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First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV)

sufficient for 30 reactions (including 5 control reactions), kit of 1 (10 components), suitable for RT-PCR, hotstart: no, dNTPs included

• 別名: RT-PCR, cDNAの合成
• UNSPSCコード: 41106313

特性

• 使用法: sufficient for 30 reactions (including 5 control reactions)
• 品質水準: 100
• 比活性: >50 units/μg protein
• 特徴: dNTPs included; hotstart: no
• 包装: kit of 1 (10 components)
• メーカー／製品名: Roche
• パラメーター: 42 °C optimum reaction temp.
• テクニック: RT-PCR: suitable
• 入力: purified RNA
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

First Strand cDNA Synthesis Kitは、2ステップRT PCRの開始反応である第一鎖cDNAの合成に使用されます。本キットには、第一鎖合成用の逆転写酵素AMV、2つの異なるプライマー、PCR Nucleotide Mix、およびControl Neo pa RNAが含まれています。RT-PCRにより生成されたPCR産物は、標準的な手順を用いてクローニングすることができます。

RNAを増幅させるためには、RNA基質をDNAに変換する必要があります。これは、AMV RT（トリ骨髄芽球症ウイルス逆転写酵素）またはM-MuLV RT（Moloneyマウス白血病ウイルス逆転写酵素）などの逆転写酵素を使用して達成されます。得られたcDNAは、標準的なPCRのテンプレートとして使用することができます。
AMV RTは、以下のとおり、使用するプライマーのタイプにより決定される部位で新しいcDNA鎖を合成します：

• Oligo-p（dT）₁₅をプライマーとして使用した場合、poly（A）mRNAの3′末端
• ランダムプライマーp（dN）₆を使用した場合、mRNAテンプレートに沿った非特異的ポイント
• 配列特異的プライマーによって決定された部位

第一鎖cDNA合成にAMV RTを使用することには、特定の利点があります。この酵素の熱安定性は、M-MuLV RTと比べて高いので、反応を+42℃で行うことが可能となるため、+37℃で行われる反応と比べてより高い特異性と二次構造のより良い分解能が得られます。

特異性

熱失活：5分間、95℃
逆転写酵素AMV

アプリケーション

RT-PCR（AMV）用のFirst Strand cDNA Synthesis Kitは、以下の用途に適しています：

• RNAウイルスまたは他のRNA含有微生物の有無の検出（PCRと併用）
• 特定のmRNAの差次的発現をモニタリングするためのmRNAの定量化
• 「mRNAのディファレンシャルディスプレイ」の第一工程
• 長い完全長インサートによる cDNA ライブラリーの作成
• RNAの相補的DNAへの逆転写のための逆転写-定量的ポリメラーゼ連鎖反応（RT-qPCR）。

特徴および利点

堅牢性：

• 転写が困難な二次RNA構造を有するトータルRNA、mRNA、ウイルスRNAを転写します
• 最大12kbのcDNA転写産物を取得します
• M-MuLV逆転写酵素よりも高い熱安定性（最高50℃）および特異性を示します
• PCR反応の前に得られたcDNAを精製する必要はありません

柔軟性：
配列特異的プライマー、poly（dT）15プライマー、またはランダムプライマーp（dN）6のいずれかとともに使用することができます。

包装

10種のコンポーネントを含む1キット。

品質

標準cDNA合成アッセイでは、1.0 μgのNeo pa RNAテンプレートを20 μCi [α-³²P]-dCTP（3000 Ci/mmolの比活性）とともに+42℃で60分間インキュベートすると、少なくとも300 ngのcDNAが合成されます（すなわち、30%の収率）。

単位の定義

容量活性：20～25 U/μL

その他情報

ライフサイエンス研究専用です。診断的処置に使用しないでください。

キットの構成要素のみ

• Reverse Transcriptase AMV
• PCR Nucleotide Mix, pH 8.5 10 mM each
• Reaction Buffer
• MgCl₂ Stock Solution 25 mM
• Gelatin 0.05% (w/v)
• Oligo-p(dT)₁₅ , 0.02 A₂₆₀ units/μl 0.8 μg/μl
• Random Primer p(dN)₆ , 0.04 A₂₆₀ units/μl 1.6 μg/μl
RNase Inhibitor 50 U/μl
Control Neo pa RNA (1.0 kb in length with additional 19-base 3′-poly(A) tail) 0.2 μg/μl
Water, PCR Grade

すべて表示 (10)

安全性情報

• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): does not flash
• 引火点(℃): does not flash