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詳細
CpGenome Turbo Bisulfite Modification Kitは、バイサルファイト変換プロセスをシンプルに簡素化するよう設計されています。本キットにはバイサルファイト変換に必要な主要な試薬が含まれており、通常3~16時間かかるステップを90分で完了します。この迅速且つ効果的な手法には、変換時間の短縮を可能にする、自社開発の変換試薬混合液を使用しています。この独自の試薬混合液により、非メチル化シトシンを高効率で変換することが可能となり、反応中におけるDNAの分解を最小限に抑えます。DNAが変換され、脱スルホン化された後は、キットに同梱されているスピンカラムを用いて、DNAを精製・溶出します。これにより、マイクロアレイや次世代シークエンサーといった幅広いアプローチで使用可能です。
主要な特長
主要な特長
- 90分でバイサルファイト処理を完了
- 非メチル化シトシンからウラシルへの変換効率99.9 %
- 最小必要試料は1 ng
- 反応溶液は25マイクロリットル
- マイクロアレイ、DNAシークエンス解析など、複数の解析アプローチに適用可能
グアノシン5位でのシトシンのメチル化は、多くの真核生物の遺伝子発現に影響をもたらします。正常な細胞において、メチル化は主にCG配列の少ない領域で起こり、CpGアイランドと呼ばれるCG配列の豊富な領域は非メチル化状態のままです。例外として、刷込み(インプリンティング)遺伝子及びメスの不活性X染色体上の転写不活性化に関与するCpGアイランドは広範にメチル化されています。本来は非メチル化状態であるCpGアイランドの異常なメチル化は、不死化細胞及び形質変換細胞において比較的頻度の高い現象として報告されており、癌抑制遺伝子の転写不活性化に関与しています。
シトシンのメチル化状態を検出するための手法は既に複数確立されています。これらの手法には、抗体またはメチル化DNA結合ドメインを利用する方法、メチル化DNA感受/非感受性の制限酵素を用いたゲノム・スキャンニング法、オリゴヌクレオチドアレイハイブリダイゼーション法、バイサルファイトゲノムDNAシークエンシング及びメチル化特異的PCR(MSP)法などがあります。
ゲノムDNAシークエンシングは、時間がかかり多大な労力を要しますが、普遍的な検出手法です。たとえばMSPは、異常なメチル化シトシンをモニタリングする定評のある技術です。この手法では、少量のDNAを用いて、プロモーター領域の5-メチルシトシンを高感度かつ特異的に検出できます。MSPは、癌抑制遺伝子機能を定義し、組織及び体液由来のDNAを精査することで、腫瘍の早期検出の新たな戦略を得るために活用されています。
バイサルファイトゲノムシーケンシング及びMSPの最初のステップはいずれも、DNA試料のバイサルファイト変換を行うことです。バイサルファイト反応では、高確率に非メチル化シトシンがウラシルに変換されますが、5-メチルシトシンはこの反応を受けません。このように、バイサルファイト処理後のDNA配列は、DNAが元々メチル化されているかいないかによって異なります。また、当初の相補的DNA鎖は、シトシンがウラシルに変換された後、相補的ではなくなります。MSP解析で使用するプライマーは、化学的に誘発される差異に基づき、バイサルファイト感受性の非メチル化鎖またはバイサルファイト耐性のメチル化鎖のいずれかを特異的に増幅するように設計されます。ミリポアは、このようなMSPを用いた遺伝子特異的解析を可能にするCpG Wiz MSPキットセレクションを提供しています。CpG Wizキット及びMSP技術の詳細は、こちらをクリックしてご覧下さい。
シトシンのメチル化状態を検出するための手法は既に複数確立されています。これらの手法には、抗体またはメチル化DNA結合ドメインを利用する方法、メチル化DNA感受/非感受性の制限酵素を用いたゲノム・スキャンニング法、オリゴヌクレオチドアレイハイブリダイゼーション法、バイサルファイトゲノムDNAシークエンシング及びメチル化特異的PCR(MSP)法などがあります。
ゲノムDNAシークエンシングは、時間がかかり多大な労力を要しますが、普遍的な検出手法です。たとえばMSPは、異常なメチル化シトシンをモニタリングする定評のある技術です。この手法では、少量のDNAを用いて、プロモーター領域の5-メチルシトシンを高感度かつ特異的に検出できます。MSPは、癌抑制遺伝子機能を定義し、組織及び体液由来のDNAを精査することで、腫瘍の早期検出の新たな戦略を得るために活用されています。
バイサルファイトゲノムシーケンシング及びMSPの最初のステップはいずれも、DNA試料のバイサルファイト変換を行うことです。バイサルファイト反応では、高確率に非メチル化シトシンがウラシルに変換されますが、5-メチルシトシンはこの反応を受けません。このように、バイサルファイト処理後のDNA配列は、DNAが元々メチル化されているかいないかによって異なります。また、当初の相補的DNA鎖は、シトシンがウラシルに変換された後、相補的ではなくなります。MSP解析で使用するプライマーは、化学的に誘発される差異に基づき、バイサルファイト感受性の非メチル化鎖またはバイサルファイト耐性のメチル化鎖のいずれかを特異的に増幅するように設計されます。ミリポアは、このようなMSPを用いた遺伝子特異的解析を可能にするCpG Wiz MSPキットセレクションを提供しています。CpG Wizキット及びMSP技術の詳細は、こちらをクリックしてご覧下さい。
アプリケーション
MSPのプライマー設計については、MethPrimeソフトウェアパッケージをご利用下さい。こちらをクリックして下さい。
