qPCR
Phương pháp PCR định lượng thời gian thực (qPCR) sử dụng các phân tử báo hiệu huỳnh quang để định lượng các sản phẩm được khuếch đại. Giống như trong phương pháp PCR truyền thống, mẫu DNA, cDNA hoặc RNA được khuếch đại, nhưng ở mỗi chu kỳ, các tín hiệu huỳnh quang được theo dõi để thực hiện định lượng tương đối hoặc tuyệt đối.
Kỹ thuật này rất hữu ích trong nhiều lĩnh vực nghiên cứu, bao gồm phân tích biểu hiện gen, xác định kiểu gen, phân tích microRNA, phân tích biến dị di truyền và phân tích protein.
Các danh mục nổi bật
Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) là phương pháp chủ chốt trong các phòng thí nghiệm sinh học phân tử. PCR được sử dụng để khuếch đại DNA với mức độ tăng lên nhiều bậc, và các chất phản ứng cùng nguồn lực của chúng tôi phù hợp với nhiều quy trình nghiên cứu, bao gồm phân tích biểu hiện gen, xác định kiểu gen, giải trình tự và các ứng dụng liên quan đến đột biến gen.
Các phương pháp và quy trình nhân bản phân tử và biểu hiện protein nhằm đảm bảo quá trình nhân bản đáng tin cậy và biểu hiện protein ổn định từ các vectơ biểu hiện protein của côn trùng, vi khuẩn và động vật có vú.
Các chất phản ứng và tài nguyên về biểu sinh dùng để nghiên cứu các loại RNA, quá trình methyl hóa DNA, các biến đổi chromatin và các biến đổi histone.
Phân tích toàn diện hệ vi sinh vật đường ruột: Khám phá giải pháp toàn diện bao gồm các bước chuẩn bị mẫu, giải trình tự, sinh tin học và thống kê. Từ 16S đến WGS.
Cách phân tích dữ liệu qPCR
Độ huỳnh quang của các phân tử báo hiệu được đo và định lượng; thông thường, đây là các chất nhuộm (ví dụ: SYBR® Green, Ethidium Bromide) xen kẽ giữa các bazơ trong DNA sợi kép, hoặc các đầu dò được thiết kế để liên kết với một trình tự cụ thể (ví dụ: Molecular Beacons, đầu dò TaqMan®) trên DNA.
Định lượng tương đối dữ liệu qPCR
Có hai phương pháp định lượng chính đối với dữ liệu qPCR. Định lượng tương đối, phương pháp phổ biến hơn, sử dụng thông tin ΔΔCt, qua đó xác định tỷ lệ biểu hiện hoặc tỷ lệ phong phú của gen mục tiêu trong mẫu, so sánh với gen đối chứng và chuẩn hóa với tỷ lệ biểu hiện của gen tham chiếu. Do các giá trị hiệu suất E của gen mục tiêu và gen tham chiếu khác nhau, phương pháp này cũng tính đến sự khác biệt trong các giá trị E. Phương pháp này được sử dụng thường xuyên hơn trong phân tích biểu hiện gen.
Định lượng tuyệt đối dữ liệu qPCR
Phương pháp thứ hai, định lượng tuyệt đối, phổ biến hơn trong vi sinh học môi trường và sử dụng đường cong chuẩn (SC). Phương pháp SC sử dụng chuỗi pha loãng có nồng độ mẫu đã biết, N0, để tạo ra đường cong chuẩn bằng cách sử dụng hồi quy tuyến tính của log(N0) so với CT (chu kỳ ngưỡng). Sau đó, đường cong này được sử dụng để tính toán nồng độ mẫu của mẫu. Cơ sở của phương pháp này là giá trị hiệu suất của mẫu giống với giá trị hiệu suất của chuẩn.
Bạn đang tìm kiếm thông tin cụ thể hơn?
Hãy truy cập công cụ tìm kiếm tài liệu của chúng tôi để xem các bảng dữ liệu, chứng chỉ và tài liệu kỹ thuật.
Các bài viết liên quan
- Sau khi một PCR truyền thống đã được hoàn thành, phân tích dữ liệu PCR/qPCR được thực hiện theo độ phân giải thông qua một gel agarose hoặc gần đây hơn, thông qua một mao mạch.
- Phản ứng chuỗi polymerase thời gian thực cho phép các nhà nghiên cứu ước tính số lượng vật liệu ban đầu trong một mẫu. Nó có một dải phân tích động rộng hơn nhiều so với PCR thông thường
- Hướng dẫn xét nghiệm PCR điều hướng bạn thông qua xác thực mồi và các yếu tố tối ưu hóa xét nghiệm khác để đảm bảo độ nhạy và tính đặc hiệu cao để định lượng DNA/ RNA tối ưu.
- PCR workflow's variability influenced by sample source, reverse transcription, and assay design, impacting reproducibility.
- Mục đích của PCR khởi động nóng là ức chế phản ứng PCR để giảm khuếch đại không đặc hiệu, ngăn chặn sự hình thành của các bộ điều chỉnh độ sáng mồi và tăng năng suất sản phẩm.
- Xem tất cả (45)
Các giao thức liên quan
- Giao thức qPCR xanh SYBR của chúng tôi là một phương pháp được thiết kế để phát hiện định lượng chính xác biểu hiện gen và phản ứng RT-PCR
- Chromatin Immunoprecipitation qPCR for studying gene regulation across conditions.
- Primer Concentration Optimization Protocol creates reaction matrix for testing primer concentrations against various partners.
- Optimization of qPCR conditions is important for the development of a robust assay. The two main approaches are optimization of primer concentration and/or annealing temperatures.
- Multiplex qPCR sử dụng hóa học dựa trên đầu dò là một ứng dụng đòi hỏi thường đòi hỏi phải tối ưu hóa và xác thực rộng rãi.
- Xem tất cả (30)
Xem thêm các bài viết và quy trình
Chúng tôi có thể hỗ trợ quý khách như thế nào?
Nếu có bất kỳ thắc mắc nào, vui lòng gửi yêu cầu
hỗ trợ khách hàng hoặc liên hệ với đội ngũ dịch vụ khách hàng của chúng tôi:
Gửi email đến custserv@sial.com
hoặc gọi đến số +1 (800) 244-1173
Hỗ trợ bổ sung
- Máy tính & Ứng dụng
Web Toolbox - các công cụ nghiên cứu khoa học và tài nguyên cho hóa học phân tích, khoa học sự sống, tổng hợp hóa học và khoa học vật liệu.
- Yêu cầu hỗ trợ khách hàng
Hỗ trợ khách hàng bao gồm trợ giúp về đơn hàng, sản phẩm, tài khoản và các vấn đề kỹ thuật của trang web.
- Câu hỏi thường gặp
Hãy tham khảo phần Câu hỏi thường gặp của chúng tôi để tìm câu trả lời cho những thắc mắc phổ biến về các sản phẩm và dịch vụ của chúng tôi.