Chuyển đến phần Nội dung
Trang chủỨng dụngXét nghiệm vi sinhKiểm tra khả năng vô sinh

Kiểm tra khả năng vô sinh

Kiểm tra vô trùng là một yêu cầu GMP quan trọng nhằm xác nhận rằng các sản phẩm dược phẩm, thiết bị y tế, sinh phẩm và liệu pháp tế bào & gen không chứa vi sinh vật còn sống trước khi được sử dụng cho bệnh nhân. Kết quả kiểm tra vô trùng không đạt yêu cầu — dù là kết quả dương tính thật hay dương tính giả — đều dẫn đến những hậu quả nghiêm trọng: thu hồi sản phẩm, rủi ro về an toàn cho bệnh nhân và các cuộc điều tra của cơ quan quản lý với chi phí cao.

Khi các tiêu chuẩn dược điển ngày càng phát triển và sự giám sát của cơ quan quản lý ngày càng chặt chẽ, các chương trình kiểm tra vô trùng hiện đại phải giải quyết ba thách thức liên quan chặt chẽ với nhau: độ chính xác về phương pháp, tính toàn vẹn của dữ liệu và tốc độ phê duyệt sản phẩm. Việc hiểu rõ các phương pháp kiểm tra vô trùng hiện có, khung pháp lý liên quan và những tiến bộ mới nhất trong quy trình làm việc số hóa cùng các phương pháp vi sinh nhanh là điều thiết yếu đối với bất kỳ phòng thí nghiệm kiểm soát chất lượng nào hoạt động theo tiêu chuẩn GMP.

Từ việc lựa chọn phương pháp kiểm tra phù hợp cho sản phẩm và dạng đóng gói của bạn, đến việc đáp ứng các kỳ vọng ngày càng cao của cơ quan quản lý về tính toàn vẹn dữ liệu và tốc độ phát hành, hướng dẫn này sẽ dẫn dắt bạn qua mọi khía cạnh quan trọng của kiểm tra vô trùng. 

Hãy trao đổi với một chuyên gia

Các danh mục nổi bật

Vật tư tiêu hao, môi trường nuôi cấy và dụng cụ dùng trong thử nghiệm vô trùng
Vật tư tiêu hao, môi trường nuôi cấy và dụng cụ dùng trong thử nghiệm vô trùng

Các thiết bị phòng thí nghiệm và vật tư tiêu hao dùng để kiểm tra độ vô trùng trong kiểm soát chất lượng vi sinh: Môi trường thử nghiệm độ vô trùng, máy bơm, thiết bị và phụ kiện.

Xem các sản phẩm
Thử nghiệm chất gây sốt
Thử nghiệm chất gây sốt

Đảm bảo an toàn: Thử nghiệm pyrogen là yếu tố quan trọng đối với dược phẩm và thiết bị y tế. Thử nghiệm kích hoạt bạch cầu đơn nhân (MAT) giúp phát hiện endotoxin và các chất gây sốt không phải endotoxin.

Xem sản phẩm
Lọc vi sinh
Lọc vi sinh

Giảm thời gian chờ kết quả nhờ phương pháp xét nghiệm vi sinh nhanh chóng bằng hệ thống lọc màng hoàn chỉnh của chúng tôi; được sử dụng trong xét nghiệm tải lượng vi sinh, phân tích thực phẩm và đồ uống, cũng như xét nghiệm vi sinh học cần sa.

Xem các sản phẩm

Các phương pháp kiểm tra độ vô trùng trong dược phẩm

Thử nghiệm vô trùng theo tiêu chuẩn dược điển đối với các sản phẩm dược phẩm được quy định bởi USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 và JP <4.06>, yêu cầu các mẫu phải được nuôi cấy trong hai môi trường riêng biệt trong thời gian ủ 14 ngày. Hai môi trường nuôi cấy được sử dụng để đảm bảo bao quát toàn diện các vi sinh vật: Môi trường Thioglycolate lỏng (FTM) dành cho vi khuẩn kỵ khí và hiếu khí (ủ ở 32,5°C), và Môi trường đậu nành Casein (SCDM), còn gọi là Môi trường Trypticase Soy Broth (TSB), dành cho vi khuẩn hiếu khí và nấm (ủ ở 22,5°C). Bất kỳ độ đục nào được quan sát thấy sau khi ủ đều cho thấy khả năng nhiễm vi sinh vật và phải được điều tra.

