PCR Master Mix

หลอดปฏิกิริยา PCR

Read more about

• PCR หรือ RT-PCR Master Mix คืออะไร
• การใช้งานมิกซ์หลัก
• องค์ประกอบผสมหลัก
  
• ประเภทของ Master Mixes
• สูตรผสมหลัก PCR ทั่วไป
• ส่วนผสมหลัก PCR มาตรฐาน
  
• PCR Master Mixes ความเที่ยงตรงสูง
• RT-PCR การผสมหลัก
• การผสมหลักของ QPCR
• ผลิตภัณฑ์ PCR Master Mix ที่แนะนำ

PCR หรือ RT-PCR Master Mix คืออะไร

ส่วนผสมหลัก PCR ซึ่งบางครั้งเรียกว่าซุปเปอร์มิกซ์หรือมิกซ์พร้อมใช้งานเป็นส่วนผสมแบบกลุ่มของตัวทำปฏิกิริยา PCR ที่ความเข้มข้นสูงสุดที่สามารถเตรียมและแบ่งออกเป็นหลอด PCR หรือแผ่น PCR 96 หลุม ส่วนผสมหลักมักจะรวมถึง DNA polymerase, dNTPs, MgCl 2 และบัฟเฟอร์ การใช้ส่วนผสมหลักช่วยลดการวางท่อและความเสี่ยงของการปนเปื้อนสะดวกประหยัดเวลาและขจัดข้อผิดพลาดที่อาจเกิดขึ้นในการผสมทำให้เหมาะสำหรับการใช้งานที่มีปริมาณงานสูง 

ส่วนผสมหลักช่วยให้นักวิจัยสามารถตั้งค่าการควบคุมและทดสอบความเข้มข้นที่แตกต่างกันของแม่แบบ DNA หรือ RNA เป้าหมายของพวกเขาโดยไม่ต้องเพิ่มจำนวนที่แม่นยำของเอนไซม์บัฟเฟอร์โคแฟกเตอร์ (โดยปกติ MgCl₂) น้ำและ dNTP ในแต่ละหลอดปฏิกิริยาหรือแผ่นดี แต่จะมีการเตรียมส่วนผสมหลักขนาดใหญ่ที่มีตัวทำปฏิกิริยา PCR ทั้งหมดหรือส่วนใหญ่หนึ่งครั้ง ปริมาณที่เหมาะสมของส่วนผสมหลักสามารถ pipetted ลงในหลอดหรือแผ่นหลุมและรวมกับส่วนประกอบใดๆที่แตกต่างกันในหมู่ปฏิกิริยาเช่นแม่แบบดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอหรือไพรเมอร์

ปฏิกิริยา PCR ขนาดใหญ่อาจมีปฏิกิริยา 2,000 μL ถึง 25 μL ต่อ 50 บุคคลหรือมากกว่า แม้สำหรับชุดของ 20 ปฏิกิริยา, นักวิจัยสามารถประหยัดเวลา, ลดข้อผิดพลาด pipetting, และปรับปรุงความสอดคล้องกับการผสมหลัก. ส่วนผสมเหล่านี้จะช่วยป้องกันไม่ให้ตัวทำปฏิกิริยาถูกทิ้งไว้โดยสิ้นเชิงส่งผลให้เกิดการปฏิเสธที่ผิดพลาด

 เครื่องคำนวณ PCR Master Mix ของเรา จะช่วยคุณวางแผนสูตรผสมหลักสำหรับชุดปฏิกิริยา PCR ที่กำหนดเอง

การใช้งานตัวมิกซ์หลัก PCR

ส่วนผสมหลัก PCR มักใช้ในการใช้งานต่อไปนี้:

• PCR ที่มีปริมาณงานสูง
• PCR ประจำ

มาสเตอร์ผสมกับดีเอ็นเอเริ่มต้นร้อนพอลิเมอเรสเหมาะสำหรับการใช้งานต่อไปนี้:

• PCR มัลติเพล็กซ์
• การลดลงของไพรเมอร์
• การตั้งค่าอุณหภูมิแวดล้อมที่สะดวกเข้ากันได้กับระบบอัตโนมัติ

ห้องปฏิบัติการในขั้นตอนการตรวจสอบเบื้องต้นอาจแตกต่างกันไปดีเอ็นเอหรือแม่แบบ RNA ในขณะที่อาศัยความสะดวกสบายของส่วนประกอบ premixed อื่นๆ

องค์ประกอบของส่วนผสมหลัก PCR

• Enzyme
• Buffer(s)
• โคแฟกเตอร์ - แมกนีเซียมคลอไรด์ (MgCl₂) เป็นสารประกอบที่พบมากที่สุด บางครั้ง MgSO 4 ใช้กับเอนไซม์เฉพาะ
• dNTP
• ไพรเมอร์
• ดีเอ็นเอเทมเพลต (ถ้าตัวอย่างทั้งหมดจะเหมือนกัน)
  
