17-614
ChIPAb+トリメチルヒストンH3（Lys4）-ChIPバリデーション抗体およびプライマーセット、ウサギモノクローナル
from rabbit
別名:
Chip Rabbit Antibody and primer set, H3K4me3 ChIP, H3K4me3, Histone H3 (tri methyl K4), Histone H3K4me3, Histone H3K4me3 ChIP
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About This Item
UNSPSCコード:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.32
クローン:
monoclonal
application:
ChIP
WB
WB
化学種の反応性:
mouse, human
テクニック:
ChIP: suitable (ChIP-seq)
western blot: suitable
western blot: suitable
citations:
183
おすすめの製品
由来生物
rabbit
品質水準
クローン
monoclonal
化学種の反応性
mouse, human
化学種の反応性（ホモロジーによる予測）
mammals
メーカー／製品名
ChIPAb+
Upstate®
テクニック
ChIP: suitable (ChIP-seq)
western blot: suitable
アイソタイプ
IgG
NCBIアクセッション番号
UniProtアクセッション番号
輸送温度
dry ice
遺伝子情報
human ... H3F3B(3021)
詳細
すべてのChIPAb+抗体は、すべてのロットについて毎回個別にクロマチン沈降がバリデーションされます。 各ChIPAb+抗体セットには、遺伝子座に固有のコンテキストでIP結果を生物学的にバリデーションするためのコントロールプライマー（qPCRですべてのロットがテスト済み）が含まれています。qPCRプロトコルとプライマー配列が提供されるため、研究者は各自のクロマチンコンテキストでメルクの抗体を使用する際に、ChIPプロトコルをバリデーションできます。各セットには、ChIP反応の特異性を確保するためのネガティブコントロール抗体も含まれています。
ChIPAb+トリメチルヒストンH3（Lys4）セットには、抗トリメチルヒストンH3（Lys4）抗体、ネガティブコントロール抗体（正常ウサギ血清）、およびヒトGAPDH遺伝子のプロモーター内で166塩基対領域を増幅するqPCRプライマーが含まれています。 トリメチルヒストンH3（Lys4）とネガティブコントロール抗体は拡張性のある「ChIPごと」の反応サイズで供給され、トリメチルヒストンH3（Lys4）関連クロマチンの沈降を機能的にバリデーションするために使用できます。
ChIPAb+トリメチルヒストンH3（Lys4）セットには、抗トリメチルヒストンH3（Lys4）抗体、ネガティブコントロール抗体（正常ウサギ血清）、およびヒトGAPDH遺伝子のプロモーター内で166塩基対領域を増幅するqPCRプライマーが含まれています。 トリメチルヒストンH3（Lys4）とネガティブコントロール抗体は拡張性のある「ChIPごと」の反応サイズで供給され、トリメチルヒストンH3（Lys4）関連クロマチンの沈降を機能的にバリデーションするために使用できます。
ヒストンのメチル化は、アルギニンまたはリジンという2つの異なる残基で生じる可能性があります。ヒストンのメチル化は、メチル化した残基に応じて転写活性化または転写抑制が関与する場合があります。ヒストンH3のリジン4は、SET1やASH1などの異なるヒストンメチルトランスフェラーゼ（HMT）によって、モノ-、ジ-またはトリメチル化する可能性があります。Lys4のメチル化は、しばしば転写活性化が関与して生じます。デメチラーゼLSD1は、ヒストンH3 Lys4を脱メチル化することができます。
特異性
トリメチルヒストンH3（Lys4）
免疫原
エピトープ：トリメチルLys4
トリメチルヒストンH3（Lys4）抗体は、ヒトヒストンH3のトリメチル-リジン4に相当するme3Kが含まれる配列…RT[me3K]QT…を含む、BSA結合、合成ペプチドに対して作成されています。
アプリケーション
クロマチン免疫沈降：
未処理またはUV処理済み（50ジュール/m2で6時間）のU2OS細胞（IPあたり3 X 106細胞相当）から調製された超音波分解クロマチンを、3 μLのウサギ抗トリメチルヒストンH3（Lys4）およびMagna ChIP A（カタログ番号17-610）キットを使用してクロマチン免疫沈降しました。Sp1結合部位を持つヒトp21プロモーターに隣接するChIPプライマーp21を用いたqPCRで、トリメチルヒストンH3（Lys4）関連DNA断片の免疫沈降が検証されています（図を参照）。
Fold Increaseは、各クロマチンサンプルのインプットによって得られる標準曲線から抽出された正規化平均IP量の割合です。このプロモーターが関与するトリメチルヒストン（Lys4）免疫沈降活性は、他の研究によって示されている通りUV処理によって増加します。
実験の詳細については、EZ-Magna A ChIP（カタログ番号17-408）またはEZ-ChIP（カタログ番号17-371）プロトコルをご覧ください。
ChIP-seq分析：