Hai phương pháp được công nhận trong các tiêu chuẩn dược điển là: lọc màng và cấy trực tiếp. Việc lựa chọn phương pháp phụ thuộc vào bản chất của sản phẩm, dạng đóng gói và các tính chất lý hóa của nó. Trong trường hợp bản chất của sản phẩm cho phép, phương pháp lọc màng là phương pháp được ưu tiên theo quy định của USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 và JP <4.06>, nhờ độ nhạy cao hơn và khả năng loại bỏ các chất ức chế. Phương pháp cấy trực tiếp vẫn được áp dụng khi việc lọc màng không khả thi.

Mặc dù thời gian ủ 14 ngày vẫn là tiêu chuẩn của Dược điển, các Phương pháp Vi sinh Nhanh (RMM) dựa trên công nghệ phát quang sinh học ATP đang ngày càng được các cơ quan quản lý chấp nhận đối với các sản phẩm có thời hạn sử dụng ngắn, bao gồm cả liệu pháp tế bào và gen. Chương mới của USP <73> — “Các phương pháp vi sinh dựa trên phát quang sinh học ATP để phát hiện sự nhiễm bẩn trong các sản phẩm có thời hạn sử dụng ngắn” — cung cấp một khung quy định rõ ràng cho việc áp dụng RMM cũng như việc xác nhận và triển khai công nghệ này, có hiệu lực từ tháng 8 năm 2025.

Bất kể phương pháp nào được lựa chọn, các yêu cầu về tính toàn vẹn dữ liệu đều áp dụng như nhau cho tất cả các quy trình kiểm tra độ vô trùng: tất cả dữ liệu thử nghiệm phải có thể truy xuất nguồn gốc đầy đủ, sẵn sàng cho kiểm toán và tuân thủ ALCOA++, 21 CFR Phần 11 và Phụ lục 11 của EU — từ khi nhận mẫu đến khi ghi lại kết quả cuối cùng.

Thử nghiệm vô trùng bằng lọc màng

Tìm kiếm tài liệu
Bạn đang tìm kiếm thông tin cụ thể hơn?

Hãy truy cập công cụ tìm kiếm tài liệu của chúng tôi để xem các bảng thông số kỹ thuật, chứng chỉ và tài liệu kỹ thuật.

Tìm tài liệu

Với hơn 50 năm kinh nghiệm là đơn vị tiên phong trong ngành, giải pháp Steritest® mang đến quy trình kiểm tra vô trùng đáng tin cậy và an toàn, đảm bảo kết quả chính xác. Phương pháp lọc màng là phương pháp được quy định ưu tiên áp dụng cho các sản phẩm dược phẩm có thể lọc theo tiêu chuẩn USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 và JP <4.06>. Mẫu được đưa qua bộ lọc màng 0,45 µm, nơi các vi sinh vật bị giữ lại và sau đó được nuôi cấy trong môi trường thích hợp.

Phương pháp này mang lại những ưu điểm nổi bật so với phương pháp cấy trực tiếp:

  • Độ nhạy cao hơn — toàn bộ mẫu, hoặc mẫu hỗn hợp, được lọc qua một màng duy nhất
  • Loại bỏ chất ức chế — các hợp chất kháng khuẩn như kháng sinh hoặc chất bảo quản có thể được rửa trôi trước khi ủ, ngăn ngừa kết quả âm tính giả
  • Bảo vệ hệ thống kín — các thiết bị lọc hệ thống kín hiện đại đảm bảo sản phẩm không bao giờ tiếp xúc với môi trường trong quá trình thử nghiệm, giúp giảm đáng kể nguy cơ nhiễm bẩn từ bên ngoài và kết quả thử nghiệm không hợp lệ

Việc sử dụng các thiết bị lọc màng dùng một lần, hệ thống kín được coi là thực hành tốt nhất trong môi trường thử nghiệm vô trùng theo tiêu chuẩn GMP, cả trong tủ khí lưu tầng và buồng cách ly.

