alle varianti di carica o alla microbiologia (organismi vitali o non vitali).
Distribuzione di carica: derivanti da modificazioni post-traduzionali (PTM) durante il processo di produzione, oppure da modificazioni chimiche durante la purificazione e la conservazione, le varianti di carica possono avere un impatto considerevole sull’attività biologica e sulla farmacocinetica di un mAb. L’analisi delle varianti di carica è un requisito normativo per i mAb e si avvale di tecniche che includono la cromatografia a scambio cationico (CEX) e la focalizzazione isoelettrica capillare (cIEF).
Distribuzione dimensionale: il materiale di produzione iniziale contiene spesso varianti dimensionali quali aggregati, frammenti e biomolecole che presentano catene leggere aggiuntive. Poiché queste possono influire sull’immunogenicità e sulla potenza, è importante monitorarne la presenza. La cromatografia a esclusione dimensionale (SEC) è il metodo più comunemente utilizzato per valutare la distribuzione dimensionale, mentre tecniche quali la diffusione dinamica della luce (DLS) e l’elettroforesi capillare su gel di sodio dodecil solfato (CE-SDS) sono anch’esse altamente informative.
Analisi del peso molecolare: il peso molecolare è un indicatore fondamentale dell’identità dell’anticorpo monoclonale (mAb), influenzato dalla natura delle catene leggere e pesanti nonché dalle modificazioni post-traduzionali (PTM). Tipicamente valutato tramite analisi della massa intatta (IM), il peso molecolare del mAb può essere studiato anche mediante deglicosilazione delle catene pesanti per rimuovere una delle principali fonti di eterogeneità proteica.
Mappatura delle sequenze: tecnica di mappatura delle sequenze ampiamente utilizzata per determinare l’identità degli mAb, la mappatura dei peptidi spazia dalla generazione di mappe peptidiche con un singolo enzima ad analisi più complesse, quali l’acquisizione dipendente dai dati (DDA) o i metodi di dissociazione attivata da collisione (CAD). Queste informazioni possono essere arricchite ricorrendo al sequenziamento dell’estremità N- o C-terminale, oppure alla spettrometria di mobilità ionica.
Analisi delle modificazioni: comprendere e controllare le eventuali modificazioni che si verificano durante il processo di produzione contribuisce a ottenere un prodotto mAb coerente. Ad esempio, la mappatura degli N-glicani può fornire informazioni sulla stabilità, la bioattività e l’immunogenicità del mAb, mentre la quantificazione dell’acido sialico è fondamentale per prevenire un’eccessiva sialilazione. È inoltre opportuno eseguire la mappatura dei ponti disolfuro, poiché è noto che la riduzione dei ponti disolfuro indotta dal processo di produzione comporta rese scarse durante la raccolta del mAb.
Test delle caratteristiche fisiche: durante la produzione è necessario testare molte proprietà fisiche diverse di un mAb. Tra queste figurano il pH, la concentrazione e l’osmolalità, tutte caratteristiche essenziali per la produzione di un prodotto farmaceutico omogeneo.
Per discutere delle vostre esigenze in materia di analisi delle impurità e compiere il passo successivo per garantire il futuro della vostra bioterapia, compilate il modulo sottostante.
