APAI-RO

Apa I

from Acetobacter pasteurianus

• UNSPSCコード: 12352204

特性

• フォーム: solution
• 包装: pkg of 20,000 U (10703753001 [40 U/μl]); pkg of 5,000 U (10899208001 [10 U/μl])
• メーカー／製品名: Roche
• パラメーター: 30 °C optimum reaction temp.
• 輸送温度: dry ice
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

品質
非特異的エンドヌクレアーゼは存在しません。
1 μg λ × Hind IIIフラグメントを、過剰なApa Iを含む50 μl SuRE/CutバッファーA中で16時間インキュベートします。酵素に特異的なパターンを変更しない酵素のユニット数は、分析認証書に記載されています。

エキソヌクレアーゼ活性は存在しません。
約5 μgの[3H]標識仔牛胸腺DNAを、全量100 μlの50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、1 mMジチオエリスリトール、pH約7.5中、+37°Cで4時間、3 μl Apa Iとともにインキュベートします。これらの条件下では、分析認証書に記載されているように、放射能の放出は検出されません。

適合性末端
Apa I末端は、他の既知の制限酵素によって生成された末端とは適合しません。

アイソシゾマー
Apa Iは、Bsp 120 IおよびPsp OMIのアイソシゾマーです。

メチル化感受性
Apa Iは、認識配列中の (*) で示された部位で5′-メチルシトシンによって阻害されます。

SuRE/Cutバッファーシステム中での活性
太字で表示されているバッファーは、最適な活性を得るのに推奨されるバッファーです。
ABLMH
100%10～25%50～75%50～75%0～10%

完全なPCRミックス中での相対活性
PCRミックス（Taq DNA Polymeraseバッファー）の相対活性は100%です。PCRミックスには、標的DNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH 8.3、+20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl2、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNAポリメラーゼが含まれていました。本ミックスを25回の増幅サイクルに供しました。Pwo SuperYield DNA Polymerase PCR Mixの反応バッファーの活性は10%です。GC-RICH溶液を添加すると、活性は> 100%に増加します。

インキュベーション温度
+30°C

単位の定義
1単位は、全量25 μl SuRE/CutバッファーA中、+30°Cで、1時間に1 μg ? × Hind IIIフラグメントを完全に切断する酵素活性です。

熱失活
本酵素は、+65°Cで15分間インキュベートすることにより、熱失活できます。

異なるDNAでの切断部位の数
λAd2SV40φ X174M13mp7M13mp18pBR322pBR328pUC18
1121000000

ライゲーション、再切断アッセイ
1 μg λ × Hind IIIフラグメントを完全に消化して得られたApa Iフラグメントを、体積10 μl中の1 U T4 DNAリガーゼで、66 mM Tris-HCl、5 mM MgCl2、5 mMジチオトレイトール、1 mM ATP、pH 7.5（+20°C）中、+4°Cで16時間インキュベートしてライゲーションすると、1 μg λ × Hind IIIフラグメントを>95%で回収できます。
引き続きApa Iで再切断すると、λ × Hind III × Apa Iフラグメントの典型的なパターンが>95%で得られます。

Apa Iは、シーケンスGGG*CC?*Cを認識し、3′-付着末端を持つフラグメントを生成します。

特異性

認識部位：GGG*CC*C
GGG*CC*C
制限サイト：GGG*CC↓*C
GGG*CC↓*C
熱不活性化：Apa Iは、65°Cで15分間インキュベートすることで熱不活性化できます。

DNAプロファイル

異なるDNAでの切断部位の数

• λ：1
• φX174：0
• Ad2：12
• M13mp7：0
• pBR322：0
• pBR328：0
• pUC18：0
• SV40：1

単位の定義

1単位は、全量25 μl (1x) SuRE/CutバッファーA中、+30°Cで、1時間に1 μgのλDNA HindIIIフラグメントを完全に切断する酵素活性です。

アナリシスノート

SuRE/Cutバッファーシステム
最適な活性を得るには太字のバッファーが推奨されます

• A：100%
• B：10～25%
• H：0～10%
• L：50～75%
• M：50～75%

PCRバッファーの活性：100%

PCRミックス（Taq DNA Polymeraseバッファー）の相対活性は100%です。PCRミックスには、標的DNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH 8.3、20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl₂、200 μM、2.5 U Taq DNAポリメラーゼが含まれていました。本ミックスを25回の増幅サイクルに供しました。Pwo SuperYield DNA Polymerase PCR Mixの反応バッファーの活性は10%です。GC-RICH溶液を添加すると、活性は> 100%に増加します。Pwo SuperYield DNA Polymerase PCR Mixは、米国では入手できません。

その他情報

生命科学研究専用です。診断的方法には使用できません。

キットの構成要素のみ

• Enzyme Solution
• SuRE/Cut Buffer A 10x concentrated