Thử nghiệm vô trùng bằng phương pháp cấy trực tiếp

Trong thử nghiệm vô trùng bằng cấy trực tiếp, một lượng nhỏ mẫu được chuyển vô trùng vào môi trường nuôi cấy thích hợp và ủ. Mặc dù dễ thực hiện, phương pháp này có một số hạn chế mà các phòng thí nghiệm cần lưu ý:

  • Độ nhạy thấp — chỉ có thể cấy được lượng mẫu nhỏ, làm tăng nguy cơ bỏ sót nhiễm bẩn ở mức thấp
  • Sự can thiệp của độ đục — các sản phẩm vốn đã đục hoặc có màu có thể che lấp sự phát triển của vi sinh vật trong quá trình kiểm tra bằng mắt thường
  • Ức chế kháng khuẩn — các sản phẩm có tính kháng khuẩn phải được trung hòa trước khi cấy để tránh kết quả âm tính giả

Các phương pháp vi sinh nhanh (RMM) trong kiểm tra độ vô trùng

Khi các khung quy định ngày càng phát triển để thích ứng với sự đổi mới, các Phương pháp Vi sinh Nhanh (RMM) đang dần được chấp nhận như những phương pháp thay thế đã được xác nhận khoa học cho các phương pháp kiểm tra độ vô trùng truyền thống theo dược điển. RMM đặc biệt phù hợp với các sản phẩm có thời hạn sử dụng ngắn — chẳng hạn như liệu pháp tế bào và gen, dược phẩm phóng xạ và các chế phẩm sinh học có thời hạn sử dụng ngắn — trong đó thời gian ủ 14 ngày không phù hợp với tiến độ phát hành sản phẩm hoặc lịch trình điều trị của bệnh nhân.

Trong số các công nghệ RMM đã được thiết lập vững chắc nhất, phương pháp phát quang sinh học ATP phát hiện ánh sáng do các vi sinh vật còn sống phát ra sau khi phản ứng với thuốc thử phát quang sinh học, cho phép phát hiện ô nhiễm nhanh chóng, nhạy cảm và định lượng. Không giống như các phương pháp truyền thống dựa trên ủ, phương pháp phát quang sinh học ATP thay thế việc đánh giá độ đục bằng mắt thường mang tính chủ quan bằng phép đo định lượng dựa trên thiết bị, cho phép giải thích kết quả sớm hơn và có tính lặp lại cao hơn.

Việc ban hành tiêu chuẩn USP <73> — “Các phương pháp vi sinh dựa trên phát quang sinh học ATP để phát hiện nhiễm bẩn trong các sản phẩm có thời hạn sử dụng ngắn”, có hiệu lực từ tháng 8 năm 2025 — đánh dấu một cột mốc quy định quan trọng, cung cấp cho các phòng thí nghiệm một khung quy định rõ ràng từ Dược điển để triển khai và xác nhận các thử nghiệm vô trùng dựa trên RMM. Điều này được bổ sung bởi USP <1071>, cung cấp hướng dẫn rộng hơn về việc triển khai và xác nhận các phương pháp vi sinh nhanh.

Các phương pháp RMM không chỉ phù hợp cho việc thử nghiệm vô trùng sản phẩm cuối cùng mà còn cho việc giám sát tải lượng vi sinh trong quá trình sản xuất, mang lại cho các phòng thí nghiệm một giải pháp linh hoạt và tuân thủ quy định cho nhiều ứng dụng kiểm soát chất lượng.

Hệ thống Milliflex® Rapid System 2.0 hoàn toàn tuân thủ các yêu cầu của USP <73> và cho phép phòng thí nghiệm của quý vị triển khai quy trình kiểm tra độ vô trùng dựa trên RMM đã được xác nhận và tuân thủ — mang lại kết quả trong vòng 5 ngày hoặc ít hơn.

