Kapa Biosystems Taq DNA Polymerase และ PCR Kits

ตัวทำปฏิกิริยา PCR พอลิเมอเรสดีเอ็นเอของ Taq และชุดสำหรับการสกัดและการขยายดีเอ็นเอ

การสกัดและการขยาย DNA เป็นขั้นตอนสำคัญในเวิร์กโฟลว์ชีววิทยาโมเลกุลของคุณและมักต้องการดีเอ็นเอที่บริสุทธิ์และมีคุณภาพสูง Kapa Biosystems นำเสนอผลงานที่แข็งแกร่งของดีเอ็นเอโพลิเมอร์รีเอเจนต์และชุด PCR สำหรับการสกัดและขยายความหลากหลายของแมมเมเลียนและวัสดุทางพันธุกรรมจากพืช ด้วยการผสมผสานโพลิเมอร์ที่มีความเสถียรต่ออุณหภูมิที่ปฏิวัติวงการน้ำยาและชุดอุปกรณ์ Kapa Biosystems ของเราได้รับการออกแบบมาเพื่อช่วยให้คุณค้นพบครั้งต่อไปด้วยความไวและความจำเพาะที่ดีขึ้นสำหรับการใช้งานหลายอย่าง

Read more about

• Kapa Taq DNA Polymerase
• KAPA2G มัลติเพล็กซ์รวดเร็ว
• KAPA2G พอลิเมอเรสดีเอ็นเอที่แข็งแกร่ง
• ระบบ PCR ระยะไกลของ Kapa
• คาปาเมาส์จีโนไทก์
• สารสกัดจาก Kapa Express
• ชุด PCR ของโรงงาน KAPA3G

Kapa Taq DNA Polymerase

ที่มีคุณภาพสูงและประสิทธิภาพสำหรับงานประจำ PCR

Kapa Taq DNA Polymeras EIS ใช้โพลิเมอร์ดีเอ็นเอ Taq ชนิดเดียวของแบคทีเรีย Thermophilic Thermamus aquaticus Kapa Taq และ Kapa Taq DNA Polymerase ของ HotStart มีกิจกรรมพอลิเมอเรส 5 ' - 3 ' และ 5 ' - 3 ' exonuclease แต่ไม่มีกิจกรรมการพิสูจน์อักษร exonuclease 3 ' - 5 ' เอนไซม์มีอัตราความผิดพลาดประมาณ 1 ข้อผิดพลาดต่อ 2.2 x 10 5 nucleotides รวม

ชุด Kapa Taq DNA Polymerase เหมาะอย่างยิ่งสำหรับ:

• Standard PCR
• DNA labelling
• DNA sequencing
• การประยุกต์ใช้งานจำนวนมากที่จำเป็นต้องใช้โพลิเมอร์ DNA ที่มีความเสถียรและมีคุณภาพสูง

ประโยชน์ที่ได้รับได้แก่:

• ปรับปรุงความไวความจำเพาะและผลผลิต
• สูตรบัฟเฟอร์ใหม่ช่วยให้การหลอมรองพื้นเฉพาะนำไปสู่ผลผลิตที่สูงขึ้นของผลิตภัณฑ์เฉพาะ

รูปที่ 1 ส่วน 500 bp ของยีน CCR5 ถูกขยายโดยใช้ 100 ng, 10 ng, 1 ng หรือ 100 pg ของ DNA จีโนมิกของมนุษย์เป็นแม่แบบ Kapa Taq HotStart แสดงให้เห็นถึงความไวความจำเพาะและผลผลิตที่ดีขึ้นเมื่อเทียบกับผลิตภัณฑ์ HotStart ที่แข่งขันได้ ปฏิกิริยาทั้งหมดดำเนินการโดยใช้โปรโตคอลที่ผู้ผลิตแนะนำ

รูปที่ 2 แอมพลิฟายเออร์ 270 bp ถูกขยายจากดีเอ็นเอ mycoplasma ด้วย Kapa Taq หรือ Kapa Taq HotStart ความไวแสงได้รับการทดสอบโดยใช้ชุดการเจือจางเทมเพลต 10 เท่าโดยเริ่มต้นด้วยดีเอ็นเอ 1 นาโนกรัม

KAPA2G มัลติเพล็กซ์อย่างรวดเร็ว

PCR มัลติเพล็กซ์ความเร็วสูงประสิทธิภาพสูง

KAPA2G Fast Multiplex PCR Kit ประกอบด้วยเอนไซม์รุ่นที่ 2 (GG) ที่ได้จากกระบวนการวิวัฒนาการโดยตรง KAPA2G Fast HotStart DNA Polymerase เป็นสูตรเริ่มต้นที่มีแอนติบอดีซึ่งออกแบบมาเพื่อการประมวลผลและความเร็วที่สูงขึ้นทำให้อัตราการขยายตัวเร็วกว่าโพลิเมอร์ดีเอ็นเอ Taq ชนิดป่า นอกเหนือจากความเร็วแล้ว KAPA2G Fast ยังให้ผลผลิตและความไวสูงกว่าเอนไซม์คู่แข่งสำหรับ PCR ที่มีการคูณสูง *

KAPA2G มัลติเพล็กซ์รวดเร็วให้:

• การแสดงแอมพลิฟายเออร์ทั้งหมดอย่างสม่ำเสมอ
• PCR มัลติเพล็กซ์ที่ประสบความสำเร็จด้วยเป้าหมายที่ยากและอุดมไปด้วย GC
• ลดเวลาในการขี่จักรยาน PCR ได้ถึง 60%
• เวลาในการต่อขยายต่ำสุด 15 วินาที
• ความเร็วสูงโดยไม่ลดทอนประสิทธิภาพ
• การเพิ่มประสิทธิภาพขั้นต่ำด้วยสูตรผสมหลัก

รูปที่ 3 * PCR แบบมัลติเพล็กซ์ (8 เท่า) ที่ดำเนินการด้วยชุด PCR แบบมัลติเพล็กซ์เร็ว KAPA2G, คู่แข่ง Q, และคู่แข่ง I. ปฏิกิริยา (1 μL) มีส่วนผสมหลัก PCR 25 เท่า (Kapa และคู่แข่ง Q) หรือบัฟเฟอร์ PCR 1 1 เท่า, MgCl2 3 มม., 0.2 มม. ของ dNTP แต่ละตัวและ 1 U ของการเริ่มต้นร้อน Taq DNA Polymerase (รีเอเจนต์มัลติเพล็กซ์แบบชงเองกับคู่แข่ง I) DNA จีโนมิกของมนุษย์ถูกใช้เป็นเทมเพลต (250 – 2 นาโนกรัมต่อปฏิกิริยา) และไพรเมอร์ได้รับการจัดหาที่ 0.2 μM ต่อเซลล์ การขี่จักรยานดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิต (รอบ 30 รอบ)

รูปที่ 4 * Multiplex PCR (12 เท่า) ที่ดำเนินการกับชุด KAPA2G อย่างรวดเร็ว Multiplex PCR, คู่แข่ง Q และคู่แข่ง I. บรรลุการเป็นตัวแทนที่สม่ำเสมอของแอมพลิฟายเออร์ทั้งหมดในการทดสอบมัลติเพล็กซ์ที่ซับซ้อนเป็นความท้าทายเนื่องจากอคติการขยาย - ผลของความแตกต่างในความยาวของแอมพลิฟายเออร์โครงสร้างรองและประสิทธิภาพการรองพื้น ปฏิกิริยา (1 มม.) มีส่วนผสมหลัก PCR 1 เท่า (Kapa และคู่แข่ง Q) หรือบัฟเฟอร์ PCR 1 เท่า, MgCl2 3 มม., 0.2 มม. ของ dNTP แต่ละตัวและโพลิเมอร์ดีเอ็นเอ Taq DNA แบบฮ็อตสตาร์ท 25 U (รีเอเจนต์แบบมัลติเพล็กซ์ชงที่บ้านที่มีคู่แข่ง I) μL วน 1 ตัว DNA จีโนมิกของมนุษย์ถูกใช้เป็นเทมเพลต (250 – 2 นาโนกรัมต่อปฏิกิริยา) และไพรเมอร์ได้รับการจัดหาที่ 0.2 μM ต่อเซลล์ การขี่จักรยานดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิต (รอบ 30 รอบ)

รูปที่ 5 PCR แบบมัลติเพล็กซ์อย่างรวดเร็วพร้อมชุด PCR แบบมัลติเพล็กซ์อย่างรวดเร็ว KAPA2G Multiplex PCR กับป่าชนิด Taq มักจะต้องมีการหลอมยาวและขยายเวลาเพื่อให้ไพรเมอร์หลอมและขยายตัวของไพรเมอร์ทั้งหมดใน multiplex แสดงเวลาการขี่จักรยาน PCR ทั้งหมดที่จำเป็นสำหรับ PCR แบบมัลติเพล็กซ์ 4 เท่า 8 เท่าและ 12 เท่า (รอบ 30 รอบตามคำแนะนำของผู้ผลิต) พร้อมชุด PCR แบบมัลติเพล็กซ์ KAPA2G และชุด PCR แบบมัลติเพล็กซ์ Q ของคู่แข่ง (ซึ่งมีโพลิเมอร์ดีเอ็นเอชนิด Taq แบบ Wildtype) สามารถประหยัดเวลาได้ถึง 40 – 60% ด้วยชุด PCR KAPA2G Fast Multiplex

รูปที่ 6 GC อุดมไปด้วย Multiplex PCR (6 เท่า) ดำเนินการกับ KAPA2G เร็ว Multiplex PCR ชุด, คู่แข่ง Q และคู่แข่ง I. ประสบความสำเร็จ Multiplex PCR กับป่าชนิด Taq ถูกจำกัดให้ง่ายเป้าหมายง่ายที่สามารถขยายได้อย่างมีประสิทธิภาพเท่ากัน. การประมวลผลที่ดีขึ้นของ KAPA2G Fast DNA Polymerase ที่ได้รับการออกแบบทางวิศวกรรมช่วยให้ PCR แบบ multiplex สม่ำเสมอของเป้าหมายที่ยากหลากหลาย ปฏิกิริยา (1 มม.) มีส่วนผสมหลัก PCR 1 เท่า (Kapa และคู่แข่ง Q) หรือบัฟเฟอร์ PCR 1 1 เท่า, MgCl2 3 มม., 0.2 มม. ของ dNTP แต่ละตัวและ 25 U ของสารตั้งต้น Taq DNA Polymerase ร้อน (ตัว μL ปฏิกิริยามัลติเพล็กซ์ชงที่บ้านกับคู่แข่ง I) DNA จีโนมิกของมนุษย์ถูกใช้เป็นเทมเพลต (250 – 2 นาโนกรัมต่อปฏิกิริยา) และไพรเมอร์ได้รับการจัดหาที่ 0.2 μM ต่อเซลล์ DMSO (ร้อยละ 5) และ Kapa Enhancer 1 (ร้อยละ 1) ถูกเพิ่มเข้าไปในปฏิกิริยาทั้งหมด การขี่จักรยานดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิต (รอบ 30 รอบ) ช่วงแอมพลิฟายเออร์มีตั้งแต่ 241 – 642 8 bp และในเนื้อหา GC ตั้งแต่ 72.7 – 83%

