ข้ามไปยังเนื้อหา
Merck
หน้าแรกการใช้งานจีโนมิกการประยุกต์ใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์

การประยุกต์ใช้งานปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ (PCR)

ขั้นตอน RT-PCR จากการแยก RNA ไปจนถึงการขยาย - Reverse Transcriptase (RT) PCR ทำตามขั้นตอนต่อไปนี้: การแยก RNA หรือ mRNA การหลอมรองพื้นการสังเคราะห์เกลียวครั้งแรกและการขยาย PCR

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) เป็นเทคนิคชีววิทยาโมเลกุลหลักที่มีประสิทธิภาพซึ่งเป็น วิธีการที่มีประสิทธิภาพและรวดเร็วในหลอดทดลองสำหรับการขยายตัวของเอนไซม์ของลำดับ DNA หรือ RNA เฉพาะจากแหล่งต่างๆ PCR มาตรฐานประกอบด้วยดีเอ็นเอเป้าหมายซึ่งเป็นชุดของไพรเมอร์ oligonucleotide สังเคราะห์ที่หมุนลำดับดีเอ็นเอเป้าหมายโพลิเมอร์ DNA ที่มีความเสถียรต่ออุณหภูมิ (โดยปกติจะเป็นโพลิเมอร์ Taq) และนิวคลีโอไทด์ การใช้วงจรความร้อนมีสามขั้นตอนในระหว่างวงจรการขยายแต่ละครั้งรวมถึงการลดความอิ่มตัวของดีเอ็นเอแบบดับเบิลเกลียว (DSDNA) เป็นดีเอ็นเอเดี่ยวที่แยกออกจากกันการหลอมไพรเมอร์เข้ากับลำดับดีเอ็นเอเป้าหมายและการขยายตัวที่ดีเอ็นเอพอลิเมอเรสขยายดีเอ็นเอจากไพรเมอร์สร้าง dsDNA ใหม่ด้วยเส้นใยเก่าหนึ่งเส้นและเส้นใยใหม่หนึ่งเส้น เกลียวที่สังเคราะห์ขึ้นในหนึ่งรอบทำหน้าที่เป็นเทมเพลตในครั้งต่อไปส่งผลให้ปริมาณดีเอ็นเอเพิ่มขึ้นเป็นล้านเท่าในเวลาเพียง 20 รอบ

Featured Categories

การโคลนโมเลกุลและการแสดงออกของโปรตีน
การโคลนโมเลกุลและการแสดงออกของโปรตีน

การโคลนโมเลกุลและวิธีการแสดงออกของโปรตีนและโปรโตคอลสำหรับการโคลนที่เชื่อถือได้และการแสดงออกของโปรตีนที่แข็งแกร่งจากแมลงแบคทีเรียและเวกเตอร์การแสดงออกของโปรตีนสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม

เลือกซื้อผลิตภัณฑ์
เอพิเจเนติกส์
เอพิเจเนติกส์

รีเอเจนต์ epigenetic และทรัพยากรสำหรับการตรวจสอบสายพันธุ์ RNA การดัดแปลงดีเอ็นเอ methylation การปรับเปลี่ยนโครมาตินและการปรับเปลี่ยนไฮสโตน

เลือกซื้อผลิตภัณฑ์
ผลิตภัณฑ์เกรดตัวทำละลาย ReagentPlus
ไมโครไบโอม

การวิเคราะห์ Gut Microbiome ที่ครอบคลุม: ค้นพบโซลูชันแบบองค์รวมที่ครอบคลุมการเตรียมตัวอย่างการจัดลำดับชีวสารสนเทศและสถิติ ตั้งแต่ 16 วินาทีถึง WGS

เลือกซื้อผลิตภัณฑ์

PCR ทรานสคริปต์ย้อนกลับ (RT-PCR)