Tính toàn vẹn và quản trị dữ liệu trong thử nghiệm vô trùng

Kết quả thử nghiệm vô trùng chỉ đáng tin cậy khi dữ liệu đằng sau nó đáng tin cậy — và các cơ quan quản lý trên toàn thế giới đang đặt tính toàn vẹn dữ liệu làm trọng tâm của việc tuân thủ các quy định về vi sinh học theo GMP. Ngoài phương pháp luận, việc dữ liệu thử nghiệm vô trùng được tạo ra, ghi chép và duy trì như thế nào trong toàn bộ vòng đời thử nghiệm cũng được coi trọng không kém. Các cơ quan quản lý bao gồm FDA, EMA và PMDA yêu cầu tất cả dữ liệu phòng thí nghiệm phải tuân thủ các nguyên tắc ALCOA++: dữ liệu phải có thể xác định nguồn gốc (Attributable), dễ đọc (Legible), được ghi chép đồng thời (Contemporaneous), là bản gốc (Original) và chính xác (Accurate), cùng với các yêu cầu bổ sung về tính đầy đủ, nhất quán và khả năng truy cập.

Tại Hoa Kỳ, 21 CFR Phần 11 quy định các yêu cầu đối với hồ sơ điện tử và chữ ký điện tử, khiến tài liệu số có giá trị pháp lý tương đương với hồ sơ giấy. Tại châu Âu, Phụ lục 11 của EU thiết lập các yêu cầu tương đương đối với các hệ thống máy tính trong môi trường GMP. Kết hợp lại, các quy định này thiết lập một khung pháp lý rõ ràng về Tính toàn vẹn dữ liệu cho dữ liệu phòng thí nghiệm kiểm soát chất lượng (QC), bao gồm Thử nghiệm vô trùng: việc thu thập dữ liệu theo thời gian thực, tạo bản ghi kiểm tra tự động và khả năng truy xuất nguồn gốc kỹ thuật số toàn diện từ đầu đến cuối — từ thông tin nhận dạng người vận hành và dữ liệu thiết bị, đến thông tin mẫu và kết quả cuối cùng — ngày càng được các cơ quan quản lý yêu cầu trong các cuộc thanh tra GMP và được coi là thực hành tốt nhất trong ngành. Phần mềm và Ứng dụng di động M-Trace® giúp phòng thí nghiệm của quý vị đáp ứng các yêu cầu quy định này. 

Hãy trao đổi với một chuyên gia

Các ứng dụng của thử nghiệm vô trùng: Từ dược phẩm đến liệu pháp tế bào và gen

Kiểm tra vô trùng là một yêu cầu kiểm soát chất lượng thường quy trong một loạt các ngành công nghiệp được quy định bởi GMP. Mặc dù các nguyên tắc cơ bản vẫn nhất quán, nhưng việc lựa chọn phương pháp, khung quy định và yêu cầu về tốc độ cho kết quả lại khác nhau đáng kể tùy theo từng phân khúc:

  • Các sản phẩm dược phẩm — bao gồm thuốc tiêm, chế phẩm nhãn khoa và dịch truyền — chiếm khối lượng lớn nhất trong kiểm tra vô trùng, được điều chỉnh bởi USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 và JP <4.06>
  • Sản phẩm sinh học, thuốc sinh học tương tự và vắc-xin — các sản phẩm tiêm truyền vô trùng yêu cầu thử nghiệm giải phóng lô nghiêm ngặt theo GMP
  • Thiết bị y tế — thử nghiệm vô trùng được điều chỉnh phù hợp với dạng thiết bị, sử dụng phương pháp chuyển trực tiếp hoặc phương pháp xả sản phẩm
  • Liệu pháp tế bào và gen (CGT) và ATMP — các sản phẩm có thời hạn sử dụng ngắn hoặc cực ngắn, trong đó các phương pháp vi sinh nhanh thường là lựa chọn khả thi duy nhất để đưa ra quyết định phát hành trong ngày hoặc ngày hôm sau
  • Dược phẩm phóng xạ — các sản phẩm có thời gian bán hủy tính bằng giờ, đối với các sản phẩm này, việc ủ truyền thống trong 14 ngày là không khả thi và các phương pháp vi sinh nhanh (RMM) ngày càng được yêu cầu bắt buộc
  • Y học mô và tái tạo — xác nhận vô trùng trước khi cấy ghép hoặc sử dụng"

