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由来生物
Escherichia coli
品質水準
フォーム
solution
包装
pkg of 1,000 U (10674257001 [10 U/μl])
pkg of 20,000 U (10674273001 [10 U/μl])
pkg of 20,000 U (11047663001 [40 U/μl])
pkg of 5,000 U (10674265001 [10 U/μl])
メーカー／製品名
Roche
パラメーター
37 °C optimum reaction temp.
テクニック
DNA sequencing: suitable
保管温度
−20°C
関連するカテゴリー
詳細
Xba Iは、T↓*CTAGA配列を認識し、5'-付着末端を持った断片を生成します。本酵素は、切断部位を切断する前に、ターゲット配列の周囲に少なくとも2つのヌクレオチドを必要とします。
適合する末端
Xba I末端は、Avr I、Nhe I、およびSpe Iによって生成された断片に適合します。
イソ制限酵素
本酵素がイソ制限酵素を持つことは知られていません。
メチル化の感度
DNAのXba I消化は、GATC配列中のアデニンの6N位置をメチル化するE.coliのdam遺伝子産物によって阻害されます。本酵素はまた、認識配列上に示された位置（*）における5-メチルシトシンまたは5-ヒドロキシメチルシトシンによっても阻害されます。
SuRE/Cutバッファー系での活性
太字で示したバッファーは、最適な活性のために推奨されるバッファーです：
A B L M H
100% 75-100% 75-100% 75-100% 100%
コンプリートPCRミックス中での相対活性
PCRミックス（Taq DNAポリメラーゼバッファー）中での相対活性は60%です。PCRミックスには、λDNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH 8.3、+20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl2、200 μM dNTPs、2.5 U Taq DNAポリメラーゼが含まれています。混合物は、25回の増幅サイクルに供しました。Pwo SuperYield DNAポリメラーゼPCRミックスの反応バッファー中での活性は25%です。GC-RICH溶液を添加した場合、活性は100%に上昇します。
インキュベーション温度
+37°C
各DNAの切断部位数
λ Ad2 SV40 ?X174 M13mp7 M13mp18 pBR322 pBR328 pUC18
1 5 0 0 0 1 0 0 1
PFGE試験済み
Xba Iは、パルスフィールドゲル電気泳動（細菌クロモソームでの）において試験済みです。PFGE解析用のアガロース内に埋め込んだゲノムDNA（E. coli C 600）の切断では、1 μgのDNAあたり10 Uの酵素を使用し、約4時間のインキュベーションを行うことを推奨します。
ライゲーションおよび再切断アッセイ
1 μgのpUC18 DNAの完全な消化により得られたXba I断片を、66 mM Tris-HCl、5 mM MgCl2、5 mMジチオスレイトール、1 mM ATP、pH 7.5（＋20℃）において、容量10 μLとして＋4℃で16時間インキュベートし、1 UのT4 DNAリガーゼと連結させると、pUC18 DNAの90%以上が回収されます。
続くXba Iを用いた再切断によって、pUC18 × Xba I断片の95%以上の典型的パターンが得られます。
適合する末端
Xba I末端は、Avr I、Nhe I、およびSpe Iによって生成された断片に適合します。
イソ制限酵素
本酵素がイソ制限酵素を持つことは知られていません。
メチル化の感度
DNAのXba I消化は、GATC配列中のアデニンの6N位置をメチル化するE.coliのdam遺伝子産物によって阻害されます。本酵素はまた、認識配列上に示された位置（*）における5-メチルシトシンまたは5-ヒドロキシメチルシトシンによっても阻害されます。
SuRE/Cutバッファー系での活性
太字で示したバッファーは、最適な活性のために推奨されるバッファーです：
A B L M H
100% 75-100% 75-100% 75-100% 100%
コンプリートPCRミックス中での相対活性
PCRミックス（Taq DNAポリメラーゼバッファー）中での相対活性は60%です。PCRミックスには、λDNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH 8.3、+20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl2、200 μM dNTPs、2.5 U Taq DNAポリメラーゼが含まれています。混合物は、25回の増幅サイクルに供しました。Pwo SuperYield DNAポリメラーゼPCRミックスの反応バッファー中での活性は25%です。GC-RICH溶液を添加した場合、活性は100%に上昇します。
インキュベーション温度
+37°C
各DNAの切断部位数
λ Ad2 SV40 ?X174 M13mp7 M13mp18 pBR322 pBR328 pUC18
1 5 0 0 0 1 0 0 1
PFGE試験済み
Xba Iは、パルスフィールドゲル電気泳動（細菌クロモソームでの）において試験済みです。PFGE解析用のアガロース内に埋め込んだゲノムDNA（E. coli C 600）の切断では、1 μgのDNAあたり10 Uの酵素を使用し、約4時間のインキュベーションを行うことを推奨します。
ライゲーションおよび再切断アッセイ
1 μgのpUC18 DNAの完全な消化により得られたXba I断片を、66 mM Tris-HCl、5 mM MgCl2、5 mMジチオスレイトール、1 mM ATP、pH 7.5（＋20℃）において、容量10 μLとして＋4℃で16時間インキュベートし、1 UのT4 DNAリガーゼと連結させると、pUC18 DNAの90%以上が回収されます。
続くXba Iを用いた再切断によって、pUC18 × Xba I断片の95%以上の典型的パターンが得られます。
特異性
スター活性
Xba Iの配列特異性は、低いイオン強度または、インキュベーション混合物へのグリセロール、エタノール、DMSOの添加によって緩みます。
認識部位：TCTAGA
TCTAGA
制限部位：T↓CTAGA
T↓CTAGA
熱失活：Xba Iは、65℃、15分間のインキュベーションによって熱失活できます（15 U/μg DNAまで）。より高濃度のXba Iでは、この条件下で完全に失活できません。
Xba Iの配列特異性は、低いイオン強度または、インキュベーション混合物へのグリセロール、エタノール、DMSOの添加によって緩みます。
