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アプリケーション
用途:
- 5′末端標識によるシ-クエンシングまたは核酸タギング(DNAおよびRNA)。
- オリゴヌクレオチドの5′末端リン酸化。
- ホスホリルポリヌクレオチドからの 3′リン酸基の除去。
構成
T4 Polynucleotide Kinase is supplied in a solution of 50% glycerol (v/v), 20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 25 mM KCl, 2mM DTT, 0.1 mM EDTA, and 0.1 μM ATP.
原理
ポリヌクレオチドキナ-ゼは、ATPのγ位リン酸を、1本鎖・2本鎖核酸(DNA・RNA)や3′ヌクレオシド一リン酸の、5′水酸基末端へ転移させる「正反応」を触媒します。本酵素はまた、5′末端リン酸基とATP間において、ADPを介した交換反応を触媒します。さらに本酵素は3′-ホスファタ-ゼ活性があり、ホスホリルポリヌクレオチドから3′-リン酸基を除去します。
1.正反応法: [γ-32P]-ATPの標識γリン酸が、基質の5′-水酸基へ転移します。
5′-HO-DNA + [γ-32P]-ATP → 5′-32PO-DNA + ADP
基質に遊離の5′-水酸基が存在しない場合、事前にアルカリホスファタ-ゼによる脱リン酸化が必要です。
2.交換反応法:まず、基質の5′-末端リン酸が、反応混合液中のADPへ転移します。 次に、[γ-32P]-ATPから、標識γ-リン酸が基質の遊離水酸基に転移します。
5′-PO-DNA + ADP → 5′-HO-DNA + ATP
5′-HO-DNA + [γ-32P]-ATP → 5′-32PO-DNA + ADP
1.正反応法: [γ-32P]-ATPの標識γリン酸が、基質の5′-水酸基へ転移します。
5′-HO-DNA + [γ-32P]-ATP → 5′-32PO-DNA + ADP
基質に遊離の5′-水酸基が存在しない場合、事前にアルカリホスファタ-ゼによる脱リン酸化が必要です。
2.交換反応法:まず、基質の5′-末端リン酸が、反応混合液中のADPへ転移します。 次に、[γ-32P]-ATPから、標識γ-リン酸が基質の遊離水酸基に転移します。
5′-PO-DNA + ADP → 5′-HO-DNA + ATP
5′-HO-DNA + [γ-32P]-ATP → 5′-32PO-DNA + ADP
単位の定義
1 unitは、37°C、30分間に、1 nmolの32Pを小球菌ヌクレアーゼ処理DNAの5'末端に移行する反応を触媒する酵素量です。移行は、酸不溶性物質への取り込みにより検出されます。
アナリシスノート
Activity is determined in a reaction mixture containing 40 mM Tris-HCl (pH 7.5), with 10 mM MgCl2, 5 mM dithiothreitol, 0.5 mM 5′-OH polynucleotide ends, and mM [γ-32P]-ATP.
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製品番号
詳細
価格
シグナルワード
Danger
危険有害性情報
危険有害性の分類
Resp. Sens. 1
保管分類コード
10 - Combustible liquids
WGK
WGK 3
引火点(°F)
Not applicable
引火点(℃)
Not applicable
個人用保護具 (PPE)
Eyeshields, Gloves, multi-purpose combination respirator cartridge (US)
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
Jan Code
P4390-500UN:
P4390-VAR:
P4390-BULK:
P4390-100UN:
最新バージョンのいずれかを選択してください：
試験成績書（COA）
Lot/Batch Number
Sandeep K Sharma et al.
Nature chemical biology, 6(12), 914-920 (2010-10-19)
Hsp70-Hsp40-NEF and possibly Hsp100 are the only known molecular chaperones that can use the energy of ATP to convert stably pre-aggregated polypeptides into natively refolded proteins. However, the kinetic parameters and ATP costs have remained elusive because refolding reactions have
Ga Tremblay et al.
Bioanalysis, 3(5), 499-508 (2011-03-11)
Oligonucleotide-based therapeutics are quantified with hybridization assays in biological matrices such as plasma and tissues. Current hybridization methods do not entirely discriminate the parent compound from 5´- or 3´-N-X truncated metabolites. A dual ligation-based hybridization assay was developed to circumvent
Lei Lin et al.
Analytical chemistry, 83(22), 8396-8402 (2011-10-27)
Phosphorylation of DNA with 5'-hydroxyl termini plays a critical role in a majority of normal cellular events, including DNA recombination, DNA replication, and repair of DNA during strand interruption. Determination of nucleotide kinase activity and inhibition is under intense development
Problem-solving test: restriction endonuclease mapping.
József Szeberényi
Biochemistry and molecular biology education : a bimonthly publication of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology, 39(5), 393-395 (2011-09-29)
A role in true-late gene expression for the T4 bacteriophage 5' polynucleotide kinase 3' phosphatase.
K Sirotkin et al.
Journal of molecular biology, 123(2), 221-233 (1978-08-05)
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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