Quy trình kiểm tra độ vô trùng  

Quy trình thử nghiệm theo tiêu chuẩn truyền thống — lọc màng

Quy trình từng bước sau đây mô tả thử nghiệm vô trùng bằng phương pháp lọc màng được thực hiện theo USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 và JP <4.06>. 

Chuẩn bị thử nghiệm — Lắp ráp thiết bị lọc màng và kết nối ống với bơm thử nghiệm vô trùng trong môi trường được kiểm soát (tủ dòng chảy tầng hoặc buồng cách ly) 

  1. Rửa màng/làm ẩm trước bộ lọc — Làm ẩm trước màng để tối ưu hóa hiệu quả lọc và giảm thiểu sự hấp phụ sản phẩm vào bộ lọc
  2. Lọc mẫu — Lọc lượng sản phẩm bằng nhau vào cả hai bình chứa; vi sinh vật sẽ bị giữ lại trên màng
    lọc 0,45 µm
  3. Rửa — Loại bỏ các hợp chất ức chế bằng dung dịch rửa đã được xác nhận để tránh kết quả
    âm tính giả
  4. Đổ môi trường nuôi cấy — Đổ môi
    trường nuôi cấy vô trùng SCDM (TSB) và FTM vào các thiết bị lọc màng
  5. Ủ — 14 ngày ở 32,5°C (FTM) và 22,5°C (SCDM). Các nhiệt độ này đại diện cho điểm giữa của khoảng nhiệt độ theo Dược điển lần lượt là 30–35°C và 20–25°C, như quy định tại USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 và JP <4.06>
  6. Kiểm tra kết quả — Kiểm tra độ đục bằng mắt thường; bất kỳ độ đục nào cũng phải được điều tra như một khả năng nhiễm
    vi sinh vật
  7. Bản ghi thử nghiệm kỹ thuật số — Việc ghi lại đồng thời và tự động tất cả các bước thử nghiệm, hành động của người vận hành và dữ liệu thiết bị vào một bản ghi điện tử duy nhất, có thể kiểm toán, hỗ trợ việc tuân thủ 21 CFR Phần 11, các nguyên tắc tính toàn vẹn dữ liệu ALCOA++ và sự sẵn sàng cho các cuộc thanh tra theo quy định

Mô tả các bước tuân thủ các yêu cầu của USP <71>, Ph. Eur. 2.6.1 và JP <4.06>. Bước 8 phản ánh các kỳ vọng hiện tại của cơ quan quản lý về tính toàn vẹn dữ liệu theo 21 CFR Phần 11 và Phụ lục 11 của EU, vượt ra ngoài các yêu cầu của dược điển.

Quy trình kiểm tra vô trùng nhanh — Phát quang sinh học ATP

Đối với các sản phẩm có thời hạn sử dụng ngắn — bao gồm liệu pháp tế bào và gen, dược phẩm phóng xạ và các sản phẩm sinh học có thời hạn sử dụng ngắn — thời gian ủ truyền thống 14 ngày thường không phù hợp với tiến độ phát hành sản phẩm. Các Phương pháp Vi sinh Nhanh (RMMs) cung cấp một giải pháp thay thế đã được xác nhận về mặt khoa học và được cơ quan quản lý chấp nhận.