認識部位：TCTAGA
TCTAGA
制限部位：T↓CTAGA
T↓CTAGA
熱失活：Xba Iは、65℃、15分間のインキュベーションによって熱失活できます（15 U/μg DNAまで）。より高濃度のXba Iでは、この条件下で完全に失活できません。
アプリケーション
制限酵素Xba Iは、ゲノムDNAの消化に使用されています。
DNAプロファイル
各DNAの切断部位数
- λ：1
- φX174：0
- Ad2：5
- M13mp7：0
- pBR322：0
- pBR328：0
- pUC18：1
- SV40：0
単位の定義
1ユニットは、総量50 μL（1倍）のSuRE/CutバッファーHにおいて+37℃、1時間で1 μgのλdam–DNAを完全に切断する酵素活性です。
アナリシスノート
SuRE/Cutバッファーシステム
太字で示したバッファーは、最適な活性のために推奨されます
太字で示したバッファーは、最適な活性のために推奨されます
- A：100%
- B：75-100%
- H：100%
- L：75-100%
- M：75-100%
非特異的なエンドヌクレアーゼ活性を含みません
1 μgのλDNAを、50 μLのSuRE/CutバッファーH中で、過剰のXba Iと16時間インキュベーションしました。酵素のユニット数は酵素特異的なパターンを変化させないことが分析証明書内に記載されています。
エキソヌクレアーゼ活性を含みません
約5 μgの[3H]標識ウシ胸腺DNAを、全量100 μLの50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、1 mMジチオスレイトール、pH約7.5の溶液中で、3 μLのXba Iと37℃で4時間インキュベートしました。分析証明書内に記載されている通り、これらの条件下では、放射活性は検出されません。
1 μgのλDNAを、50 μLのSuRE/CutバッファーH中で、過剰のXba Iと16時間インキュベーションしました。酵素のユニット数は酵素特異的なパターンを変化させないことが分析証明書内に記載されています。
エキソヌクレアーゼ活性を含みません
約5 μgの[3H]標識ウシ胸腺DNAを、全量100 μLの50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、1 mMジチオスレイトール、pH約7.5の溶液中で、3 μLのXba Iと37℃で4時間インキュベートしました。分析証明書内に記載されている通り、これらの条件下では、放射活性は検出されません。
PCRバッファー中での活性：60%
PCRミックス（Taq DNAポリメラーゼバッファー）中での相対活性は60%です。PCRミックスには、λDNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH 8.3、20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl2、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNA ポリメラーゼが含まれています。混合物は、25回の増幅サイクルに供しました。Pwo SuperYield DNAポリメラーゼPCRミックスの反応バッファー中での活性は25%です。GC-RICH溶液を添加した場合、活性は100%に上昇します。Pwo SuperYield DNAポリメラーゼPCRミックスは、米国では利用できません。
PCRミックス（Taq DNAポリメラーゼバッファー）中での相対活性は60%です。PCRミックスには、λDNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH 8.3、20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl2、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNA ポリメラーゼが含まれています。混合物は、25回の増幅サイクルに供しました。Pwo SuperYield DNAポリメラーゼPCRミックスの反応バッファー中での活性は25%です。GC-RICH溶液を添加した場合、活性は100%に上昇します。Pwo SuperYield DNAポリメラーゼPCRミックスは、米国では利用できません。
その他情報
ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断用には使用できません。
キットの構成要素のみ
製品番号
詳細
- Enzyme Solution
- SuRE/Cut Buffer H 10x concentrated
保管分類コード
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 1
引火点(°F)
does not flash
引火点(℃)
does not flash
W J M Landman et al.
Avian pathology : journal of the W.V.P.A, 43(4), 345-356 (2014-06-20)
Escherichia coli colonies isolated from the bone marrow of fresh dead hens of laying flocks with the E. coli peritonitis syndrome (EPS) were genotyped using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Typing is important from an epidemiological point of view and also
資料
The term “Restriction enzyme” originated from the studies of Enterobacteria phage λ (lambda phage) in the laboratories of Werner Arber and Matthew Meselson.
「制限酵素」という用語は、ヴェルナー・アーバーとマシュー・メセルソンの研究所で行われた腸内細菌ファージλ（ラムダファージ）の研究に由来しています。
関連コンテンツ
Restriction endonucleases in prokaryotes function primarily to protect against foreign genetic material, notably bacteriophage DNA.
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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