ข้ามไปยังเนื้อหา
หน้าแรกการใช้งานจีโนมิกการประยุกต์ใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส

การประยุกต์ใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR)

ขั้นตอน RT-PCR ตั้งแต่การแยก RNA ไปจนถึงการขยาย - PCR ด้วยเอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริปเทส (RT) ดำเนินการตามขั้นตอนต่อไปนี้: การแยก RNA หรือ mRNA, การจับคู่ไพรเมอร์, การสังเคราะห์สายแรก และการขยายด้วย PCR

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) เป็นเทคนิคหลักที่มีประสิทธิภาพสูงในชีววิทยาโมเลกุล ซึ่งเป็นวิธีการในหลอดทดลองที่มีประสิทธิภาพและรวดเร็วสำหรับการขยายลำดับดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอเฉพาะจากแหล่งต่าง ๆ ด้วยเอนไซม์ PCR มาตรฐานประกอบด้วย ดีเอ็นเอเป้าหมาย ชุดไพรเมอร์โอลิโกนิวคลีโอไทด์สังเคราะห์ที่ล้อมรอบลำดับดีเอ็นเอเป้าหมาย ดีเอ็นเอพอลิเมอเรสที่ทนความร้อน (โดยทั่วไปคือ Taq polymerase) และนิวคลีโอไทด์ โดยใช้เครื่องไซเคิลความร้อน (thermal cycler) แต่ละรอบการขยายตัวจะประกอบด้วยสามขั้นตอน ได้แก่ การทำให้ DNA สายคู่ (dsDNA) แยกตัวเป็น DNA สายเดี่ยวสองสาย การจับคู่ไพรเมอร์กับลำดับ DNA เป้าหมาย และการขยายตัว ซึ่ง DNA โพลีเมอเรสจะขยาย DNA จากไพรเมอร์ สร้าง dsDNA ใหม่ที่มีสายเก่าหนึ่งสายและสายใหม่หนึ่งสาย สาย DNA ที่สังเคราะห์ได้ในหนึ่งรอบจะทำหน้าที่เป็นแม่แบบในรอบถัดไป ซึ่งส่งผลให้ปริมาณ DNA เพิ่มขึ้นถึงหนึ่งล้านเท่าภายในเพียง 20 รอบเท่านั้น

หมวดหมู่ที่แนะนำ

การโคลนนิ่งระดับโมเลกุลและการแสดงออกของโปรตีน
การโคลนนิ่งระดับโมเลกุลและการแสดงออกของโปรตีน

วิธีการและขั้นตอนการโคลนนิ่งระดับโมเลกุลและการแสดงออกของโปรตีน เพื่อการโคลนนิ่งที่เชื่อถือได้และการแสดงออกของโปรตีนที่มั่นคงจากเวกเตอร์การแสดงออกของโปรตีนจากแมลง แบคทีเรีย และสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม

ดูสินค้า
เอพิเจเนติกส์
เอพิเจเนติกส์

สารและทรัพยากรด้านเอพิเจเนติกส์ สำหรับการศึกษาชนิดของ RNA การเมทิลเลชันของ DNA การเปลี่ยนแปลงของโครมาติน และการเปลี่ยนแปลงของฮิสโตน

ดูสินค้า
ผลิตภัณฑ์ ReagentPlus สำหรับใช้ในสารละลาย
ไมโครไบโอม

การวิเคราะห์ไมโครไบโอมในลำไส้อย่างครบวงจร: ค้นพบโซลูชันแบบองค์รวมที่ครอบคลุมการเตรียมตัวอย่าง การหาลำดับพันธุกรรม การวิเคราะห์ข้อมูลชีวภาพ และสถิติ ตั้งแต่ 16S ไปจนถึง WGS

ดูสินค้า

PCR ด้วยเอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริปเทส (RT-PCR)