KAPA2G พอลิเมอเรส DNA ที่แข็งแกร่ง

KAPA2G DNA Polymeras EWA ที่แข็งแกร่งพัฒนาขึ้นเพื่อแก้ปัญหาการขยายสัญญาณที่ไม่สม่ำเสมอในประเภทแอมพลิฟายเออร์ที่หลากหลาย (GC- และที่อุดมไปด้วย) ผลิตภัณฑ์นี้ช่วยให้มีกระบวนการและกิจกรรมเฉพาะที่สูงขึ้นซึ่งแปลว่าประสิทธิภาพ PCR ที่แข็งแกร่งความไวสูงและความทนทานต่อสารยับยั้งทั่วไปที่ดีขึ้น ชุดเครื่องมือประสิทธิภาพสูงนี้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการใช้งาน PCR ที่ท้าทายและตัวอย่างที่ยากช่วยขจัดความจำเป็นในการเพิ่มประสิทธิภาพโดยใช้เอนไซม์และโปรโตคอลหลายตัว

KAPA2G Polymerase ดีเอ็นเอที่แข็งแกร่งให้:

• การใช้งานที่ต้องการผลผลิตสูงขึ้นต่อเอนไซม์หน่วย
• โคโลนี PCR
• ความอดทนต่อการยับยั้งการยกตัวและ PCR ตัวอย่างน้ำมันดิบ (เช่น FFPE)
• PCR ประจำโดยใช้สูตร HotStart หรือ Readymix

การขยายที่มีประสิทธิภาพของเป้าหมาย GC และ AT ที่อุดมไปด้วย:

• ประสิทธิภาพที่แข็งแกร่งในเทมเพลต GC และ AT ที่หลากหลาย
• เพิ่มอัตราความสำเร็จของ PCR

รูปที่ 7 ครึ่งหนึ่งของผลิตภัณฑ์ PCR ที่ได้รับจากชุดไพรเมอร์ 72 จาก 96 ชุดที่ใช้ในการศึกษานี้ถูกอิเล็กโตรโฟเรชในเจล TBE-agarose ร้อยละ 1 มีการโหลดแอมพลิฟายเออร์เพื่อเพิ่มคอนเทนต์ GC โดยมีคอนเทนต์ GC ต่ำสุด (สีฟ้า 27 เปอร์เซ็นต์) ที่ด้านบนซ้ายและคอนเทนต์ GC สูงสุด (สีแดง 84 เปอร์เซ็นต์) ที่ด้านล่างขวามือของภาพคอมโพสิตเจลแต่ละภาพ ไพรเมอร์ที่เลือกสำหรับการศึกษานี้มีความยาวไพรเมอร์ที่แตกต่างกันองค์ประกอบลำดับอุณหภูมิหลอมละลายทางทฤษฎีและคุณสมบัติการออกแบบอื่นๆ ไพรเมอร์บางตัวมี 5 ฟุตหางสำหรับการเรียงลำดับหลัง PCR โดยใช้ M13 หรือไพรเมอร์การจัดลำดับมาตรฐานอื่นๆ A. ปฏิกิริยา ReadyMix ของ HotStart ที่มีประสิทธิภาพของ KAPA2G (ขนาด 25 μ μL ตามที่ระบุไว้ในคู่มือผู้ใช้ B. ปฏิกิริยา Taq แบบอิสระ (ความเข้มข้น 25 ไมโครลิตรที่มี 0.5 U Taq ต่อปฏิกิริยา) μL เนินการในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา Taq (ความเข้มข้น MgCl2 1.5 มม. ที่ 1 เท่า) โดยใช้ไพรเมอร์สุดท้ายและความเข้มข้น dNTP เดียวกับความเข้มข้นของ KAPA2G ที่แข็งแกร่ง

ปฏิกิริยาทั้งหมดมี DNA จีโนมิกของมนุษย์ 25 นาโนกรัม 5 DMSO % ถูกรวมอยู่ในทุกปฏิกิริยา (KAPA2G Robust และ Taq) กำหนดเป้าหมายแอมพลิฟายเออร์ที่มีเนื้อหา GC > 70%

เพิ่มความทนทานต่อสารยับยั้ง PCR ทั่วไป

• การขยายตัวอย่างที่มีประสิทธิภาพจากตัวอย่างดิบ
• ผลผลิตและความไวต่อเอนไซม์ที่สูงขึ้นต่อหน่วย

