BGALA-RO

β-グルクロニダーゼ／アリルスルファターゼ

from Helix pomatia

• 別名: アリルスルファターゼ／β-グルクロニダーゼ, スルファターゼ／β-グルクロニダーゼ
• UNSPSCコード: 12352204

特性

• 由来生物: animal (Helix pomatia)
• 品質水準: 100
• 形状: solution
• 比活性: 10.8 U/mL, 25 °C (ß-Glucuronidase); 25 U/mL, 25 °C (with 4-NP-sulfate, Arylsulfatase)
• 包装: pkg of 10 mL (10127698001); pkg of 2 mL (10127060001)
• メーカー／製品名: Roche
• テクニック: ELISA: suitable
• 色: colorless to brown
• 最適pH: 4.5-5.0
• 溶解性: water: miscible
• アプリケーション: life science and biopharma; sample preparation
• 保管温度: 2-8°C

詳細

詳細

リンゴマイマイ(Helix pomatiais)由来のβ-グルクロニダーゼ／アリルスルファターゼは、スルファターゼ活性を含む酵素調製物として最も広く使用されており、非常に広範な特異性を有します。これは酵素の粗混合物であり、その調製にはいかなる種類のクロマトグラフィー分離も含まれません。この調製物は、グルクロニダーゼとスルファターゼ両方の活性を有します。分析中に高い感度を得るには、検出前の酵素的加水分解が不可欠です。試料は、加水分解後に質量分析、ガスクロマトグラフィー、HPLC、またはイムノアッセイによって分析できます。ドーピング分析については、グルクロニダーゼ活性に加えて、スルファターゼ活性も試料中に存在するすべての薬物接合体の検出に不可欠です。β-グルクロニダーゼ／アリルスルファターゼは、生物学的流体、主に尿中のグルクロニドと硫酸エステルの酵素的加水分解にも使用されます。

特異性

β-グルクロニダーゼ／アリルスルファターゼは、多くの種類のβ-グルクロニドと硫酸エステルに幅広い特異性を示します。

β-グルクロニダーゼの特異性：
β-D-グルクロン酸が、水酸基を含むさまざまな化合物と形成するグルコシドは、β-グルクロニダーゼ存在下で容易に加水分解されます。

• このような化合物には、エストリオール(K_m = 0.42 mM、pH 4.5)、アンドロステロン、プレグナンジオール、テトラヒドロコルチゾンなどのステロイド、
• フェノールフタレイン(K_m = 0.39 mM)、4-ニトロ-フェノール、4-メチルウンベリフェロンなどのフェノール、
• クロラムフェニコール、テトラヒドロカンナビノールなどの薬物、
• およびチロキシン、ビリルビンなどの代謝物質が含まれます。

ヒアルロン酸などのβ-グルクロン酸残基を含む多糖類もまた加水分解されます。
β-グルクロニダーゼは炭水化物部分に対して高度に特異的です。α-グルコシドもβ-グルコシドウロン酸も加水分解されません。一方、β-グルクロン酸残基に結合する残基の性質は、ほとんど重要ではありません。

特異性：5.5 U/ml、+38°Cでフェノールフタレイン-β-グルクロニドを基質として(4.5 U/ml、+25°Cで、4-ニトロ-フェニル-β-D-グルクロニドを基質として = 100,000フィッシュマン単位/ml、+38°Cでフェノールフタレイン-β-グルクロニドを基質として)。1 フィッシュマン単位は、+38°Cで1時間に1 μgのフェノールフタレインをフェノールフタレイン-β-グルクロニドから遊離します。

アリルスルファターゼの特異性：
多くのフェノールの硫酸エステルがアリルスルファターゼ存在下で加水分解されます。その例として、硫酸エストロン、硫酸水素4-ニトロフェニル(K_m = 1.8 mM、pH 7.3)、4-ニトロ-ピロカテコール2-サルフェート(K_m = 1.25 mM、pH 7.5)、フェノールフタレイン二硫酸塩などの硫酸ステロイドが挙げられます。

特異性：2.6 U/ml、+38°Cでフェノールフタレイン二硫酸塩を基質として(14 U/ml、+25°Cで硫酸4-ニトロフェニルを基質として = 800,000ロイ単位/ml、+38°Cで硫酸2-ヒドロキシ-5-ニトロフェニルを基質として)。1ロイ単位は、+38°Cで1時間に1 μgの硫酸2-ヒドロキシ-5-ニトロフェニルを遊離します。

β-グルクロニダーゼの特異性：
β-D-グルクロン酸が、水酸基を含むさまざまな化合物と形成するグルコシドは、β-グルクロニダーゼ存在下で容易に加水分解されます。

• このような化合物には、エストリオール(K_m = 0.42 mM、pH 4.5)、アンドロステロン、プレグナンジオール、テトラヒドロコルチゾンなどのステロイド、
• フェノールフタレイン(K_m = 0.39 mM)、4-ニトロ-フェノール、4-メチルウンベリフェロンなどのフェノール、
• クロラムフェニコール、テトラヒドロカンナビノールなどの薬物、
• およびチロキシン、ビリルビンなどの代謝物質が含まれます。