• น้ำปลอดสารนิวไคลด์หรือน้ำเกรด PCR

ประเภทของ Master Mixes

มีส่วนผสมหลัก PCR ที่เตรียมไว้ล่วงหน้าจำนวนมากเพื่อช่วยประหยัดเวลาและหลีกเลี่ยงข้อผิดพลาดในการวัดและสัดส่วน

ส่วนผสมหลัก PCR เชิงพาณิชย์ส่วนใหญ่จะถูกกำหนดไว้สำหรับ PCR ประเภทใดประเภทหนึ่งเช่นการเริ่มร้อนหรือเข้ากันได้กับเทอร์โมไซเซอร์บางชนิดเท่านั้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับ PCR แบบเรียลไทม์ (หรือที่เรียกว่า PCR เชิงปริมาณหรือ qPCR) ซึ่งอาศัยเทอร์โมไซเซอร์ที่สามารถตรวจจับความก้าวหน้าของปฏิกิริยาตามการพัฒนาฟลูออเรสเซนซ์ที่สอดคล้องกันจากสีย้อมที่รวมอยู่ในส่วนผสมหลัก

ส่วนผสมหลักเชิงพาณิชย์ยังคงต้องมีการเตรียมการก่อนใช้งานถ้าเพียงเพื่อเพิ่มดีเอ็นเอเทมเพลตหรืออาร์เอ็นเอ นอกจากนี้อาจต้องละลายน้ำแข็งแช่เย็นเจือจางด้วยน้ำเกรด PCR และผสมผ่านปิเปตต์หรือเครื่องปั่นเหวี่ยง ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เลือกส่วนผสมหลักที่ถูกต้องเพื่อให้เหมาะกับความต้องการในการทดลองและการตั้งค่า PCR

เรามีส่วนผสมหลักมากมายสำหรับ PCR และ PCR แบบเรียลไทม์ที่ได้รับการตรวจสอบสำหรับเครื่องมือต่างๆ  GUID ECAN การเลือก PCR ที่มีประโยชน์ของเราช่วยให้คุณระบุส่วนผสมหลักที่เหมาะสมหรือส่วนประกอบที่จะทำให้ผสมของคุณเอง นอกจากนี้เรายังได้นำเสนอส่วนผสมหลัก PCR ที่ขายดีที่สุดหลายรายการตามสไตล์ PCR:

• Standard PCR
• PCR ความเที่ยงตรงสูง
• RT PCR
• qPCR

สูตรผสมหลัก PCR ทั่วไป

สูตรพื้นฐานสำหรับส่วนผสมหลัก PCR

การเตรียมส่วนผสมหลักเชิงพาณิชย์

โปรดทราบว่าสูตรทั่วไปนี้จะแตกต่างกันไปในแต่ละส่วนผสมและในการใช้งานเฉพาะ โปรดอ่านเอกสารเกี่ยวกับผลิตภัณฑ์ที่ให้มาสำหรับส่วนผสมหลักหรือการเตรียมมิกซ์สำเร็จรูป

ส่วนผสมหลัก PCR มาตรฐาน

ReadyMix ™ Taq PCR ปฏิกิริยาผสมกับ MgCl₂

ReadyMix ™ Taq PCR Reaction Mix เป็นโซลูชันที่เตรียมไว้ซึ่งมีทุกอย่างที่จำเป็นสำหรับปฏิกิริยา PCR ยกเว้นไพรเมอร์และเทมเพลตเฉพาะ ส่วนผสมรวมถึง Taq DNA Polymerase คุณภาพสูงของเรา deoxynucleotides บริสุทธิ์ 99% และบัฟเฟอร์ในปฏิกิริยาเข้มข้น 2 เท่า

โรชพีซีมาสเตอร์

PCR Master จาก Roche มีน้ำยาทั้งหมดที่จำเป็นในการทำ PCR มาตรฐาน ทั้งหมดที่ต้องเพิ่มคือดีเอ็นเอเทมเพลตไพรเมอร์และปริมาณน้ำที่ต้องการ

REDTaq^® ReadyMix ™ PCR Reaction Mix

ส่วนผสมนี้ผสมผสานประสิทธิภาพและประโยชน์ของ โพลิเมอร์ DNA Taq ® สีแดงของเราเข้ากับส่วนผสมปฏิกิริยา PCR ReadyMix ™ RedTaq^® ReadyMix ™เป็นส่วนผสมที่พร้อมใช้งานของ  พอลิเมอร์ดีเอ็นเอ Taq พอลิเมอร์ดีเอ็นเอ 99 ดีออกซินิวคลีโอไทด์บริสุทธิ์ 100% บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาและสีย้อมสีแดงเฉื่อยในสารเข้มข้น 2 เท่า