クロマチン免疫沈降は、Magna ChIP HiSensキット（17-10460）、3 µL抗トリメチルヒストンH3（Lys4）抗体（カタログ番号17-614）または20 µLプロテインA/Gビーズ、および1e6架橋結合HeLa細胞クロマチンを使用し、さらに磁気ビーズを用いてDNA精製することにより実施されています。Illuminaバーコード付きアダプターを用いた標準プロトコルによってInputおよびChIP DNAサンプルからライブラリを準備し、Illumina HiSeq装置で分析を行いました。FastQファイルから得られた1800万に及ぶ膨大な数の読取り値を、Bowtie（http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml）およびTagDust（http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/）タグ除去の順に使用してマッピングしました。MACS（http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/）を用いてピークを特定し、UCSCゲノムブラウザ（http://genome.ucsc.edu）のカスタムトラックとしてBigWigおよびBEDファイルからピークと読取り値を可視化しました。17～614および07～473データセットで特定されたピークの上位25%が、HeLa S3のENCODE H3K4me3 BROADヒストントラックで特定されたピークと99%の重複を示しました。
ウェスタンブロッティングおよびペプチド阻害：
代表的なブロットです。HeLa酸抽出物を電気泳動によって分解し、ニトロセルロースに転送し、さらに抗トリメチルヒストンH3（Lys4）（1：2,000、レーン1）により精査するか、またはモノメチル-リジン4（レーン2）、ジメチルリジン4（レーン3）、トリメチル-リジン4（レーン4）で修飾した0.4 μMヒストンH3ペプチドで前培養しました。
HRPと結合したヤギ抗ウサギ二次抗体と化学発光検出
システムを使用して、タンパク質を可視化しました（図を参照）。
未処理またはUV処理済み（50ジュール/m2で6時間）のU2OS細胞（IPあたり3 X 106細胞相当）から調製された超音波分解クロマチンを、3 μLのウサギ抗トリメチルヒストンH3（Lys4）およびMagna ChIP A（カタログ番号17-610）キットを使用してクロマチン免疫沈降しました。Sp1結合部位を持つヒトp21プロモーターに隣接するChIPプライマーp21を用いたqPCRで、トリメチルヒストンH3（Lys4）関連DNA断片の免疫沈降が検証されています（図を参照）。
Fold Increaseは、各クロマチンサンプルのインプットによって得られる標準曲線から抽出された正規化平均IP量の割合です。このプロモーターが関与するトリメチルヒストン（Lys4）免疫沈降活性は、他の研究によって示されている通りUV処理によって増加します。
実験の詳細については、EZ-Magna A ChIP（カタログ番号17-408）またはEZ-ChIP（カタログ番号17-371）プロトコルをご覧ください。
ChIP-seq分析：
クロマチン免疫沈降は、Magna ChIP HiSensキット（17-10460）、3 µL抗トリメチルヒストンH3（Lys4）抗体（カタログ番号17-614）または20 µLプロテインA/Gビーズ、および1e6架橋結合HeLa細胞クロマチンを使用し、さらに磁気ビーズを用いてDNA精製することにより実施されています。Illuminaバーコード付きアダプターを用いた標準プロトコルによってInputおよびChIP DNAサンプルからライブラリを準備し、Illumina HiSeq装置で分析を行いました。FastQファイルから得られた1800万に及ぶ膨大な数の読取り値を、Bowtie（http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml）およびTagDust（http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/）タグ除去の順に使用してマッピングしました。MACS（http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/）を用いてピークを特定し、UCSCゲノムブラウザ（http://genome.ucsc.edu）のカスタムトラックとしてBigWigおよびBEDファイルからピークと読取り値を可視化しました。17～614および07～473データセットで特定されたピークの上位25%が、HeLa S3のENCODE H3K4me3 BROADヒストントラックで特定されたピークと99%の重複を示しました。
ウェスタンブロッティングおよびペプチド阻害：
代表的なブロットです。HeLa酸抽出物を電気泳動によって分解し、ニトロセルロースに転送し、さらに抗トリメチルヒストンH3（Lys4）（1：2,000、レーン1）により精査するか、またはモノメチル-リジン4（レーン2）、ジメチルリジン4（レーン3）、トリメチル-リジン4（レーン4）で修飾した0.4 μMヒストンH3ペプチドで前培養しました。
HRPと結合したヤギ抗ウサギ二次抗体と化学発光検出
システムを使用して、タンパク質を可視化しました（図を参照）。
ChIP-グレード抗体と、H3K4Me3のクロマチン免疫沈降専用のコントロールPCRプライマーを含む、トリメチルヒストンH3（Lys4）ChIPバリデーション済みの抗体とプライマーのセット。
研究カテゴリー