Phương pháp phát quang sinh học ATP là một trong những công nghệ RMM được áp dụng rộng rãi nhất cho thử nghiệm vô trùng. Phương pháp này phát hiện ánh sáng do vi sinh vật còn sống phát ra sau khi phản ứng với chất phản ứng phát quang sinh học, cho phép phát hiện ô nhiễm nhanh chóng, nhạy cảm và định lượng. Chương mới của USP <73> — “Các phương pháp vi sinh dựa trên phát quang sinh học ATP để phát hiện nhiễm bẩn trong các sản phẩm có thời hạn sử dụng ngắn” — cung cấp một khung quy định rõ ràng cho việc áp dụng RMM, có hiệu lực từ tháng 8 năm 2025.

Quy trình kiểm tra vô trùng nhanh bằng phát quang sinh học ATP điển hình diễn ra như sau:

  1. Lọc mẫu — Mẫu được lọc qua một màng chuyên dụng, giữ lại các vi sinh vật còn sống
  2. Áp dụng thuốc thử ATP — Thuốc thử phát quang sinh học được áp dụng lên màng lọc, nhắm vào các tế bào còn sống
  3. Phát hiện và định lượng tự động — Một camera phát hiện có độ nhạy cao ghi lại và định lượng các tín hiệu ánh sáng từ các vi sinh vật còn sống
  4. Có kết quả trong vòng 5 ngày hoặc ít hơn — Cung cấp kết quả nhanh hơn tới 75% so với phương pháp tiêu chuẩn truyền thống kéo dài 14 ngày. Thời gian thực tế để có kết quả phụ thuộc vào phương pháp đã được xác nhận và loại sản phẩm.
  5. Bản ghi thử nghiệm điện tử — Tất cả kết quả được lưu trữ trong bản ghi kỹ thuật số tuân thủ 21 CFR Phần 11 và có thể kiểm toán đầy đủ

Quy trình này dựa trên công nghệ phát quang sinh học ATP như được mô tả trong USP <73>. Bước 5 phản ánh các yêu cầu quy định hiện hành về tính toàn vẹn dữ liệu và lưu trữ hồ sơ điện tử theo 21 CFR Phần 11 và Phụ lục 11 của EU.

Các phương pháp giám sát vi sinh (RMM) sử dụng phát quang sinh học ATP phù hợp cho cả thử nghiệm vô trùng và giám sát tải lượng vi sinh trong quá trình sản xuất, mang lại cho các phòng thí nghiệm một giải pháp linh hoạt, nhanh chóng và tuân thủ trong toàn bộ quy trình sản xuất.

Các bài viết nổi bật
Hướng dẫn bơm kiểm tra khả năng vô trùng Symbio Steritest ®
Các máy bơm và phụ kiện Steritest ® Symbio thân thiện với người dùng được thiết kế để kiểm tra độ vô trùng dễ dàng và đáng tin cậy. Hệ thống cải thiện quy trình làm việc của bạn và tối đa hóa sự an toàn, tự tin và thuận tiện.
Kiểm tra vô trùng lọc màng Steritest ® NEO
Kiểm tra vô trùng là một trong những bước quan trọng nhất trong việc phát hành sản phẩm dược phẩm. Thiết bị kiểm tra vô trùng lọc màng tuân thủ quy định đảm bảo an toàn cho các sản phẩm dược phẩm.
Kiểm tra tính vô trùng Văn hóa Truyền thông & Chất lỏng rửa sạch
Môi trường và chất lỏng thử nghiệm vô trùng của chúng tôi được xây dựng và thử nghiệm để đáp ứng các quy định của EU, Hoa Kỳ và JP Pharmacopeia, đồng thời được cung cấp chứng nhận đầy đủ có chứa thông tin về độ pH, tính vô trùng và khuyến mãi tăng trưởng.
Kiểm tra vô trùng bằng tiêm trực tiếp
Tiêm trực tiếp môi trường nuôi cấy là phương pháp được lựa chọn để kiểm tra tính vô trùng của các mẫu không thể lọc được. Chọn từ các phương tiện kiểm tra tính vô trùng của chúng tôi bao gồm phương tiện tiêu hóa đậu nành (TSB) và chất lỏng Thioglycollate trung bình (tiêu chuẩn FTM và trong suốt).