연구, 진단, 제약 응용분야를 위한 세포 분리 배지

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ACCUSPIN™ System-Histopaque^® 배지를 이용한 세포 분리

Histopaque^®-1077이 장착된 일반적인 ACCUSPIN™ System은 방사선 멸균 원심분리 튜브를 사용하며, 이 튜브는 다공성 고밀도 폴리에틸렌 장벽("frit")이 있는 두 개의 별도 챔버를 형성하도록 설계되었습니다. 해당 시스템을 사용하면 하부 챔버의 Histopaque^® 분리 배지와 섞이지 않고 상부 챔버에 항응고 처리된 전혈을 분리할 수 있습니다. Histopaque^® 밀도 구배 배지는 림프구와 단핵세포(즉, 단핵구)를 명확하게 분리할 수 있습니다. 적혈구 응집과 과립구는 약간 고장성으로 침전 속도가 증가하여 ACCUSPIN™ 튜브의 하단에 침전을 형성합니다. 일단 분리 공정이 완료되면 분리된 세포는 추가적으로 특성화, 배양, 분석되거나, 유세포 분석, 세포 기반 분석, 분자 분석, 제약 또는 세포 요법 개발 같은 다운스트림 응용분야에서 사용될 수 있습니다.

Histopaque^® 아이오딘표지 구배 배지

Histopaque^® 배지는 밀도에 따라 다른 세포 유형을 분리하기 위해 설계되었으며, 흔히 특정 세포 집단을 분리 및 정제하기 위해 제약 및 의생명 연구에서 사용됩니다. Histopaque^® 배지는 멸균여과, 내독소 검사를 완료한 폴리수크로스 및 디아트리조에이트나트륨 용액이며, 정밀한 밀도로 조정됩니다. 이러한 즉석 사용 분리 배지는 소량의 전혈에서 살아있는 세포를 신속한 최적의 수율로 분리합니다. Histopaque^® 분리 배지는 일반적으로 다음과 같은 응용분야에서 사용됩니다. 말초혈액단핵세포(PBMC) 분리: Histopaque^® 배지는 흔히 전혈 시료에서 PBMC를 분리하기 위해 사용됩니다. PBMC는 림프구, 단핵구, 기타 유핵세포로 구성되어 있습니다. Histopaque^® 배지로 혈액 시료 및 원심분리용 튜브 사이에 층을 깔면, 원심분리를 통해 적혈구 세포 및 혈소판 같은 기타 혈액 성분으로부터 PBMC가 분리됩니다. 세포 분획: Histopaque^® 배지는 혼합된 세포 집단을 밀도에 따라 별개의 층으로 분획하는 데 사용됩니다. 원심분리용 튜브 내에 분리 배지 층을 깔고 주의 깊게 세포 부유액을 추가하면, 원심분리를 통해 각기 다른 세포 유형을 나타내는 별개의 층이 형성됩니다. 이 기술은 추가적인 분석이나 실험을 위해 세포를 분리 및 정제하는 데 유용합니다. 특정 세포 유형 분리: Histopaque^® 분리 배지는 특정 세포 집단을 밀도 또는 특정 표지에 따라 분리하는 데 활용될 수 있습니다. 분리 배지와 세포 부유액을 주의 깊게 층으로 쌓으면, 원심분리를 통해 관심 세포가 원치 않는 세포로부터 분리됩니다. 이 기술은 특정 세포 유형을 연구하거나 희귀 세포 집단의 농축을 원하는 연구자들에게 특히 유용합니다. ISO 9001 품질관리로 생산된 Histopaque^® 제품은 로트별 성능 테스트를 통해 혈구 세포를 일관되게 선택 분리하고, 손상되지 않고 살아있는 세포를 최적으로 분리하기 위해 외부 세포 간섭을 최소화합니다.

PERCOLL^® 콜로이드 실리카 배지

콜로이드 실리카 배지는 직경이 15-30 nm인 폴리비닐피롤리돈(PVP)으로 코팅된 실리카 입자의 콜로이드 부유액이며, 일반적으로 의생명 및 제약 연구에서 세포 분리 및 정제를 위해 사용됩니다. PVP는 생물학적 물질과의 입자 상호작용을 감소시키고 등장성 생리식염수에서 콜로이드를 안정화시킵니다. Percoll^® 용액의 농도를 변경시켜서 밀도를 조정할 수 있으므로, 연구자들은 자신에게 필요한 특정 분리에 적합하게 구배를 원하는 대로 맞출 수 있습니다. Percoll^® 콜로이드 배지는 삼투압 강도가 매우 낮아 밀도에 따라 거의 변하지 않습니다. 또한 원심분리로 형성된 구배(gradient)의 삼투압은 적절한 양의 수크로스 또는 버퍼 용액을 첨가함으로써 쉽게 조절됩니다. Percoll^® 구배는 세포, 세포 소기관, 막, 소낭, 일부 바이러스의 등밀도 분리에 이상적입니다.