エピジェネティックスおよび核機能
エピジェネティックスおよび核機能
研究サブカテゴリー
クロマチン生物学
クロマチン生物学
包装
1キットあたり25アッセイ、クロマチン免疫沈降1回あたり約3 μL
構成
抗トリメチルヒストンH3（Lys4）（精製ウサギIgG）、1バイアル
ネガティブChIPコントロールウサギIgG、1バイアル
ChIPプライマーGAPDH、1バイアル
ネガティブChIPコントロールウサギIgG、1バイアル
ChIPプライマーGAPDH、1バイアル
品質
クロマチン免疫沈降：
未処理HeLa細胞（1 X 106細胞相当）から調製された超音波分解クロマチンを、3 μLの正常ウサギIgGまたは3 μLの抗トリメチルヒストンH3（Lys4）モノクローナルIgGのいずれか、およびMagna ChIP A（部品番号17-610）キットを使用してクロマチン免疫沈降しました。
トリメチルヒストンH3（Lys4）関連DNA断片が正常に免疫沈降することを、ヒトGAPDHプロモーターに隣接するコントロールChIPプライマーを用いたqPCRによって検証しました（図を参照）。実験の詳細については、EZ-Magna A ChIPプロトコルを参照してください。
未処理HeLa細胞（1 X 106細胞相当）から調製された超音波分解クロマチンを、3 μLの正常ウサギIgGまたは3 μLの抗トリメチルヒストンH3（Lys4）モノクローナルIgGのいずれか、およびMagna ChIP A（部品番号17-610）キットを使用してクロマチン免疫沈降しました。
トリメチルヒストンH3（Lys4）関連DNA断片が正常に免疫沈降することを、ヒトGAPDHプロモーターに隣接するコントロールChIPプライマーを用いたqPCRによって検証しました（図を参照）。実験の詳細については、EZ-Magna A ChIPプロトコルを参照してください。
ターゲットの説明
17 kDa
物理的形状
フォーマット：精製
抗トリメチルヒストンH3（Lys4）リコンビナントウサギモノクローナルIgG抗体。保存用緩衝液（0.1Mトリス－グリシン（pH 7.4）、0.15 M塩化ナトリウム、0.05%NaN3に40%グリセロールを添加）中に75 μLのプロテインA精製ウサギIgGを含む1バイアル。
正常ウサギIgG。75 μLの正常ウサギIgGを含む1バイアル。
コントロールプライマー。ヒトGAPDHに特異的な5 μMの各プライマーを75 μL含む1バイアル。
FOR：TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV：TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA
正常ウサギIgG。75 μLの正常ウサギIgGを含む1バイアル。
コントロールプライマー。ヒトGAPDHに特異的な5 μMの各プライマーを75 μL含む1バイアル。
FOR：TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV：TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA
保管および安定性
-20°Cで受領日から1年間安定です。
アナリシスノート
コントロール
ネガティブコントロール抗体精製ウサギIgGおよびヒトGAPDHプロモーターに特異的なコントロールプライマーを含む。
ネガティブコントロール抗体精製ウサギIgGおよびヒトGAPDHプロモーターに特異的なコントロールプライマーを含む。
法的情報
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
免責事項
メルクのカタログまたは製品に添付されたメルクのその他の文書に記載されていない場合、メルクの製品は研究用途のみを目的としているため、他のいかなる目的にも使用することはできません。このような目的としては、未承認の商業用途、in vitroの診断用途、ex vivoあるいはin vivoの治療用途、またはヒトあるいは動物へのあらゆる種類の消費あるいは適用などがありますが、これらに限定されません。
保管分類コード
10 - Combustible liquids
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
毒物及び劇物取締法
キットコンポーネントの情報を参照してください
PRTR
キットコンポーネントの情報を参照してください
消防法
キットコンポーネントの情報を参照してください
労働安全衛生法名称等を表示すべき危険物及び有害物
キットコンポーネントの情報を参照してください
労働安全衛生法名称等を通知すべき危険物及び有害物
キットコンポーネントの情報を参照してください
カルタヘナ法
キットコンポーネントの情報を参照してください
Jan Code
キットコンポーネントの情報を参照してください
試験成績書（COA）
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書（COA） を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。
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ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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