รูปที่ 8 การขยายส่วน 1.5 kb จากดีเอ็นเอ plasmid 1 pg ในที่ที่มีสารยับยั้ง PCR ทั่วไปสี่ตัวโดยใช้ชุด PCR HotStart ที่มีประสิทธิภาพของ KAPA2G และโพลิเมอร์ Taq แบบ Hot Start แบบ wild ปฏิกิริยาทั้งหมดมีเอนไซม์ 0.5 หน่วยต่อปฏิกิริยา 25 μL ใช้บัฟเฟอร์ HotStart B ที่มีประสิทธิภาพของ KAPA2G ตลอดทั้งตัวโดยมีการเพิ่ม KAPAEnhancer 1 สำหรับปฏิกิริยาที่มี SDS การปั่นจักรยานได้รับการดำเนินการด้วย Eppendorf Mastercycler epgradient S โดยใช้โปรไฟล์การปั่นจักรยาน 3 ขั้นตอนมาตรฐาน (รอบ 35 รอบ) ที่มีอุณหภูมิหลอม 64 º C และเวลาต่อขยาย 1.5 นาทีต่อรอบสำหรับเอนไซม์ทั้งหมด

ประสิทธิภาพที่เหนือกว่าใน PCR อาณานิคม

• ผลผลิตที่สูงขึ้นและความสม่ำเสมอที่ดีขึ้นของ PCR โดยตรงจาก E. coli และเซลล์ยีสต์

รูปที่ 9 การขยายตัวของเม็ดมีด 2.7 kb ที่โคลนจากสายพันธุ์ E. coli ที่ใช้กันทั่วไปสี่สาย (DH5A, DH10B, JM109 หรือ BL21) โดยใช้ KAPA2G ทนทาน HotStart (บน) หรือ Wildtype Taq (ล่าง) อาณานิคม (ที่ปลูกบนเพลท LB-AGAR + แอมป์) ถูกนำกลับมาใช้ใหม่โดยตรงในปฏิกิริยา PCR แต่ละครั้ง (ซ้าย) หรือถูกนำกลับมาใช้ใหม่ครั้งแรกในน้ำเกรด PCR จากนั้นจึงเพิ่มลงในส่วนผสมของปฏิกิริยา PCR (กลาง) สำหรับการเพาะเชื้อข้ามคืน (เตรียมไว้ในหน่วยปอนด์ + แอมป์) จะมีการเพิ่ม 1 μ L ลงในส่วนผสม PCR โดยตรง (ขวา)

รูปที่ 10 การขยายของชิ้นส่วน 2.5 kb (ซ้าย) หรือ 1.6 kb (ขวา) จากยีน GSH1 จากสายพันธุ์ S. cerevisiae ที่ใช้กันทั่วไปสามสาย (BY4742, FY23 และ W303) โดยใช้ KAPA2G Robust HotStart (บน) หรือ Wildtype Taq (ล่าง) อาณานิคม (จากแผ่น YPD-agar) หรือวัฒนธรรมค้างคืน YPD ได้รับการปรับแต่งเป็นครั้งแรกในปริมาณ 50 μ L ด้วย NaOH หรือ Zymolase (ตามที่ระบุ)

ระบบ PCR ระยะไกลของ Kapa

 Kapa Long Range PCR syste ผสมผสานระหว่างโพลิเมอร์ดีเอ็นเอของ Taq และโพลิเมอร์ดีเอ็นเออาร์ชีล (ตระกูล B) ที่มีความสามารถในการพิสูจน์อักษร ระบบสองเอนไซม์นี้ได้รับการออกแบบมาโดยเฉพาะเพื่อรองรับ PCR ระยะไกลและ/หรือที่ละเอียดอ่อนและมีความเที่ยงตรงสูงกว่า Taq polymerase 3 – 4 เท่า ในสูตร Hotstart Kapa Long Range จะรวมกับแอนติบอดีที่เป็นกรรมสิทธิ์ซึ่งจะยับยั้งเอนไซม์จนกว่าจะถึงขั้นตอนการลดความอิ่มตัวครั้งแรกกำจัดผลิตภัณฑ์ขยายตัวที่น่ากลัวและเพิ่มประสิทธิภาพและความไวของปฏิกิริยา

ชุด PCR ระยะไกลของ Kapa เหมาะอย่างยิ่งสำหรับ:

• การขยาย PCR ของเป้าหมายที่ยาวและ/หรือ PCR โดยใช้ดีเอ็นเอเทมเพลตในปริมาณต่ำ
• การขยาย PCR ระยะสั้นและช่วงกลางมาตรฐาน
• การผลิตผลิตภัณฑ์ PCR ที่จะใช้สำหรับ ligation เป็นเวกเตอร์โคลน 3 '-T-overhang

ประโยชน์ที่ได้รับได้แก่:

• การขยายชิ้นงานที่มีความไวและความจำเพาะสูงถึง 15 kb
• ให้ผลผลิตสูงด้วย DNA อินพุตต่ำ
• แสดงให้เห็นถึงผลผลิตสูงความไวที่สูงขึ้นและความจำเพาะที่ระบบระยะไกลของคู่แข่งล้มเหลว *