เครื่องบด PCR แบบ High-Fidelity

โรชต้นแบบ PCR ความเที่ยงตรงสูง

เลือกต้นแบบ PCR ความเที่ยงตรงสูงที่สะดวกซึ่งเป็นส่วนผสมที่เข้มข้นสองเท่าพร้อมใช้งานซึ่งรวมระบบ PCR ความเที่ยงตรงสูงแบบขยายเข้ากับ dNTP เกรด PCR, MgCl₂และบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุด

มิลลิพอร์ก KOD ฮอตสตาร์ทมาสเตอร์มิกซ์

นี่คือส่วนผสม 2 เท่าที่พร้อมใช้งานซึ่งประกอบด้วยพอลิเมอเรสดีเอ็นเอของ KOD Hot Start แอนติบอดีโมโนโคลนอลสองตัว deoxynucleotides ที่มีความละเอียดสูงและบัฟเฟอร์ปฏิกิริยากับ MgSO₄ ส่วนผสมนี้ได้รับการปรับให้เหมาะสมกับ PCR ความเที่ยงตรงสูงที่สะดวก

RT-PCR การผสมหลัก

Roche Transcriptor High Fidelity cDNA Synthesis Ki tis ออกแบบมาเพื่อย้อนกลับ Transcribe RNA ด้วยความเที่ยงตรงที่เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับ Transcriptases แบบย้อนกลับอื่นๆ ชุดนี้ประกอบด้วย Transcriptor High Fidelity Reverse Transcriptase ซึ่งเป็นการผสมผสานของ recombinant Reverse Transcriptase และเอนไซม์สื่อกลางในการพิสูจน์อักษรที่เหมาะสำหรับ RT-PCR แบบสองขั้นตอน

SYBR^® Green Quantitative RT-qPCR Ki t ให้วิธีการที่มีความสำคัญสูงสำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณของการแสดงออกของยีน QRT-PCR ReadyMix ™ของเราได้รวมข้อดีของ M-MLV RT และ JumpStart Taq ไว้ในส่วนผสมที่สะดวก

KiCqStart^®  น้ำยา RT-qPCR ReadyMix ™แบบขั้นตอนเดียวเป็นส่วนผสมหลักที่มีความไวสูงและพร้อมใช้งานสำหรับ PCR แบบปริมาณการถอดสคริปต์ย้อนกลับ (RT-qPCR) ของแม่แบบ RNA โดยใช้สารเคมีตรวจจับการตรวจสอบการทำให้เป็นลูกผสมเช่นโพรบวัดไฮโดรไลซิสของ TaqMan ® 5 ในระบบ PCR แบบเรียลไทม์ (โปรดดูส่วนความเข้ากันได้ของเครื่องมือเพื่อเลือกน้ำยาที่เหมาะสมสำหรับเครื่องจักรของคุณ)

MystiCq^® microRNA cDNA Synthesis MI xcomponents ทั้งหมดที่จำเป็นในการแปลง microRNAs ที่โตเต็มที่ให้เป็นเทมเพลต cDNA สำหรับ qPCR ชุดอุปกรณ์นี้มีขั้นตอนการถอดแบบ Polyadenylation และ Reverse Transcription แยกต่างหากซึ่งช่วยให้สามารถเพิ่มประสิทธิภาพของโปรโตคอลได้หากจำเป็น

การผสมหลัก QPCR แบบเรียลไทม์

QPCR ที่ใช้การตรวจสอบ

 FastStart TaqMan ® Probe Maste Rfrom Roche เป็นส่วนผสมหลักที่มีความเข้มข้น 2 เท่าที่มีตัวทำปฏิกิริยาทั้งหมด (ยกเว้นไพรเมอร์โพรบและเทมเพลต) ที่จำเป็นสำหรับการทดสอบการตรวจจับดีเอ็นเอแบบเรียลไทม์เชิงปริมาณรวมถึง qPCR และ qrt-PCR แบบสองขั้นตอนในรูปแบบการตรวจจับโพรบไฮโดรไลซิส

Roche EagleTaq Universal Master Mix (ROX) เป็นส่วนผสมหลัก PCR ที่เข้มข้น 2 เท่าที่มีน้ำยาทั้งหมด (ยกเว้นไพรเมอร์โพรบและเทมเพลต) ที่จำเป็นสำหรับการทำปฏิกิริยาการตรวจสอบไฮโดรไลซิส PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ มันมีสีย้อมอ้างอิง ROX พิเศษซึ่งทำให้เหมาะสำหรับเครื่องมือแบบเรียลไทม์ทั้งหมดที่จำเป็นต้องใช้สีย้อมอ้างอิง ROX สำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณ

SYBR^® Green PCR

SYBR^® green master mixes เหมาะสำหรับ PCR แบบเรียลไทม์ พวกเขาใช้สีไซอะนานีนอสมมาตร  ส่วนผสมสีเขียว SYBR ® ที่ได้รับความนิยมมากที่สุด ของเราคือ สีเขียว FastStart SYBR ® ของ Roche FastStart SYBR^® Green Master เป็นส่วนผสมของน้ำยาที่พร้อมใช้งานซึ่งช่วยลดความยุ่งยากในการเตรียมปฏิกิริยาสำหรับ qPCR และ qrt-PCR แบบสองขั้นตอนโดยใช้สีย้อมแบบผสม SYBR^® Green I สำหรับการตรวจหาและวิเคราะห์ดีเอ็นเอ

KiCqStart^® qPCR รีเอเจนต์ ReadyMix ™

KiCqStart^® qPCR ReadyMix ™ Master Mixe Sare มีให้พร้อมใช้งานในรูปแบบเข้มข้น ซึ่งรวมถึงบัฟเฟอร์ชุดกันโคลงและ Taq แบบฮ็อตสตาร์ท ใช้ในโปรโตคอลการขี่จักรยานแบบเร็วหรือแบบธรรมดาบนวงจรระบายความร้อนใดๆ เลือกจาก SYBR^® gree no rprobe-base dmixes

    ส่วนผสมหลักของ KiCqStart ® SYBR ® Green qPCR ReadyMix ™เข้ากันได้กับ Bio-Rad, Cepheid, Eppenddorf, Illumina, Corbett, และระบบโรช ส่วนประกอบประกอบด้วยบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 2 เท่าที่มีความเข้มข้นที่เหมาะสมของ MgCl₂dNTP (dATP, dCTP, DGTP, dTTP), KiCqStart^® Taq DNA Polymerase, SYBR^® Green Dye และ Stabilizers

Low ROX ™ ทำงานร่วมกับ Low ROX ™สำหรับเครื่องมือ ABI และ Stratagene

LuminoCt ™ qPCR รีเอเจนต์

ด้วยการใช้เคมี ReadyMix ™ที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมอย่างมาก ทำ ให้ LuminoCt ™ qPCR รีเอเจนต์ส่งมอบความเร็วในการทดสอบที่ไม่มีใครเทียบได้โดยไม่ต้องเสียสละความแม่นยำความแม่นยำหรือความไว และที่ดีที่สุดคือตัวทำปฏิกิริยา LuminoCt ™ทำงานได้อย่างราบรื่นกับเครื่องมือ qPCR ส่วนใหญ่ดังนั้นการเพิ่มประสิทธิภาพของเงื่อนไขการเกิดปฏิกิริยาจะถูกเก็บไว้ให้น้อยที่สุด บ่อยครั้งที่ผู้ใช้สามารถเลือกชุดทดสอบสร้างชุดทดสอบและเริ่มต้นได้ การสร้างข้อมูล QPCR ที่ดีที่สุดไม่เคยรวดเร็วหรือง่ายกว่านี้มาก่อน

   รีเอเจนต์ LuminoCt ™ SYBR ® Green qPCR ReadyMix ™ได้รับการออกแบบมาเพื่อมอบความเร็วในการทดสอบที่ไม่มีใครเทียบได้โดยไม่สูญเสียความแม่นยำความแม่นยำหรือความไว การออกแบบและการตรวจสอบที่กว้างขวางของเคมี ReadyMix ™ได้ขจัดความจำเป็นในการเพิ่มประสิทธิภาพเมื่อใช้น้ำยา LuminoCt ™ร่วมกับไพรเมอร์ที่ได้รับการออกแบบอย่างถูกต้อง การรวมแอนติบอดี JumpStart ™ Taq ไว้ในน้ำยา ReadyMix ™จะช่วยขจัดกิจกรรมโพลิเมอร์ที่อุณหภูมิแวดล้อมโดยไม่ก่อให้เกิดปัญหาด้านประสิทธิภาพที่เกี่ยวข้องกับ Taq การเริ่มต้นร้อนที่ผ่านการปรับเปลี่ยนทางเคมี

  ชุด LuminoCt ™ qPCR ReadyMix ™ได้รับการออกแบบมาเพื่อทำการวิเคราะห์ qPCR ที่ใช้โพรบบนแพลตฟอร์มอุปกรณ์แบบเรียลไทม์ที่มีอยู่ทั่วไป รีเอเจนต์ ReadyMix ™ต้องเพิ่มสีย้อมอ้างอิง (ให้ไว้ในชุด) เมื่อใช้กับเครื่องมือแบบเรียลไทม์ที่ต้องใช้สีย้อมอ้างอิงแบบพาสซีฟ ROX สำหรับการทำให้เป็นปกติของการวิเคราะห์ qPCR

Recommended Master Mix Products