APMB-RO

アルカリホスファターゼ

solution, from bovine (calf) intestine, 2 units/μg protein, optimum pH 7.5-9.5

• 別名: ALP, CAP, CIAP, cip, ウシ腸ホスファターゼ, オルトリン酸モノエステルホスホヒドロラーゼ
• Enzyme Commission number: 3.1.3.1 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSCコード: 12352204

特性

• 由来生物: bovine (calf) intestine
• 品質水準: 100
• フォーム: solution
• 比活性: 2 units/μg protein
• 包装: pkg of 1,000 U (10713023001 [1 U/μl]); pkg of 1,000 U (11097075001 [20 U/μl])
• メーカー／製品名: Roche
• パラメーター: 37 °C optimum reaction temp.
• 最適pH: 7.5-9.5
• 輸送温度: wet ice
• 保管温度: 2-8°C

詳細

詳細

アルカリホスファターゼ（ALP）は、遍在的に発現する糖タンパク質です。この酵素は細胞膜に結合しています。ALPの活性化には、亜鉛やマグネシウムなどの必須補因子が必要です。アルカリホスファターゼは、リン酸基をさまざまなリン酸化化合物から除去する反応を触媒します。ウシ腸由来のアルカリホスファターゼは、DNAおよびRNAの5′-一リン酸基を加水分解します。また、RNAの5′-二リン酸基および5′-三リン酸基も加水分解します。このため、腸ALPは分子クローニングで一般的に使用される酵素の1つです。

アプリケーション

このウシ腸アルカリホスファターゼの調製物を使用して、5′-末端リン酸をDNAまたはRNAおよび免疫沈降RNAサンプルから除去します。
注：11097075001調製物は、高濃度の酵素（20 U/μL）を含み、大規模実験に便利です。10713023001調製物は、上記よりも濃度が低く（1 U/μL）、小規模実験に便利です。

シーケンス

APは、1分子当たり4原子の亜鉛を含む亜鉛含有酵素です（Efstradiatis、1977）。

単位の定義

1単位のアルカリホスファターゼは、+37℃、アッセイ条件下において1 molの4-ニトロフェニルリン酸を1分で加水分解する酵素活性を持ちます。
注Moessnerらによります。5単位のアルカリホスファターゼ（+37℃、ジエタノールアミンバッファー）は、1単位のアルカリホスファターゼ（∔25℃、グリシン/NaOHバッファー）に対応します。

単位変換：約3.6 U（MBグレードAP）
［∔37℃、4-NPPを基質とする、ジエタノールアミンバッファー、pH 9.8］＝1 U［∔25℃、4NPPを基質とする、グリシンバッファー、pH 10.5］。

容量活性：11097075001調製物で20 U/μL。 10713023001調製物で1 U/μL。

物理的形状

10713023001: 保存バッファーを溶媒とする酵素溶液（1 U/μL）、pH 7.6（20℃）

11097075001：保存バッファーを溶媒とする酵素溶液（20 U/μL）、pH 7.6（20℃）

調製ノート

使用溶液：保存バッファー：25 mMトリス-HCl、1 mM MgCl₂、0.1 mM ZnCl₂、グリセロール50％（v/v）、pH 7.6（4℃）。
保存条件（使用溶液）：保存バッファーで希釈したMBグレードAP希釈液（1～5 U/μL）は2～8℃で17ヵ月安定です。
希釈率が高い場合（約0.01 U/μL）、毎日新たに調製し、2～8℃に保ちます。
クローニング中はベクターの自己連結を防ぎます
線形化ベクターに5′-リン酸がない場合、ベクター自体に連結できないか、複数のベクターコピーを含むコンカテマーが生成されません。したがって、連結反応産物は、連結プラスミドではなく、主として組換えDNAです（ベクター＋DNA挿入物）。
不活性化：容量1/10のEGTAを反応ミックスに加え、∔65℃で10分間インキュベートします。酵素の完全な不活性化を確保するために、フェノール/クロロホルム/イソアミルアルコールでミックスを抽出してすべてのタンパク質を除去します。

その他情報

一般試験室に使用します。

安全性情報

• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): does not flash
• 引火点(℃): does not flash