รูปที่ 11 การขยายตัวอย่างของการเจือจางเทมเพลตของดีเอ็นเอจีโนมิกของมนุษย์เริ่มต้นด้วย 50 นาโนกรัม, 10 นาโนกรัม, 2 นาโนกรัม, 400 น. ต่อ 25 μL แอมพลิฟายเออร์มีความยาว 737 bp, 1.3 kb, 3.3 kb และ 4.5 kb 35 รอบ, อุณหภูมิต่อขยาย 72 º C

รูปที่ 12 การขยายตัวอย่างของการเจือจางเทมเพลตของดีเอ็นเอจีโนมิกของมนุษย์เริ่มต้นด้วย 50 นาโนกรัม, 10 นาโนกรัม, 2 นาโนกรัม, 400 น. ต่อ 25 μL แอมพลิฟายเออร์มีความยาว 7.5 kb, 10.5 kb, 13 kb และ 15 kb 35 รอบ, อุณหภูมิต่อขยาย 68 º C

รูปที่ 13 * การขยายตัวของชิ้นส่วน 4.5 kb จาก 50 ng, 10 ng, 2 ng, และ 400 pg ของ DNA จีโนมิกของมนุษย์ต่อปฏิกิริยา 25 μL เลน: (ม.) เครื่องหมาย, (ปี 1 – 4) Kapa Long Range HotStart, (ปี 5 – 8) คู่แข่ง T, (ปี 13 – 16) คู่แข่ง..

กาปาเมาส์ genotyping

เปลี่ยนจากหางเป็นพิมพ์ใน 1 ชั่วโมง

Kapa Mouse Genotyping Kit Sare ออกแบบมาสำหรับการสกัดและขยายชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่เชื่อถือได้จากเนื้อเยื่อของเมาส์ในเวลาเพียง 1 ชั่วโมงเมื่อเทียบกับ ≥1 วันด้วยโปรโตคอลทั่วไป ชุดประกอบด้วยสารสกัดจาก Kapa Express ซึ่งเป็นระบบป้องกันความร้อนและบัฟเฟอร์แบบใหม่ที่ช่วยให้สามารถสกัดดีเอ็นเอที่พร้อมสำหรับ PCR จากเนื้อเยื่อของเมาส์ได้ภายในเวลาเพียง 15 นาที และ KAPA2G Fast Genotyping Mix ที่มีสีย้อมซึ่งมี DNA พอลิเมอเรสที่ออกแบบผ่านวิวัฒนาการโดยตรงเพื่อการประมวลผลสูงและความเร็วสูง

ชุดอุปกรณ์ Genotyping ของ Kapa Mouse ให้:

• การสกัด 15 นาทีช่วยขจัดตัวทำละลายอินทรีย์ pH เป็นกลางและการปั่นเหวี่ยง
• การขยายสัญญาณ 45 นาทีด้วยความเร็วในการประมวลผลสูงและความเร็วสูง
• รูปแบบการผสมหลักที่สะดวกด้วยการใส่สีย้อมทั้งในสูตรเริ่มต้นร้อนและสูตรเริ่มต้นที่ไม่ร้อน

ดีกว่าวิธีการสกัดน้ำมันดิบและชุดเชิงพาณิชย์

• เวลาตอบสนองและความจำเพาะที่เพิ่มขึ้น
• Decreased cost

รูปที่ 14 และ 15 เมื่อเทียบกับชุดทดสอบ Genotyping ของ Quanta Mouse ชุดทดสอบ Genotyping ของ Kapa Mouse แสดงความไวผลผลิตและความจำเพาะที่ดีขึ้นใน PCR แบบ multiplex ปฏิกิริยาได้รับการดำเนินการด้วยการอบอ่อนที่อุณหภูมิ 50°C หรือ 60°C เพื่อแสดงให้เห็นถึงผลกระทบของการใช้อุณหภูมิการอบอ่อนที่เหมาะสมที่สุดในการทดสอบการทำ genotyping

เพิ่มความเร็วรอบเวลาและความน่าเชื่อถือ

• ดีเอ็นเอที่พร้อมใช้งานแบบ PCR สร้างขึ้นในเวลาเพียง 15 นาที
• การจัดการน้อยที่สุดจึงช่วยลดความเสี่ยงของการสูญเสียตัวอย่างหรือการปนเปื้อน
• เทมเพลตที่เพียงพอสำหรับการวิเคราะห์หลายครั้งปรับขนาดได้ง่ายเพื่อจัดการกับตัวอย่างในรูปแบบ 96 หลุม
• Fast and reliable amplification of DNA fragments across a wide range of amplicon lengths and GC contents