RT-PCR หรือ Reverse Transcriptase PCR คือการเปลี่ยนแปลงของเทคนิค PCR มาตรฐานที่เกี่ยวข้องกับการขยายตัวของ mRNA เฉพาะที่ได้จากตัวอย่างที่มีขนาดเล็กมาก จึงไม่จำเป็นต้องใช้กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ mRNA ที่น่าเบื่อซึ่งจำเป็นสำหรับเทคนิคการโคลนแบบดั้งเดิม ด้วย RT-PCR จะมีการใช้ Reverse Transcriptase และตัวอย่าง RNA นอกเหนือจากตัวทำปฏิกิริยา PCR มาตรฐาน ส่วนผสมของปฏิกิริยาจะถูกให้ความร้อนถึง 37 ˚C ซึ่งช่วยให้สามารถผลิตสำเนา cDNA เสริมจากตัวอย่าง RNA ได้โดยใช้ reverse transcriptase จากนั้น cDNA นี้จะหลอมเข้ากับหนึ่งในไพรเมอร์ที่นำไปสู่การสังเคราะห์เกลียวครั้งแรก PCR มาตรฐานจะมาจากตรงนี้ซึ่งจะสร้าง dsDNA ในที่สุด RT-PCR มักถูกรวมเข้ากับ PCR แบบเรียลไทม์ (QPCR) ซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในการวัดปริมาณของระดับการถอดความในเซลล์และเนื้อเยื่อ

Hot Start PCR

Hot Start PCR เป็นเทคโนโลยีที่ยับยั้งการเกิดโพลิเมอร์ Taq แบบ Hot Start หรือการรวมตัวของ dNTP ที่ได้รับการดัดแปลงในระหว่างการตั้งค่าปฏิกิริยาจนกว่าจะมีขั้นตอนการกระตุ้นความร้อนเกิดขึ้น วิธีการต่างๆสามารถใช้ได้เพื่อยับยั้งกิจกรรมโพลิเมอร์เริ่มต้นร้อนและรวมถึงการปรับเปลี่ยนทางเคมีวิธีแอนติบอดีปานกลางและ aptamer-mediated 

PCR ของอุปกรณ์ปลายทางสำหรับการขยายเป้าหมายที่ยาวและแม่นยำ

PCR จุดสิ้นสุดมักใช้เพื่อตรวจจับการมีอยู่ของเป้าหมายและความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์เมื่อการตอบสนองเสร็จสมบูรณ์ ความยาวที่จำกัดของลำดับที่ผลิตในระหว่าง PCR มาตรฐานประมาณ 5 kb เป็นส่วนหนึ่งที่เอาชนะด้วยการรวมตัวกันของปัจจัยเพิ่มเติมที่ให้กิจกรรม " พิสูจน์อักษร " →ยาวและถูกต้อง (LA) PCR รวมการใช้โพลิเมอร์ที่มีความร้อนคงที่ตัวที่สองกับ exonuclease 3 ' 5 ' เพื่อซ่อมแซมการรวมตัวกันของนิวเคลียสของขั้วส่งผลให้ความเที่ยงตรงเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญและความสามารถในการขยายเป้าหมาย DNA ได้ถึง 40 kb ยาว

ค้นหาเอกสาร
กำลังมองหาข้อมูลที่เฉพาะเจาะจงมากขึ้น ?

ไปที่เอกสารของเราค้นหาเอกสารข้อมูลใบรับรองและเอกสารทางเทคนิค

Find Documents
Featured Articles
การแก้ไขปัญหาการขยาย PCR และ RT-PCR
ปัญหาเกี่ยวกับ PCR และ RT-PCR จะถูกระบุในระหว่างการวิเคราะห์อิเล็กโตรโฟเรซิสของเจลเช่นการไม่มีแถบการมีแบนที่ไม่เฉพาะเจาะจงรอยเปื้อนที่มากเกินไปและรอยเปื้อนของแถบ
Digital PCR
Digital PCR enables absolute quantification and detection of minority sequences against similar majority sequences, such as somatic mutations.
อีทิเดียมโบรไมด์
Ethidium bromide เป็นสีย้อมเรืองแสงที่รู้จักกันดีและใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยเทคโนโลยีชีวภาพ
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์เป็นหนึ่งในเทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในชีววิทยาโมเลกุล กระบวนการ PCR ประกอบด้วยสามขั้นตอนหลักคือการลดความอิ่มตัวการหลอมและการขยาย
เข้าสู่ระบบเพื่อดำเนินการต่อ

เพื่ออ่านต่อ โปรดเข้าสู่ระบบหรือสร้างบัญชีใหม่

ยังไม่มีบัญชีใช่หรือไม่?