ヒアルロン酸などのβ-グルクロン酸残基を含む多糖類もまた加水分解されます。
β-グルクロニダーゼは炭水化物部分に対して高度に特異的です。α-グルコシドもβ-グルコシドウロン酸も加水分解されません。一方、β-グルクロン酸残基に結合する残基の性質はほとんど重要ではありません。

アリルスルファターゼの特異性：
多くのフェノールの硫酸エステルは、アリルスルファターゼ存在下で加水分解されます。その例として、硫酸エストロン、硫酸水素4-ニトロフェニル(K_m = 1.8 mM、pH 7.3)、4-ニトロ-ピロカテコール2-サルフェート(K_m = 1.25 mM、pH 7.5)、フェノールフタレイン二硫酸塩などの硫酸ステロイドが挙げられます。

アプリケーション

β-グルクロニダーゼ／アリルスルファターゼは、ステロイドβ-グルクロニドと硫酸エステルの同時酵素加水分解のために研究および分析実験室で広く使用されています。酵素は、GC-MS、HPLC、イムノアッセイ、またはドーピング分析、尿やその他の体液に含まれるステロイド接合体(グルクロニド)と硫酸エステルの加水分解といったその他の分析方法を行う前、試料調製中にグルクロニドおよび硫酸エステルを切断するために使用されます。

特徴および利点

• グルクロニドと硫酸エステルの両方を脱接合し、検出します。
• ステロイド、ベンゾジアゼピン、カンナビノイド、オピオイド、およびその他の薬剤を迅速に選別します。

構成

EC 3.1.6.1および3.2.1.31

原理

グルクロン酸接合は代謝の基本原理の1つです。ヒトの体に存在するほとんどの物質が、UDP-グルクロノシルトランスフェラーゼ(UGTs)によるグルクロン酸接合を含む代謝処理を受けます。この酵素は、多くの生物学的かつ薬理学的活性をもつ内因性および外因性分子へのグルクロニル基の転移を触媒します。グルクロニドは、通常、元の分子と比較してより溶解しやすく、毒性が低く、ヒトの体からより容易に排泄されます。
さらに、ヒトの体内では、スルホトランスフェラーゼによって薬剤や化学物質が硫酸化されることがあります。一般に、硫酸化はグルクロン酸接合より予測が困難です。それは、スルホトランスフェラーゼには多くのアイソザイムが存在し、物質のグルクロン酸接合対硫酸化比率が個々に異なるからです。

単位の定義

グルクロニダーゼ：
標準単位
β-グルクロニダーゼ活性の標準単位は、+25°Cの温度とpH 4.5において、1 μMで4-ニトロフェニルβ-D-グルコシドウロン酸からの4-ニトロフェノールの遊離を速める酵素活性です。
フェノールフタレイン単位
β-グルクロニダーゼ活性のフェノールフタレイン単位は、+38°Cの温度において、1 μMでフェノールフタレインβ-D-グルコシドウロン酸からのフェノールフタレインの遊離を速める酵素活性です。
約4.5標準単位は5.5フェノールフタレイン単位と同等です。
フィッシュマン単位
β-グルクロニダーゼ活性のフィッシュマン単位は、+38°Cの温度において、1 μgでフェノールフタレインβ-D-グルコシドウロン酸からのフェノールフタレインの遊離を速める酵素活性です。
約1標準単位は22,000フィッシュマン単位と同等です(1フェノールフタレイン単位は、19,000フィッシュマン単位と同等です)。
アリルスルファターゼ：
標準単位
アリルスルファターゼ活性の標準単位は、+25°Cの温度とpH 6.2において、1 μMで硫酸4-ニトロフェニルからの4-ニトロフェノールの遊離を速める酵素活性です。
フェノールフタレイン単位
アリルスルファターゼ活性のフェノールフタレイン単位は、+38°Cの温度とpH 6.2において、1 μMでフェノールフタレイン二硫酸塩からのフェノールフタレインの遊離を速める酵素活性です。
約5.4標準単位は1フェノールフタレイン単位と同等です。
ロイ単位
アリルスルファターゼ活性のロイ単位は、+38°Cの温度とpH 6.2において、1 μgで2-ヒドロキシ-5-ニトロフェニル硫酸水素塩(4-ニトロピロカテコール2-硫酸塩)からの4-ニトロピロカテコールの遊離を速める酵素活性です。
約1標準単位は57,000ロイ単位と同等です(1フェノールフタレイン単位は308,000ロイ単位と同等です)。

物理的形状

生理食塩水中溶液、安定化済み

調製ノート

作用濃度: この製品は多くの用途で使用直前に水で希釈できるか、または非希釈で使用できます。
注：このβ-グルクロニダーゼ／アリルスルファターゼ調製物は非常に濃縮されており、一部の用途では希釈しなければなりません。また、プロトプラストの調製では、酵母の特定の菌株に使用するための正確な濃度を実験的に見出さなければなりません。
保管条件(標準溶液)：注: 希釈した調製物のアリコット部分は-15～-25°Cで保管できます。1～2回を超えて融解および再凍結してはなりません。それより低温で保管しても、2～8°Cで保管したものより使用期限が延びることはありません。

保管および安定性

凍結と解凍の繰り返しを避けてください（2回を超えない）。

その他情報

生命科学研究用途に限ります。診断措置において使用しないでください。

安全性情報

• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: nwg
• 引火点(°F): No data available
• 引火点(℃): No data available