รูปที่ 16 และ 17 a) เวลารวมที่ต้องใช้ในการสกัดและขยายดีเอ็นเอถูกเปรียบเทียบโดยใช้ชุด Genotyping Kapa Mouse Proteinase K และ Taq แบบป่าและการสลายอัลคาไลน์และ Taq แบบป่า b) ผลลัพธ์ของแอมพลิฟายเออร์ 312 2 ตัว (1 – 915 bp) ที่สร้างขึ้นด้วยชุดเครื่องมือวัดความยาวเมาส์ Kapa Mouse Genotyping Kit (2) ถูกเปรียบเทียบกับแอมพลิจูดที่ได้รับด้วยวิธีการที่ใช้กันทั่วไป 1 วิธี (2 และ 3 วิธี) ด้วย Kapa Mouse Genotyping Kit ทำให้ดีเอ็นเอไลส์ได้รับการเตรียมจากหางเมาส์ด้วยระบบ Kapa Express Extract แบบหลอดเดียว (ใช้เวลา 15 นาที) การขยายด้วย KAPA2G Fast HotStart ReadyMix พร้อมสีย้อมเสร็จสมบูรณ์ใน 45 นาที ในทางตรงกันข้าม DNA lysates ได้รับการจัดเตรียมด้วยโปรโตคอล Proteinase K 3.5 ชั่วโมง (2 ชั่วโมง) หรือวิธีสลายอัลคาไลน์อย่างรวดเร็ว (2.5 ชั่วโมง) (3 ชั่วโมง) ในทั้งสองกรณีจะมีการขยายด้วย Taq แบบ wild (โปรโตคอลการขี่จักรยาน 1.5 ชม.) ผลลัพธ์ที่ได้จากชุดเครื่องมือวัด Genotyping ของ Kapa Mouse มีค่าเท่ากับหรือดีกว่า (เฉพาะเจาะจงมากกว่า) ที่ได้จากวิธีการอื่นซึ่ง (ขึ้นอยู่กับโปรโตคอลการแยกดีเอ็นเอที่ใช้) อาจใช้เวลาอย่างน้อยสี่ครั้งหรือนานถึง 1 วันจึงจะเสร็จสมบูรณ์

สารสกัดจาก Kapa Express

การสกัดดีเอ็นเอที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพ

Kapa Express extrac tis เป็นระบบ protease และบัฟเฟอร์ที่มีความร้อนสูงซึ่งช่วยให้สามารถสกัดดีเอ็นเอที่พร้อมสำหรับ PCR ได้ภายในเวลาเพียง 15 นาที การสกัดดีเอ็นเอทำได้อย่างสะดวกในหลอดเดียวช่วยลดความเสี่ยงของการสูญเสียตัวอย่างและการปนเปื้อนได้อย่างมาก การรวมกันของสารสกัดจาก Kapa Express และ KAPA2G ที่แข็งแกร่ง HotStart ReadyMix ให้โซลูชันที่มีประสิทธิภาพสูงสำหรับการสกัดดีเอ็นเออย่างรวดเร็วและการขยายตัวต่อเนื่องที่สอดคล้องกัน

สารสกัดจาก Kapa Express ให้:

• โปรโตคอลการสกัดอย่างรวดเร็วด้วยดีเอ็นเอที่พร้อมใช้งานแบบ PCR ใน 15 นาทีเพื่อการขยายตัวอย่างที่ท้าทายอย่างต่อเนื่อง
• ชุดอุปกรณ์อเนกประสงค์ที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมสำหรับการสกัดดีเอ็นเอที่ประสบความสำเร็จจากตัวอย่างและเนื้อเยื่อหลากหลายประเภทรวมถึง swabs buccal, รูขุมขน, เนื้อเยื่อปลาและขนนก
• ปฏิกิริยาแบบหลอดเดียวช่วยลดความเสี่ยงต่อการปนเปื้อน
• การสกัดที่มีประสิทธิภาพจากการ์ด“Guthrie”, การ์ด FTA ® Elute และการ์ด FTA

รูปที่ 18 และ 19 ดีเอ็นเอถูกสกัดด้วยสารสกัดจาก Kapa Express จากตัวอย่างต่างๆที่ได้จากสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและปลา จากสารสกัดแต่ละชนิดมีการใช้สารสกัด 2 μ s โดยตรง (ไม่มีปริมาณ) ใน PCR ที่มี KAPA2G Robust HotStart ReadyMix และไพรเมอร์ μL รับไซโตโครเมียมประมาณ 650 bp c oxidase I ชิ้นส่วนยีนที่ใช้กันทั่วไปในการระบุชนิด (Ivanova, et al., 2007 ผลิตภัณฑ์ PCR (ขนาด 10 μ μL ได้รับการวิเคราะห์ในเจล agarose ร้อยละ 1 ที่มาและประเภทของตัวอย่างจะแสดงอยู่เหนือเจล ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาถูก μL มาใช้โดยตรงในปฏิกิริยาการจัดลำดับความโกรธมาตรฐานโดยใช้ไพรเมอร์ M13 ที่ซ้อนกัน (ผลิตภัณฑ์ PCR 2 μ m ต่อปฏิกิริยาการจัด μL ดับ 10 μ m) ข้อมูลลำดับมีคุณภาพสูงและสามารถระบุแต่ละชนิดได้ ส่วนของการติดตามลำดับจากเนื้อเยื่อ Seriola lalandi (Yellowtail amberjack) จะแสดงในแผงด้านล่าง

