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由来生物
bacterial (Diplococcus pneumoniae)
品質水準
形状
solution
包装
pkg of 1,000 U (10742988001 [10 U/μl])
pkg of 200 U (10742970001 [10 U/μl])
メーカー／製品名
Roche
パラメーター
37 °C optimum reaction temp.
保管温度
−20°C
詳細
イソ制限酵素
この酵素はBsp143 I、Dpn II、Mbo I、Nde II およびSau3A I に対して機能するイソ制限酵素です。
メチル化の感度
この酵素は、6-メチルアデニンが存在しない場合は、(*)で示すサイトに 5-メチルシトシンが存在するときにだけ阻害されます。
標準的なライゲーションと再切断アッセイ
1μg pBR322 DNAの完全な消化によって得られるDpn I フラグメントを、以下の成分を含む10μl バッファー中で16時間（+4°C）にわたり1U T4 DNAリガーゼと結合させます（バッファー成分：66mM Tris-HCl、5mM MgCl2、5mM ジチオスレイトール、1mM ATP、pH 7.5 @+20°C）。生成物の中で結合が成立して、次段の Dpn Iによる再切断（標準的にはpBR322 × Dpn I というフラグメントパターンが生成）の対象となる割合（パーセント値）が分析証明書の "Lig" と "Rec"の下に記載されています。
この酵素はBsp143 I、Dpn II、Mbo I、Nde II およびSau3A I に対して機能するイソ制限酵素です。
メチル化の感度
この酵素は、6-メチルアデニンが存在しない場合は、(*)で示すサイトに 5-メチルシトシンが存在するときにだけ阻害されます。
標準的なライゲーションと再切断アッセイ
1μg pBR322 DNAの完全な消化によって得られるDpn I フラグメントを、以下の成分を含む10μl バッファー中で16時間（+4°C）にわたり1U T4 DNAリガーゼと結合させます（バッファー成分：66mM Tris-HCl、5mM MgCl2、5mM ジチオスレイトール、1mM ATP、pH 7.5 @+20°C）。生成物の中で結合が成立して、次段の Dpn Iによる再切断（標準的にはpBR322 × Dpn I というフラグメントパターンが生成）の対象となる割合（パーセント値）が分析証明書の "Lig" と "Rec"の下に記載されています。
Dpn Iが活性を持つためにはアデニン残基がメチル化されている必要があるため、消化できるのはN6-メチルアデニンを含むGmATC配列に限られます。このようなメチル化された配列は damメチラーゼによって作り出されます。このメチル化要件によってDpn IをMbo Iから区別することができます。Mbo Iはdamメチル化によって阻害されますが、Sau3A Iはdamメチル化の影響を受けません。Dpn I はまた、認識配列上で開裂を起こす位置がMbo I、Sau3A Iとは異なっています。
特異性
認識サイト：GmAT*C
GmAT*C
制限サイト：GmA↓T*C
GmA↓T*C
熱失活：Dpn I は65 °Cで15分間加熱後も失活しません。
GmAT*C
制限サイト：GmA↓T*C
GmA↓T*C
熱失活：Dpn I は65 °Cで15分間加熱後も失活しません。
アプリケーション
PCR-が仲介する変異誘発において、PCR後のワイルドタイプDNAの消化のために DpnIヌクレアーゼが使用されています。
品質
非特異的エンドヌクレアーゼ活性なし。
1μG のpBR322 DNAを 50μl のSuRE/CutバッファーAに入れ、過剰量のDpn I の存在下で１６時間インキュベートします。酵素に固有なパターンを変化させない酵素ユニット数が分析証明書に明記されています。
エキソヌクレアーゼ活性なし
約5 μg の[3H]標識ウシ胸腺DNAを、全量100 μlの50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、1 mM Dithioerythritol（pH約7.5）中で3μl Dpn I と共に+37°Cで4時間インキュベートします。これらの条件下では、分析証明書に記載されているとおり、放射能の放出は検出されません。
1μG のpBR322 DNAを 50μl のSuRE/CutバッファーAに入れ、過剰量のDpn I の存在下で１６時間インキュベートします。酵素に固有なパターンを変化させない酵素ユニット数が分析証明書に明記されています。
エキソヌクレアーゼ活性なし
約5 μg の[3H]標識ウシ胸腺DNAを、全量100 μlの50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、1 mM Dithioerythritol（pH約7.5）中で3μl Dpn I と共に+37°Cで4時間インキュベートします。これらの条件下では、分析証明書に記載されているとおり、放射能の放出は検出されません。
適合性
Dpn I は、他のどの平滑末端とも適合する平滑末端を持つフラグメントを生成します。