무기염

무기염 배지는 이온 구배 또는 이온 용액으로도 알려져 있으며, 세포를 표면 전하 또는 전기적 특성에 따라 분리하기 위한 세포 분리 기술에 사용됩니다. 이러한 배지는 정전계 또는 전하 차등을 만들어 내어 각기 다른 표면 전하를 가진 세포를 분리할 수 있게 합니다. 이온 구배 배지를 활용하는 세포 분리 기술의 예를 들면 전기영동법, 유전영동법(DEP), 등전초점화(IEF)가 있습니다. 특정한 배지 및 기술의 선택은 세포가 분리되는 성질, 원하는 분리 메커니즘, 전체 실험 목표에 따라 달라집니다. 농축 중금속 염으로 구성된 이온 구배 배지는 핵산의 등밀도 분리에만 사용됩니다. 염화 세슘과 황산 세슘은 가장 널리 사용되는 중금속염으로 최대 1.91 g/cm³의 구배 밀도를 가지고 있습니다. 사용되는 다른 염으로는 아이오딘화나트륨, 브롬화나트륨, 루비듐 염이 있습니다. 이온 구배 배지 및 기술의 선택과 설계에는 pH, 전도도, 완충액 조성, 조사하는 세포의 전기적 특성 같은 인자에 대한 주의 깊은 고려사항이 요구됩니다.

비이온성 아이오딘표지 밀도 구배 배지

비이온성 아이오딘표지 밀도 구배 배지는 생물학, 생화학, 임상 진단을 포함한 다양한 영역에서 분리 및 정제 기술을 위해 사용되는 특화된 물질입니다. 이러한 배지는 일반적으로 밀도 구배를 구성하는 아이오딘표지 화합물에 기반하므로, 입자를 밀도에 따라 분리할 수 있게 합니다. 비이온성 아이오딘표지 밀도 구배 배지는 밀도구배원심분리 원리로 작동합니다. 밀도 구배 배지에 많이 사용되는 대부분의 아이오드화 화합물 구조는 3-아이오도벤조산 같은 아이오드화 화합물을 기반으로 하며, 친수성기가 부착되어 용해도가 증가하므로 수용액 내에서 지속적인 밀도 구배를 형성합니다. 생물학적 입자의 탈수를 최소화하는 밀도가 높은 이오헥솔 용액(예: Nycodenz^® 및 Histodenz™)을 제공합니다. 이오헥솔은 독성이 없고 포유류 세포에 의해 대사되지 않습니다.

다가 알코올

다가 알코올 비이온성 구배 배지 포트폴리오에는 고분자의 속도 영역 분리 및 바이러스와 세포 소기관의 등밀도 분리에 널리 사용되는 수크로스 구배가 포합됩니다. 안정성, 불활성, 저렴한 비용이 장점인 반면, 용액이 농축되고 고장성의 특성을 갖는 단점이 있습니다. 또한 이에 상응하는 수크로스 용액보다 밀도가 낮은 글리세롤 용액을 제공하여 진공 상태에서 쉽게 제거되는 동안 특정 효소의 활성을 방지합니다.

다당류

수크로스 용액 사용시 발생하는 고삼투압 문제를 해결하기 위해 주로 사용되는 다당류 배지인 Ficoll^®을 제공합니다. Ficoll^® 합성 폴리머는 폴리비닐피롤리돈이 코팅된 폴리에틸렌글리콜(PEG)이며, 흔히 밀도 구배 용액을 조제하는 데 사용됩니다. Ficoll^® 용액은 다양한 생물학 및 생화학 응용분야, 특히 세포 분리 및 격리에 널리 활용됩니다. 해당 용액은 수크로스 분자를 에피클로로히드린과 중합시켜 만들어지며, 평균 분자량이 400,000인 다당류를 생성합니다. 20%(w/v) 미만의 Ficoll^® 용액은 1.07 g/cm3의 밀도를 가지며, 삼투압적으로 불활성인 것으로 간주됩니다. Ficoll^® 용액의 주요 단점은 수크로스 용액보다 점성이 더 강합니다. Ficoll^® 용액은 다양한 제약 연구 및 개발 공정에서 중요한 역할을 수행하며, 세포, 바이러스, 기타 생물학적 성분의 분리, 정제, 특성화를 용이하게 함으로써 신약 발굴, 면역 요법, 기타 제약 응용분야에 기여합니다. 세포 분리 기술, 특히 단핵세포를 말초혈액이나 기타 세포 공급원으로부터 분리하기 위해 일반적으로 사용됩니다. 세포 부유액을 Ficoll^® 밀도 구배 위에 층으로 쌓아서 원심분리를 하면, 림프구나 단핵구 같은 관심 세포를 적혈구 세포 및 과립구 같은 기타 세포 유형 및 원치 않는 성분으로부터 분리할 수 있습니다. Ficoll^® 용액은 또한 입자나 분자를 부력밀도에 따라 분리하는 기술인 밀도구배원심분리에 사용됩니다. 원심분리를 하는 동안, 입자나 세포는 Ficoll^® 구배를 통해 이동하여, 각자 자신의 밀도에 해당하는 위치에 자리잡습니다. 이를 통해 비균질 혼합물에 존재하는 다양한 성분의 분리 및 분획이 가능합니다.