รูปที่ 20 สารสกัดจากดีเอ็นเอได้รับการเตรียมจากสองตัวอย่าง FFPE ที่แตกต่างกันโดยใช้สารสกัดจาก Kapa Express สารสกัดแต่ละชนิดถูกนำมาใช้โดยตรง (ไม่มีการวัดปริมาณ) ใน PCRs หลายตัวที่มี KAPA2G Rusted HotStart ReadyMix และไพรเมอร์สำหรับชิ้นส่วนที่แตกต่างกัน 293 ชิ้น (180 bp - 1 kb) ของยีน EGFR (สอดคล้องกับ EXONS 18 - 21 และ 24 ผลลัพธ์ถูกเปรียบเทียบกับผลลัพธ์ที่ได้โดยใช้ปฏิกิริยาและสภาพการขี่จักรยานเดียวกันแต่ใช้ DNA จีโนมิกของมนุษย์บริสุทธิ์ 1 ng เป็นเทมเพลต ด้วยข้อยกเว้นของ 1 kb exon 24 ส่วนจากตัวอย่างเก่าอัตราผลตอบแทนและประสิทธิภาพการเกิดปฏิกิริยาถูกเปรียบเทียบระหว่างสารสกัดจากดีเอ็นเอ FFPE และดีเอ็นเอจีโนมิกบริสุทธิ์ ผลิตภัณฑ์ PCR ที่สร้างขึ้นจากตัวอย่างที่ 1 ถูกเจือจาง 1:10 และใช้โดยตรงในปฏิกิริยาการจัดลำดับความโกรธมาตรฐาน ข้อมูลลำดับ (แผงด้านล่างตัวอย่าง 1 exon 19 ส่วน) มีคุณภาพสูง ลำดับผสมเริ่มต้นที่ตำแหน่งที่มีลูกศรระบุยืนยันว่ามีการลบ 15 NT ที่เกี่ยวข้องกับมะเร็งเซลล์ที่ไม่ใช่เซลล์ขนาดเล็กที่ได้รับการวินิจฉัยในผู้ป่วยที่เก็บตัวอย่าง 1

รูปที่ 21 การสกัดและการขยายตัวของดีเอ็นเอจากประเภทตัวอย่างเลือดที่แตกต่างกันสำหรับการตรวจสอบของ HLA-B * 27 allele ดีเอ็นเอถูกสกัดจากตัวอย่างเลือด EDTA ของมนุษย์ 12 ตัวอย่างด้วยสารสกัดจาก Kapa Express (แผงด้านบน) 2 μL ของสารสกัดแต่ละชนิดถูกเพิ่มลงใน PCR ขนาด 25 μL ที่มีส่วนผสมของ KAPA2G HotStart ReadyMix ที่ทนทานและชุดไพรเมอร์สองชุด ไพรเมอร์ควบคุมภายในตั้งเป้าหมายส่วน 429 bp ของยีนเบต้า globin ในขณะที่ไพรเมอร์ตัวที่สองตั้งเป้าหมายส่วน 141 bp ของ HLA-B * 27 locus ในลักษณะเฉพาะลำดับ บุคคลสองใน 12 คนได้รับการทดสอบในเชิงบวกสำหรับ HLA-B * 27 allele ที่เกี่ยวข้องกับโรคข้อกระดูกสันหลังอักเสบ Ankylosing เลน C- และ C+ แสดงถึงการควบคุมเชิงลบและบวก HLA-B * 27 ตามลำดับ (ดีเอ็นเอจีโนมิกของมนุษย์บริสุทธิ์ 1 Ng เป็นแม่แบบ) ดีเอ็นเอถูกสกัดจากการ์ด“Guthrie”, การ์ดเขตการค้าเสรีหรือการ์ดวงรี FTA (แผงด้านล่าง) พบกับเลือดของบุคคลที่ได้รับการยืนยันว่าเป็น HLA-B * 27 บวก (+) หรือลบ (-) เงื่อนไขและการควบคุมการแยกและการขยายดีเอ็นเอ (C และ C +) เหมือนกับแผงด้านบน

ชุด PCR ของโรงงาน KAPA3G

ชุดตรวจ PCR ของโรงงาน KAPA3G ออกแบบมาเพื่อใช้ DNA บริสุทธิ์หรือ DNA ที่สกัดจากน้ำมันดิบสำหรับ PCR ของ DNA ที่ได้มาจากพืช ชุดประกอบด้วยพอลิเมอเรสดีเอ็นเอ KAPA3G ซึ่งออกแบบมาเพื่อเพิ่มความทนทานต่อสารยับยั้ง PCR ที่ได้จากพืชทั่วไปเช่นโพลีฟีนและโพลีแซคคาไรด์

ชุด PCR โรงงาน KAPA3G ให้:

• PCR ได้อย่างรวดเร็วโดยตรงจากเนื้อเยื่อพืชเช่นแผ่นใบเมล็ดและสารสกัดจากพืชดิบ
• ขั้นตอนการทำงานที่มีประสิทธิภาพสำหรับการคัดกรองที่ทำให้เกิดการ
• ปรับปรุงอัตราความสำเร็จของ PCR และความสามารถในการทำซ้ำ

เพิ่มประสิทธิภาพเวิร์กโฟลว์และปรับปรุงเวลาตอบสนอง

• ทำ PCR ในช่วงครึ่งเวลาเมื่อเทียบกับเอนไซม์ประเภทสัตว์ป่า
• ขจัดความจำเป็นในการแยกดีเอ็นเอที่ใช้เวลานาน
• เหมาะสำหรับ PCR โดยตรง

รูปที่ 22 PCR โดยตรงที่ใช้ชุด PCR ของโรงงาน KAPA3G มีประสิทธิภาพเหนือกว่าการสกัด CTAB และ PCR มาตรฐานที่ใช้ Taq แบบเถื่อนในเวลาตอบสนองที่สั้นลงอย่างมาก

