無菌試験

無菌試験の手順は、食品・飲料メーカーを含む多くの産業の製品に適用されていますが、主な対象となるのは製薬および医療分野であり、そこでは製品の無菌試験が微生物学者にとって不可欠かつ日常的な業務となっています。

• 医薬品の無菌試験法
• 医療機器の無菌試験法
• 無菌試験のワークフロー

医薬品の無菌試験法

医薬品の無菌試験に関する薬局方法では、2種類の異なる培地で検体を培養することが求められます。 無菌試験では、残留嫌気性菌だけでなく好気性菌や真菌の増殖を促進するために、2種類の異なる培地が使用されます。通常、嫌気性菌および一部の好気性菌の培養にはフルイドチオグリコール酸培地（FTM）が、真菌および好気性菌の培養には大豆カゼイン消化培地（SCDM）が使用されます。 検体は検査前にそれぞれ32.5 °Cおよび22.5 °Cで14日間培養される。培地に濁りが認められる場合は増殖を示している可能性があり、調査が必要である。医薬品の無菌試験には、膜ろ過法と直接接種法の2つの推奨される方法がある。

膜ろ過による無菌試験

膜ろ過による無菌試験は、USP <71>、EU薬局方 <2.6.1>、およびJP薬局方 <4.06> に記載されている通り、ろ過可能な医薬品に対して推奨される規制上の試験法である。 検体はろ過キャニスター内の0.45 µm膜フィルターを通過させ、培養培地を加えて培養する。この無菌試験法は、検体全体または混合検体を単一のフィルターに通すため、他の方法と比較して感度が高い。また、ろ過を行うことで、抗生物質や保存料など、濁りの原因となったり増殖を阻害したりする可能性のある成分を洗い流すことができる。

直接接種による無菌試験

直接接種法では、サンプル容器から少量のサンプルを無菌的に採取し、適切な量の培地に直接接種してから培養を行います。この試験法は単純ですが、いくつかの重大な制限があります。 接種できる培地量が限られるため、試験の感度が低下します。接種後にサンプルが濁っていると、培養期間終了時に微生物増殖による濁りと区別するのが困難になることがあります。さらに、製品に抗菌作用がある場合は、微生物の増殖が阻害されないようサンプルを中和する必要があります。

医療機器の無菌試験法

医療機器の無菌試験には、直接移入法による無菌試験が推奨される。試験対象の機器は培養期間を通じて試験培地と直接接触しており、その間に機器内部または表面に存在する微生物は増殖する。 さらに、輸血用・輸液用アセンブリなど、流路が無菌と表示されている中空管を有する製品については、製品内洗浄による無菌試験が好ましい。製品の内腔を洗浄液で洗浄し、溶出液をメンブレンろ過した後、適切な培地に移して培養を行う。

無菌試験のワークフロー

1. 試験準備—膜ろ過装置のチューブをポンプにセットする

2. フィルターの予備湿潤—ろ過効率を最適化し、フィルターへの製品付着を最小限に抑えるため、膜ろ過装置を予備湿潤する。

3. 試料ろ過—両方のキャニスターに等量の製品をろ過する。微生物は0.45 µmの孔径を持つフィルターによって捕捉される。

4. 洗浄—適切な洗浄液を用いて、すべての阻害性化合物を洗い流す。

5. 培地の充填—膜ろ過装置にTSBおよびFTM無菌培地を充填する。

6. 培養期間—14日間。

7. 最終試験結果—目視による濁度の確認／濁度なしの確認。