DNAプロファイル
各DNAの切断部位数
- λ：116
- φx174：0
- Ad2：87
- M13mp7：8
- pBR322：22
- pBR328：27
- pUC18：15
- SV40：8
単位の定義
１ユニットは、全量25 μl の(1x) のSuRE/CutバッファーAの中で、+37 °Cの温度において１時間で 1 μg pBR322 DNAを切断できる酵素活性を意味します。pBR322 DNAのDpn I を完全に消化するには完全にメチル化されたGATC配列が必要であるため活動度測定中に <5%の部分消化バンドが観測されることがあります。
アナリシスノート
SuRE/Cut バッファーシステム
活性を最適化するため、太字で記載のバッファーを推奨します
活性を最適化するため、太字で記載のバッファーを推奨します
- A: 100%
- B: 75-100%
- H: 75-100%
- L: 50-75%
- M: 75-100%
PCR バッファー中の活性：100%
PCR mix（taq DNA ポリメラーゼバッファー）中の相対活性は100%。PCR mix は λDNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH 8.3、20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl2、200 μM dNTPs、2.5 U Taq DNA ポリメラーゼを含みます。混合液は 25 サイクルの増幅反応にかけられました。Pwo SuperYield DNA ポリメラーゼ PCR Mix の反応バッファー中の活性は 100%です。Pwo SuperYield DNA ポリメラーゼ PCR Mix は米国では入手できません。
PCR mix（taq DNA ポリメラーゼバッファー）中の相対活性は100%。PCR mix は λDNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH 8.3、20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl2、200 μM dNTPs、2.5 U Taq DNA ポリメラーゼを含みます。混合液は 25 サイクルの増幅反応にかけられました。Pwo SuperYield DNA ポリメラーゼ PCR Mix の反応バッファー中の活性は 100%です。Pwo SuperYield DNA ポリメラーゼ PCR Mix は米国では入手できません。
その他情報
生命科学研究専用です。診断手順には使用しません。
キットの構成要素のみ
製品番号
詳細
- Enzyme Solution
- SuRE/Cut Buffer A 10x concentrated
保管分類コード
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 1
引火点(°F)
does not flash
引火点(℃)
does not flash
試験成績書（COA）
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書（COA） を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。
Yoshiyuki Adachi et al.
Infection and immunity, 72(7), 4159-4171 (2004-06-24)
Dectin 1 is a mammalian cell surface receptor for (1-->3)-beta-d-glucans. Since (1-->3)-beta-d-glucans are commonly present on fungal cell walls, it has been suggested that dectin 1 is important for recognizing fungal invasion. In this study we tried to deduce the
資料
The term “Restriction enzyme” originated from the studies of Enterobacteria phage λ (lambda phage) in the laboratories of Werner Arber and Matthew Meselson.
「制限酵素」という用語は、ヴェルナー・アーバーとマシュー・メセルソンの研究所で行われた腸内細菌ファージλ（ラムダファージ）の研究に由来しています。
関連コンテンツ
Restriction endonucleases in prokaryotes function primarily to protect against foreign genetic material, notably bacteriophage DNA.
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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