ขยายเป้าหมายระยะยาวจากตัวอย่างดิบและดีเอ็นเอบริสุทธิ์

• ขยายชิ้นส่วนได้ถึง 5 kb
• ผลผลิตสูงและความจำเพาะ

รูปที่ 23 อาร์เจทที่มีความยาวแตกต่างกัน (297 bp และ 4100 bp จากยาสูบ 640 bp จากมะเขือเทศ 1221 bp จากองุ่นและ 1448 bp และ 2249 bp จากมันฝรั่ง) ถูกขยายจากดีเอ็นเอบริสุทธิ์ (+) หรือแผ่นใบ (L) โดยใช้ชุด PCR ของโรงงาน KAPA3G สำหรับแต่ละสายพันธุ์ดีเอ็นเอจีโนมิกได้รับการทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ชุดทำความสะอาดดีเอ็นเอเชิงพาณิชย์ ตัวอย่างวัตถุดิบโดยใช้เครื่องมือเก็บตัวอย่าง Harris Uni-Core ™เส้นผ่านศูนย์กลาง 0.5 มม. ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ (1 – 10 นาโนกรัมต่อปฏิกิริยาขึ้นอยู่กับสายพันธุ์) และตัวอย่างน้ำมันดิบถูกใช้เป็นเทมเพลตใน 50 μL PCR โดยมีการขยาย 40 รอบ ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาได้รับการวิเคราะห์บนเจล agarose 1% บันไดดีเอ็นเอ Kapa Express (ชั้น 100 ชั้น 200 ชั้น 400 ชั้น 800 ชั้น 1600 ชั้น 4000 8000 bp) ใช้เป็นมาร์กเกอร์ MW

ทำ PCR โดยตรงจากพืชชนิดต่างๆและเนื้อเยื่อชนิดต่างๆ

• PCR โดยตรงกับแผ่นใบหรือเมล็ดเป็นแม่แบบ
• ไม่จำเป็นต้องใช้เวลาในการสกัดดีเอ็นเอ

รูปที่ 24 ดีเอ็นเอจีโนมิกของพืชได้รับการทำให้บริสุทธิ์จากทุกสายพันธุ์โดยใช้ชุดดีเอ็นเอในเชิงพาณิชย์ เครื่องมือเก็บตัวอย่าง Harris Uni-Core ™ (เส้นผ่านศูนย์กลาง 0.5 มม.) ถูกใช้เพื่อเก็บตัวอย่างใบ (ทุกสายพันธุ์) หรือเมล็ด (ทุกสายพันธุ์ยกเว้นยาสูบและ Arabidopsis; สำหรับสิ่งเหล่านี้เมล็ดบดหนึ่งเมล็ดถูกใช้ต่อปฏิกิริยา) PCRs (ขนาด 50 μ μL มีตัวอย่างน้ำมันดิบหรือดีเอ็นเอบริสุทธิ์ 1 – 10 นาโนกรัม (ขึ้นอยู่กับสายพันธุ์) และมีการดำเนินการ 40 รอบในทุกกรณี เป้าหมายอยู่ระหว่าง 500 ถึง 900 bp และผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาได้รับการวิเคราะห์ในเจล agarose 1% บันไดดีเอ็นเอ Kapa Express (ชั้น 100 ชั้น 200 ชั้น 400 ชั้น 800 ชั้น 1600 ชั้น 4000 8000 bp) ใช้เป็นมาร์กเกอร์ MW

ปรับปรุงอัตราความสำเร็จด้วยกระบวนการ PCR โรงงานตัวอย่างน้ำมันดิบแบบใหม่

• ใช้บัฟเฟอร์การสกัดเพื่อเตรียมสารสกัดจากน้ำมันดิบสำหรับพืช PCR ในเวลาเพียง 5 นาที
• อัตราความสำเร็จสูงแม้จะเป็นประเภทตัวอย่างที่ท้าทายที่สุดก็ตาม

รูปที่ 25 μL ตัวอย่างน้ำมันดิบที่มีแท็บคู่ c/d ไพรเมอร์ได้ดำเนินการกับใบและ/หรือเมล็ดจากพืช 8 ที่มี 1 μL ของสารสกัดจากน้ำมันดิบเตรียมโดยไม่ต้องรักษาความร้อน (ซ้าย) หรือ 1 ของสารสกัดจากน้ำมันดิบที่เตรียมด้วยการรักษาความร้อน (ขวา) มีการสร้างปฏิกิริยาตามที่อธิบายไว้ใน TDS ชุด PCR ของโรงงาน KAPA3G และ PCR 45 รอบที่ทำด้วยการอบอ่อนที่อุณหภูมิ 55°C และขยายเวลา 20 วินาทีที่อุณหภูมิ 72°C ต่อรอบ บันไดดีเอ็นเอ Kapa Express (ชั้น 100 ชั้น 200 ชั้น 400 ชั้น 800 ชั้น 1600 ชั้น 4000 8000 bp) ใช้เป็นมาร์กเกอร์ MW 1 ยูคาลิปตัส ; 2 เกรปไวน์ ; 3 ใบข้าวสาลี ; 4: เมล็ดข้าวสาลี ; 5: ใบคาโนลา ; 6 เมล็ดคาโนลา ; 7 เมล็ดข้าว ; 8 เมล็ดข้าวบาร์เลย์ ; 9: เมล็ดข้าวโพด ; 10 เมล็ดฝ้าย ; 11: ใบคอตตอน