Research Category
エピジェネティクス及び核内機能分子
エピジェネティクス及び核内機能分子
構成
バイサルファイト変換試薬1
バイサルファイト変換試薬2
バイサルファイト試薬希釈剤
DNA結合バッファー
DNA洗浄バッファー*
DNA溶出バッファー
変換DNA精製カラム
2 mL回収チューブ
*DNA洗浄バッファーには、100%エタノールの添加が必要です。
バイサルファイト変換試薬2
バイサルファイト試薬希釈剤
DNA結合バッファー
DNA洗浄バッファー*
DNA溶出バッファー
変換DNA精製カラム
2 mL回収チューブ
*DNA洗浄バッファーには、100%エタノールの添加が必要です。
法的情報
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
免責事項
Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.
シグナルワード
Danger
危険有害性情報
危険有害性の分類
Acute Tox. 4 Inhalation - Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Met. Corr. 1 - Skin Corr. 1C
補足的ハザード
保管分類コード
8A - Combustible corrosive hazardous materials
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
Jan Code
S7847:
試験成績書(COA)
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書(COA) を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。
Cell reports, 19(9), 1846-1857 (2017-06-01)
2-hydroxyglutarate-(2-HG)-mediated inhibition of TET2 activity influences DNA hypermethylation in cells harboring mutations of isocitrate dehydrogenases 1 and 2 (IDH1/2). Here, we show that 2-HG also regulates DNA methylation mediated by DNA methyltransferase 1 (DNMT1). DNMT1-dependent hypermethylation of the RIP3 promoter
Oncotarget, 8(38), 63247-63257 (2017-10-04)
Serotonin (5-hydroxytryptamine, 5-HT) dysfunction is associated with the pathophysiology of depression. Tryptophan hydroxylase (TPH), the rate-limiting enzyme in 5-HT biosynthesis, is believed to have essential role in many mental disorders, including depression. In the present study, we generated a rat
PloS one, 13(6), e0199091-e0199091 (2018-06-15)
DNA methylation is one of the most important epigenetic modifications in the regulation of gene transcription. The current gold standard to study this modification is bisulfite sequencing. Although multiple commercial bisulfite treatment kits provide good conversion efficiencies, DNA loss and
Characterization of induced tissue-specific stem cells from pancreas by a synthetic self-replicative RNA.
Scientific Reports null
BioTechniques, 55(4), 181-197 (2013-10-11)
Comprehensive analysis of DNA methylation patterns is critical for understanding the molecular basis of many human diseases. While hundreds of PCR-based DNA methylation studies are published every year, the selection and implementation of appropriate methods for these studies can be
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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