RT-PCR หรือ PCR ด้วยเอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริปเทส เป็นรูปแบบหนึ่งของเทคนิค PCR มาตรฐาน ซึ่งเกี่ยวข้องกับการขยายปริมาณ mRNA ที่เฉพาะเจาะจงจากตัวอย่างที่มีขนาดเล็กมาก เทคนิคนี้ช่วยขจัดความจำเป็นในการผ่านกระบวนการแยกบริสุทธิ์ mRNA ที่ยุ่งยาก ซึ่งจำเป็นสำหรับเทคนิคการโคลนนิ่งแบบดั้งเดิม โดยใน RT-PCR จะใช้เอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริปเทสและตัวอย่าง RNA ร่วมกับสารเคมี PCR มาตรฐาน ผสมปฏิกิริยาถูกให้ความร้อนถึง 37 ˚C ซึ่งทำให้เอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริปเทสสามารถสร้างสำเนา cDNA ที่เสริมกันจากตัวอย่าง RNA ได้ cDNA นี้จึงจับคู่กับไพรเมอร์ตัวหนึ่ง ซึ่งนำไปสู่การสังเคราะห์สายแรก หลังจากนั้นจะดำเนินการตามขั้นตอน PCR มาตรฐาน ซึ่งในที่สุดจะสร้าง dsDNA ขึ้น RT-PCR มักถูกใช้ร่วมกับ real-time PCR (qPCR) ซึ่งถูกใช้อย่างแพร่หลายในการวัดปริมาณระดับการถอดรหัสในเซลล์และเนื้อเยื่อ

Hot Start PCR

Hot Start PCR เป็นเทคโนโลยีที่ยับยั้งการทำงานของ Taq polymerase แบบ hot start หรือการรวมตัวของ dNTP ที่ถูกดัดแปลงในระหว่างการเตรียมปฏิกิริยา จนกว่าจะถึงขั้นตอนการกระตุ้นด้วยความร้อน มีวิธีการต่าง ๆ ที่สามารถใช้เพื่อยับยั้งกิจกรรมของ polymerase แบบ hot start ได้ ซึ่งรวมถึงวิธีการดัดแปลงทางเคมี วิธีการที่ใช้แอนติบอดีเป็นตัวกลาง และวิธีการที่ใช้ aptamer เป็นตัวกลาง 

PCR แบบ Endpoint สำหรับการขยาย
เป้าหมายที่ยาวและแม่นยำ

PCR แบบจุดสิ้นสุดมักถูกใช้เพื่อตรวจหาการมีอยู่ของเป้าหมายและปริมาณสัมพัทธ์เมื่อปฏิกิริยาเสร็จสิ้น ความยาวที่จำกัดของลำดับที่เกิดใน PCR มาตรฐาน ซึ่งประมาณ 5 kb สามารถแก้ไขได้ส่วนหนึ่งด้วยการเพิ่มปัจจัยเพิ่มเติมที่ให้กิจกรรม “การตรวจสอบความถูกต้อง” PCR ยาวและแม่นยำ (LA) ใช้โพลีเมอเรสที่ทนความร้อนตัวที่สองที่มีเอนโซนิวคลีเอส 3′→5′ เพื่อซ่อมแซมการรวมนิวคลีโอไทด์ผิดที่ปลายสาย ส่งผลให้ความแม่นยำเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ และสามารถขยายเป้าหมาย DNA ได้ยาวถึง 40 kb

การค้นหาเอกสาร
ต้องการข้อมูลที่ละเอียดกว่านี้หรือไม่?

เยี่ยมชมระบบค้นหาเอกสารของเราเพื่อค้นหาใบข้อมูล ใบรับรอง และเอกสารทางเทคนิค

ค้นหาเอกสาร
บทความแนะนำ
การแก้ไขปัญหาการขยาย PCR และ RT-PCR
ปัญหาเกี่ยวกับ PCR และ RT-PCR จะถูกระบุในระหว่างการวิเคราะห์อิเล็กโตรโฟเรซิสของเจลเช่นการไม่มีแถบการมีแบนที่ไม่เฉพาะเจาะจงรอยเปื้อนที่มากเกินไปและรอยเปื้อนของแถบ
Digital PCR
Digital PCR enables absolute quantification and detection of minority sequences against similar majority sequences, such as somatic mutations.
อีทิเดียมโบรไมด์
Ethidium bromide เป็นสีย้อมเรืองแสงที่รู้จักกันดีและใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยเทคโนโลยีชีวภาพ
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์เป็นหนึ่งในเทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในชีววิทยาโมเลกุล กระบวนการ PCR ประกอบด้วยสามขั้นตอนหลักคือการลดความอิ่มตัวการหลอมและการขยาย