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ニックトランスレーションキット

sufficient for 50 labeling reactions, kit of 1 (7 components), suitable for FISH

• 別名: ニック翻訳
• UNSPSCコード: 41105500

特性

• 使用法: sufficient for 50 labeling reactions
• 品質水準: 100
• 包装: kit of 1 (7 components)
• メーカー／製品名: Roche
• テクニック: FISH: suitable
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

ニックトランスレーション法による DNA の放射性または非放射性ラベリング用キット。この方法では、DNase と DNA ポリメラーゼの組合せを利用して、DNA 螺旋の片方の鎖に切れ目を入れます。次に、ポリメラーゼによる読取りの際、ラベルしたヌクレオチドが取り込まれるか、または切れ目を入れた部位が「校正」されます。

特異性

熱失活：1μL 0.5 M EDTA（pH 8.0）を添加することにより、および／または 65°Cで 10 分間加熱することにより反応を停止させます。

アプリケーション

このキットは、放射性または修飾 dNTP による DNA のラベリングに使用します。ニックトランスレーションによりラベルしたプローブは、多くの異なるハイブリダイゼーション技術に使用されています。これらには、プローブとしての以下の使用が含まれます：

• コロニーもしくはプラークハイブリダイゼーションによるスクリーニング遺伝子バンク
• DNA または RNA トランスファーハイブリダイゼーション
• In situハイブリダイゼーション
• 再結合キネティックス

ニックトランスレーションキットは、FISH（蛍光in situハイブリダイゼーション）ベースのマダニおよび細菌の人工染色体のラベリングに使用されています。また、GISH（in situハイブリダイゼーション中のゲノムの）シグナルを得る目的で、プローブ（ゲノム DNA）のラベリングに使用されています。

包装

7 種のコンポーネントを含む 1 キット。

規格

アッセイ時間：45 分間

比活性：特異的ラベリングのレベルおよび取込み率は、ラベルされたデオキシリボヌクレオシド三リン酸に対する基質 DNA の比に依存します。例えば、得られた速度論とラベリングは、0.1μg DNA および 20μCi dXTP または 0.5μg DNA および 100μCi dXTP を含むアッセイにおいて同一です。
標準アッセイは、35 分間での異なる基質 DNA（例えば、pBR322、λDNA、DNA 断片）の 65%の取込みに対応する 3 x 10⁸ dpm/μg の比活性が得られます。

サンプル材料

• スーパーコイル DNA および線状プラスミド DNA
• スーパーコイル DNA および線状コスミド DNA
• BAC DNA またはヒトゲノム DNA
• 精製 PCR 産物

注：ニックトランスレーションの前にテンプレートを変性する必要はありません。

原理

ニックトランスレーション法は、Mg²⁺存在下の低い酵素濃度において、ランダムに分散したニックを導入する DNase I の性能に基づいています。大腸菌DNAポリメラーゼ I は、プライマーとしてニックの 3′ -OH 終端を用い、5′→3′ 方向に、未変成の鎖に対して相補的な DNA を合成します。DNA ポリメラーゼ I の 5′→3′ エクソヌクレオチド分解活性により、同時に合成方向にヌクレオチドが除去されます。除去されたヌクレオチドは、ポリメラーゼ活性により、同位体ラベルしたまたはハプテンラベルしたデオキシリボヌクレオシド三リン酸に順次置き換えられます。このため、低温（+15°C）において、反応液中の非ラベル DNA は新たに合成されたラベル DNA に置き換えられます。

調製ノート

ワーキング濃度：T7、T3 または SP6 RNA ポリメラーゼを用いた望ましいワーキング濃度は 1 mM です。
ワーキング溶液：DNA
DNA は低塩濃度の溶液中になければなりません。

dATP、dGTP、dTTP

• 同じラベル化されたデオキシリボヌクレオシド三リン酸を繰り返し使用する場合は、便宜上、他の 3 種の三リン酸塩の等量混合物を調製することをお勧めします。
• 溶液 2、溶液 4、および溶液 5 の 1:1:1 混合液を作製することにより、dATP、dGTP、dTTP 混合物を調製してください。

その他情報

ライフサイエンス研究専用。診断目的での使用はできません。

キットの構成要素のみ

• Control DNA pBR322, 20 μl 50 µg/ml
• dATP, 50 μl 0.4 mM
• dCTP, 50 μl 0.4 mM
• dGTP, 50 μl 0.4 mM
• dTTP, 50 μl 0.4 mM
• Nick Translation Buffer, 100 μl 10x concentrated
• Enzyme Mixture, 100 μl, DNA Polymerase I and DNase I in 50% glycerol (v/v)

安全性情報

• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): does not flash
• 引火点(℃): does not flash